苟元彬
- 作品数：9 被引量：21H指数：3
- 供职机构：第三军医大学大坪医院野战外科研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 角质细胞生长因子受体腺病毒表达载体在脂多糖所致肺泡上皮细胞损伤修复中的应用被引量：3
- 2005年
- 目的观察KGFR腺病毒表达载体在脂多糖(LPS)致A549细胞损伤模型中转基因表达KGFR的情况及其促使A549细胞对抗LPS损伤的效果,为基因治疗急性肺损伤探索有效途径。方法KGFR腺病毒表达载体感染LPS致伤前后的A549细胞,通过形态学观察转基因作用对LPS致伤前后A549细胞的影响,并运用western blot检测KGFR腺病毒表达载体在LPS致伤前后的A549细胞中转基因表达KGFR蛋白情况。结果KGFR腺病毒表达载体感染LPS致伤前后的A549细胞,转基因组对抗LPS致伤作用明显,western blot检测表明KGFR腺病毒表达载体转基因表达KGFR蛋白效果显著(P<0.05)。结论KGFR腺病毒表达载体能够转基因表达KGFR蛋白,并具备转基因治疗急性肺损伤的能力。
- 刘斌剑王建民陈林宋瑞华赵玲宋维威苟元彬
- 关键词：腺病毒载体急性肺损伤脂多糖
- FGFR2条件性敲除载体的构建及中靶ES细胞的筛选与鉴定被引量：2
- 2005年
- 目的 构建成纤维细胞生长因子2型受体(Fibroblastgrowthfactorreceptor 2,FGFR2)条件性敲除载体,并对中 靶ES细胞进行筛选与鉴定,为最终建立FGFR2条件性敲除小鼠模型,研究FGFR2在小鼠骨骼、肺脏等组织、器官发育过程 中的作用打下基础。方法 在分析小鼠FGFR2基因组DNA序列结构的基础上,设计并构建了条件性敲除小鼠FGFR2外 显子7、8的基因打靶载体,采用电穿孔法在ES细胞中进行了打靶重组,G418与Ganciclovir被用于对电转的ES细胞进行正 负筛选,最后对ES细胞克隆进行了Southern与PCR鉴定。结果 将所构建的条件性打靶载体通过电穿孔转染入表达重组 酶(Cre)的AmI细菌,经PCR、酶切和测序鉴定,Cre酶能正确将条件性打靶载体的外显子7、8和选择性标记Neo基因经重 组剔除,电转了基因敲除载体的ES细胞经正负筛选后共挑取克隆83个;经5′端探针Southern杂交鉴定,发现4株阳性克 隆;该4株克隆再经3′端探针Southern杂交鉴定,发现2株阳性克隆;最后经Southern和PCR检测发现1株ES细胞克隆仍 保留外显子7、8两侧的loxP序列。结论 FGFR2条件性基因敲除ES细胞已成功构建。
- 王建民宋瑞华杜晓兰尹良军陈波孙晶苟元彬赵玲陈林
- 关键词：同源重组ES细胞
- 体外LPS诱导血管内皮细胞通透性改变及其与连接蛋白43的关系被引量：8
- 2010年
- 目的研究缝隙连接蛋白(connexin,Cx)43在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的大鼠血管内皮细胞(vascular endothelial cell,VEC)通透性中的表达变化及其意义。方法以1、2、3、4μg/ml LPS刺激原代培养的大鼠VEC,观察作用15、30 min,1、2、3、4、5、6、7 h后VEC增殖活力和通透性的变化;2μg/ml LPS刺激VEC后,采用RT-PCR和Western blot等方法检测Cx43的表达变化;分析VEC通透性和Cx43表达之间的相关性。结果 1、2μg/ml的LPS对VEC增殖活力无明显影响,3、4μg/ml的LPS明显降低了VEC的增殖(P<0.01);2μg/ml的LPS能够较好地模拟脓毒性休克的血管高通透性(P<0.01);用此浓度的LPS刺激VEC后Cx43的mRNA和蛋白表达均逐渐降低(P<0.01);Cx43的表达与LPS引起的VEC通透性改变呈负相关关系(r=-0.877,P<0.01)。结论 Cx43可能参与了脓毒性休克后VEC通透性的调节;Cx43可能具有抑制脓毒性休克后血管内膜通透性的作用。[关键词]脓毒性休克;脂多糖;血管通透性;血管内皮细胞;
- 明佳袁侨英周艳苟元彬刘良明
- 关键词：脓毒性休克血管通透性血管内皮细胞连接蛋白43
- 低氧诱导因子-1α条件性敲除载体的构建被引量：1
- 2004年
- 目的 通过建立低氧诱导因子 1α(hypoxiainduciblefactor 1α ,HIF 1α)条件性敲除载体 ,并在体外验证引入的LoxP介导的同源重组等情况 ,为最终建立HIF 1α条件性敲除小鼠模型奠定基础。方法 以含有neo、tk基因的pLoxPneo载体为基本骨架 ,用涵盖 3、4、5、6号外显子的HIF 1α基因组片段 ( 7.6kb)为构建载体的同源DNA片段 ,通过引入LoxP等步骤 ,最终建立旨在条件性敲除HIF 1α第 5号外显子的条件性敲除载体。结果 经酶切 ,测序和在体外细菌中用cre介导的重组等方法证明成功地构建了HIF 1α的条件性敲除载体。结论 成功地构建了HIF 1α的条件性敲除载体 ,为今后进一步获得HIF
- 赵玲宋瑞华孙晶苏楠苟元彬宋维威王建民陈林
- 关键词：低氧诱导因子-1Α同源重组CRE基因
- 缺氧诱导因子-1α在失血性大鼠心肌中的表达
- 2011年
- 目的探讨不同程度失血大鼠心肌细胞中缺氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor—1α，HIF-1α）蛋白和mRNA的表达及意义。方法选用清洁级SD大鼠，建立不同程度的失血模型，随机分为假手术对照组（CON）、失血10％（10-BL）组、失血20％（20-BL）组和失血30％（30-BL）组，利用Powerlab八道生理记录仪监测心功能指标，采用RT—PCR检测HIF—1α mRNA在失血后30min、1h大鼠心肌组织中的表达情况，并用免疫组化染色检测HIF—1α在心肌细胞中的分布。结果不同程度失血后，心功能均降低，1h比30min降低明显（P〈0．05）；RT—PCR半定量结果显示，与CON组相比，10-BL、20-BL、30-BL组HIF—1αmRNA表达逐渐增高（P〈0．05）；免疫组化结果表明，HIF—1α主要分布在心肌细胞细胞质中，在细胞核内也有分布。结论随失血程度增加，时间延长，HIF—1α表达增加，HIF-1α可能参与失血导致的低氧状态下心肌代谢的适应性调节。
- 刘帅杨戎王建民胡维张波苟元彬
- 关键词：失血心功能
- KGFR腺病毒表达载体在LPS所致肺泡上皮细胞损伤修复中的应用
- 目的观察K GFR腺病毒表达载体在LPS致A549细胞损伤模型中转基因表达KGFR的情况及其促使A549细胞对抗LPS损伤的效果,为基因治疗急性肺损伤探索有效途径。方法KGFR腺病毒表达载体感染LPS致伤前后的A549细...
- 刘斌剑王建民陈林宋瑞华赵玲宋维威苟元彬
- 文献传递
- Bek腺病毒表达载体的构建及其在哺乳类动物细胞中的表达被引量：2
- 2006年
- 目的构建Bek腺病毒表达载体并观察该载体在成纤维细胞中转基因表达FGFR2-Ⅲc的情况,为研究骨骼发育打下基础。方法利用AdEasy-1腺病毒载体系统构建Bek腺病毒表达载体;该载体感染成纤维细胞后,通过荧光定量PCR(FQ-PCR)检测Bek腺病毒表达载体转基因表达FGFR2-ⅢcmRNA情况。结果Bek腺病毒表达载体感染成纤维细胞后,成纤维细胞有绿色荧光表达,荧光定量PCR检测表明Bek腺病毒表达载体转基因表达FGFR2-ⅢcmRNA效果明显(P<0·05)。结论Bek腺病毒表达载体构建成功,能够转基因表达FGFR2-ⅢcmRNA,为研究骨骼发育和成骨机制提供了基础。
- 刘斌剑王建民陈林宋瑞华赵玲宋维威苟元彬
- 关键词：成纤维细胞生长因子受体腺病毒载体
- fgfr3基因敲除载体的构建及中靶ES细胞的筛选与鉴定
- 2005年
- 目的构建成纤维细胞生长因子3型受体(nbroblast growth factor receptor-3,FGFR3)基因敲除载体,并对中靶ES细胞进行筛选与鉴定,为最终建立FGFR3条件性敲除小鼠模型或FGFR3功能减低小鼠,研究FGFR3在小鼠骨骼等器官发育、损伤修复过程中的作用打下基础。方法在分析小鼠fgfr3基因组DNA序列结构的基础上,设计并构建了针对小鼠fgfr3外显子9、10的条件性基因敲除载体,采用电穿孔法转染ES细胞,用G418与Gancyclovir对电转的ES细胞进行正负筛选,最后对ES细胞克隆做Southern与PCR鉴定。结果对ES细胞正负筛选后共挑取180个克隆；用5′端探针进行Southern杂交鉴定后发现2株阳性克隆；经PCR检测发现这两株克隆fgfr3的8号内含子内的LoxP序列丢失。结论得到两株fgfr3基因中只含有neo基因的ES细胞克隆,fgfr3的表达是降低的,可用来建立FGFR3功能降低的小鼠。
- 苏楠宋维威王建民宋瑞华刘志君苟元彬杜晓兰陈林
- 关键词：同源重组ES细胞
- 改进Tripure法提取鉴定小鼠组织总RNA被引量：5
- 2006年
- 目的改进从新鲜动物组织提取、鉴定纯度及完整性较高总RNA的技术方法。方法实验于2005-05-16/08-25在解放军第三军医大学大坪医院创伤分子生物学实验室进行。用健康4～6周龄昆明种小鼠70只,颈椎脱臼法处死,取肺组织约100mg。在TripureIsolation试剂说明书基础上,对提取组织RNA的操作步骤进行调整改进,包括:①迅速组织取材,可不将组织切割成碎块而直接中速匀浆。②匀浆头夹层每次使用前后一定要彻底清洗干净;新鲜组织使用5mL离心管匀浆。③吸取含RNA的三相分层上清液时,吸取250μL即可。④RNA沉淀后,用无水乙醇再洗1次。并对常规琼脂糖凝胶电泳做适当改进用于鉴定RNA的质量,改进的电泳方法:①电泳RNA所用器械均用肥皂水、体积分数为0.03的H2O2清洗2遍,1g/L焦碳酸二乙酯处理的灭菌双蒸水冲洗,室温晾干备用。②用新配的0.5×TBE配制10g/L琼脂糖凝胶,倒胶时Goldview核酸染料直接加入凝胶中。③琼脂糖凝胶板放入电泳槽后再加入经灭菌的0.5×TBE。电泳电压5V/cm,电泳时间1.5h后凝胶成像系统拍照记录。结果①取提取的总RNA5μg进行电泳1.5h后,可见28S,18S,5S3条清晰的RNA条带,其中28S条带的亮度约为18S条带的2倍,5S条带隐约可见。②用该法提取的新鲜组织RNA,经电泳鉴定及反转录-聚合酶链反应检测,显示RNA的纯度及模板性较好。全部操作过程可在2.5h内完成。结论用改进方法提取的新鲜组织RNA质量稳定,电泳鉴定快速可靠。
- 王晋王建民苟元彬王燕
- 关键词：RNA逆转录聚合酶链反应电泳
