葛艳
- 作品数：9 被引量：69H指数：5
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- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 猪“O”型口蹄疫基因工程苗免疫猪的免疫效力、安全性及抗体消长被引量：3
- 2000年
- 对猪“Ｏ”型口蹄疫基因工程疫苗进行免疫效力和安全性的观察，同时检测了免疫猪的抗体消长。结果表明，该基因工程疫苗对猪体是安全、有效的。免疫猪抗体乳鼠中和指数在免疫后４个月仍可达２．０，血凝价仍达２７．５。
- 徐泉兴尤永进葛艳饶忠吴永明何志华邵水龙王其泉朱宝仙周金鑫盛祖恬孙理云何永强
- 关键词：口蹄疫免疫效力安全性抗体消长
- 口蹄疫病毒非结构蛋白3abc基因的克隆与表达被引量：10
- 2003年
- 口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus , FMDV)非结构蛋白(NSP)-3ABC可用于注苗与感染动物的鉴别诊断,合成该基因的PCR引物,并在引物5 端和3 端分别加入含BamH I和Hind III限制性酶切位点序列。以FMDV毒株基因组RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增3abc基因,得到的基因片段与T载体连接,转化DH5α。提取重组载体pT-3ABC,经BamH I/Hind III双酶切后与载体pET32a连接,转化宿主菌BL21(DE3)plysS,IPTG诱导表达目的蛋白。SDS-PAGE及Western Blotting检测和鉴定结果表明,在大肠杆菌中成功表达了NSP-3ABC蛋白,分子量约56kDa,且该表达产物可与FMDV感染的动物血清产生免疫反应。ELISA试验结果显示,表达蛋白可用于FMDV注苗与感染动物的鉴别诊断。
- 尤永进朱彩珠葛艳陈波张强饶忠徐泉兴卢永干
- 关键词：口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC基因基因克隆口蹄疫RT-PCR
- 小鹅瘟病毒GPV-YG株主要开放性阅读框架核苷酸序列分析被引量：2
- 2005年
- 通过PCR技术分段扩增小鹅瘟病毒(Gooseparvovirus,GPV)扬州分离株GPV YG的2个主要开放性阅读框架(openreadingframe,ORF)基因,对扩增产物进行核苷酸序列测定,其结果在GenBank登录。将上述序列与登录的国外参考株GPV-B株作比较,GPV-YG主要ORF核苷酸序列与GPV-B的同源性为94%,显示二者亲缘关系密切。在此基础上,分别确定了GPV-YG编码结构蛋白和非结构蛋白的基因组序列,并推导出GPV-YG结构蛋白和非结构蛋白的相应的氨基酸序列,GPV-YG与GPV B结构蛋白的氨基酸序列同源性为96.4%,非结构蛋白同源性为97.9%,由此进一步分析了GPV-YG结构蛋白和非结构蛋白的氨基酸序列与功能特征。同时,将GPV-YG主要ORF与番鸭细小病毒(MuscovyDuckParvovirus,MDPV)FM作比较,核苷酸序列同源性为80%,非结构蛋白推导氨基酸序列同源性为89.6%,结构蛋白为84.6%。
- 葛艳尤永进徐泉兴陈谊饶忠
- 关键词：小鹅瘟病毒核苷酸序列分析小鹅瘟
- 大肠杆菌热不稳定肠毒素无毒突变体LTR72基因重组质粒的构建
- 2003年
- 用PCR方法扩增大肠杆菌LT基因 ,将LT基因重组入pET32a质粒载体 ,对构建的重组质粒pET LT进行酶切、核苷酸序列分析 ,结果表明 ,插入片段LT的核苷酸序列与预期一致 ,且阅读框正确。并在影响LT毒性的关键氨基酸位点 ,用PCR方法引入点突变 (丙氨酸→精氨酸 ) ,成功构建了含有LTR72突变体基因的重组质粒pET LTR72。
- 葛艳尤永进徐泉兴陈波饶忠
- 关键词：大肠杆菌基因重组质粒免疫原性核苷酸序列
- NSP-ELISA鉴别FMDV感染与免疫被引量：24
- 2003年
- 利用大肠埃希氏菌表达的口蹄疫病毒 (FMDV)非结构蛋白 (NSP) 3ABC多肽作为抗原 ,建立了一种可区分FMDV感染与接种灭活疫苗免疫牛的间接酶联免疫吸附试验 (I ELISA)。通过对 336份正常牛血清、50 8份注射疫苗牛血清、60份人工感染牛血清和 58份豚鼠免疫血清的检测 ,确定了血清抗体阴性与阳性效价的临界值。试验证明 ,该方法简易、快速 ,灵敏度比VIAA
- 朱彩珠张强常惠芸卢永干邱孝高尤永进葛艳陈波饶忠徐泉兴
- 关键词：口蹄疫病毒非结构蛋白间接酶联免疫吸附试验免疫
- 口蹄疫病毒非结构蛋白3B真核表达载体的构建及表达被引量：14
- 2003年
- 设计、合成FMDV非结构蛋白 3B基因的PCR引物 ,并在引物 5’端和 3’端分别加入含BamHI和HindⅢ限制性酶切位点序列。以FMDV基因组RNA为模板 ,利用RT_PCR技术扩增 3B基因 ,得到的基因片段经BamHI/HindⅢ双酶切后与转座载体pFASTBACHTa连接 ,转化宿主菌DH10BAC ,在含庆大霉素、卡那霉素、X_gal、IPTG的LB平板上 37℃培养 2 4h ,提取白色菌落 ,从中提取重组穿梭载体Bacmid 3B ,与脂质体共同转染昆虫细胞sf9,得到重组杆状病毒 ,病毒经传代扩增后感染High 5细胞 ,表达目的蛋白———FMDV非结构蛋白 3B。SDS_PAGE及WesternBlot结果显示 ,本研究成功构建了Bacmid_3B重组表达载体 ,并在昆虫细胞中表达了NSP_3B蛋白 ,该表达产物可与FMDV感染的猪、牛血清产生免疫反应。
- 尤永进葛艳陈波饶忠徐泉兴朱彩珠张强卢永干
- 关键词：口蹄疫病毒非结构蛋白真核表达载体克隆
- 产肠毒素大肠杆菌肠毒素LTB、STⅠ和STⅡ融合基因的构建与表达研究被引量：15
- 2002年
- PCR方法扩增产肠毒素大肠杆菌 (EnterotoxigenicEscherichiacoli,ETEC)LTB、STⅠ、STⅡ基因 ,将LTB、STⅠ、STⅡ基因重组入pET32a质粒载体 ,对构建的重组质粒pBST进行酶切分析、PCR检测以及核苷酸序列分析 ,结果表明 ,插入片段LTB_STⅡ_STⅠ的核苷酸序列与预期一致 ,且阅读框正确。pBST在宿主菌BL2 1(DE3 )RIL中的表达产物经SDS_PAGE初步分析 ,显示重组融合蛋白的分子量约为 40kD ,其表达量约占菌体总蛋白的 46 %。
- 葛艳尤永进徐泉兴饶忠
- 关键词：产肠毒素大肠杆菌肠毒素STI融合基因幼畜
- 大肠杆菌热敏性肠毒素作为疫苗粘膜免疫佐剂功能研究
- 刘惠莉赵艳敏潘洁袁世山唐思静葛艳师小潇邢继兰张建武陈波饶柏忠徐泉兴
- 该研究通过定点突变技术，对决定LT蛋白毒性的几个关键位点进行突变，获得3个单位点突变体和3个双位点突变体，利用原核表达系统获得突变体蛋白的表达。通过对纯化的各突变体蛋白毒性、酶活性检测，筛选毒性降低的重组蛋白，与疫苗经粘...
- 关键词：
- 关键词：粘膜免疫佐剂免疫接种传染病预防
- 用3AB-ELISA鉴别猪口蹄疫病毒感染与疫苗免疫猪的研究被引量：13
- 2005年
- 采用大肠埃希氏菌表达的口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白3AB(FMDV 3AB)多肽为抗原,A G蛋白 辣根过氧化物酶为酶结合物,过氧化氢 四甲基联苯胺为底物溶液,建立了一种可鉴别FMD感染与灭活疫苗免疫猪血清抗体的间接酶联免疫吸附试验(I ELISA),即3AB ELISA。通过对1779份健康猪、免疫猪及人工感染猪血清的检测,确定了该I ELISA的阳性 阴性判定临界值。该检测方法比VIAA AGID法检出率高,尤其是采用A G蛋白酶结合物后操作更简便。
- 朱彩珠尤永进葛艳陈波饶忠卢永干徐泉兴张强
- 关键词：口蹄疫病毒非结构蛋白间接ELISA
