赵焕英 作品数:105 被引量:406 H指数:9 供职机构: 首都医科大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家重点基础研究发展计划 北京市自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
雌激素及其受体调节剂对去势APOE基因敲除小鼠胸主动脉中NF-κB和MMP-9的影响 2015年 目的:观察雌激素及其受体调节剂对去势APOE基因敲除(APOE-/-)小鼠胸主动脉血管组织中NF-κB和MMP-9的影响。方法:44只APOE-/-小鼠喂养4周,确定动脉粥样硬化斑块形成后,将其随机分成模型组和5组不同给药组:生理盐水0.2 m L/d(模型组);戊酸雌二醇0.13 m L/d+地屈孕酮0.13 m L/d(HT组);ICI皮下注射0.13 m L/周+戊酸雌二醇0.13 m L/d(ICI+E2组);ICI皮下注射0.13 m L/周+戊酸雌二醇0.13 m L/d+地屈孕酮0.13 m L/d(ICI+HT组);戊酸雌二醇0.13 m L/d+PHTTP 0.13 m L/d(PHTTP+E2组);戊酸雌二醇0.13m L/d+地屈孕酮0.13 m L/d+PHTTP 0.13 m L/d(PHTTP+HT组)。8周后,获取动脉粥样硬化斑块的胸主动脉组织后行总RNA提取、逆转录,利用real-time PCR检测小鼠胸主动脉NF-κB和MMP-9的m RNA含量。结果:各组NF-κB m RNA的表达差异有统计学意义(P<0.05),而MMP-9 m RNA的表达差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组相比,PHTTP+E2和PHTTP+HT组NF-κB表达显著升高(P=0.047和P=0.035),ICI+HT组NF-κB的表达明显低于PHTTP+HT组(P=0.028);模型组、HT组、ICI+E2组及ICI+HT组间NF-κB的表达差异不明显(与模型组相比,P分别为0.072,0.068和0.054)。结论:ERα介导的激素替代治疗(PHTTP+E2和PHTTP+HT)使NF-κB的表达升高,提示ERα可能对动脉粥样硬化斑块稳定性不利。 陈瑛 赵焕英 任新瑜关键词:雌激素替代疗法 雌激素受体Α 雌激素受体Β 骨髓间充质干细胞基因工程改造方法的比较 被引量:6 2007年 目的:对脂质体介导、反转录病毒载体介导、腺相关病毒载体介导这3种常用的基因转染方法进行比较,寻找一种适合于骨髓间充质干细胞的基因转移方法。方法:实验于2004-10/2005-06在首都医科大学北京神经科学研究所完成。①在脂质体介导下,将增强的绿色荧光蛋白基因导入骨髓间充质干细胞,然后通过G418抗性筛选,观察转染效率。②反转录病毒介导的基因转染,首先利用LipofectAMINETM 2000转染包装细胞系PT67,获得重组反转录病毒上清,然后用病毒上清直接感染骨髓间充质干细胞。转染后的细胞同样用G418筛选,得到阳性克隆后进行定点消化、扩增。③在腺相关病毒介导的基因转染过程中,首先通过磷酸钙沉淀法转染包装细胞系HEK293,得到重组AAV-LacZ病毒颗粒直接感染骨髓间充质干细胞,1周后进行β-gal染色,计算转染效率。结果:①脂质体介导的基因转染24h后在荧光显微镜下观察,可见少量细胞呈现绿色荧光蛋白阳性,阳性率大约为5%。抗生素筛选3周后细胞全部死亡,经过多次试验均未得到阳性细胞克隆。②反转录病毒感染后,在荧光显微镜下观察可见少量骨髓间充质干细胞表达增强的绿色荧光蛋白。当加入G418筛选后,大量细胞死亡,1周后仅有极少数细胞存活。继续培养3~4周后,细胞形成克隆,定点消化细胞克隆,扩增后95%的细胞表达绿色荧光蛋白。③腺相关病毒上清感染骨髓基质细胞1周后,用β-gal染色估计骨髓间充质干细胞转染效率大约为75%。但传代后阳性细胞所占比例明显下降,大约2%。结论:骨髓间充质干细胞易于接受外援基因。3种基因转移方法相比:脂质体转染法转染效率最低,不适合骨髓间充质干细胞;反转录病毒载体法感染效率最高,最适用于骨髓间充质干细胞;而腺相关病毒载体法感染效率较高,但该载体系统没有抗生素筛选,所以无法使阳性细胞得到纯� 鲁玲玲 赵焕英 赵春礼 孙晓红 段春礼 杨慧关键词:间质干细胞 骨髓细胞 转染 腺病毒科 帕金森病相关蛋白PINK1和α-突触核蛋白相互作用研究 被引量:3 2008年 目的:利用蛋白质组学方法和激光扫描共聚焦显微镜来鉴定帕金森病相关蛋白PINK1和α-突触核蛋白(α-synuclein)之间的相互作用关系及两种蛋白在MN9D细胞中的分布。方法:将α-synuclein基因插入pGEX-4T-1载体,经DNA测序证明形成GST融合蛋白,经大肠杆菌BL-2l表达纯化后,与MN9D细胞裂解液共孵育,检测PINK1与α-synuclein蛋白间的相互作用。并应用MN9D细胞的内源性PINK1与α-synuclein进行免疫共沉淀实验,进一步验证两蛋白之间的相互作用。MN9D细胞经免疫细胞化学染色,利用激光扫描共聚焦显微镜观察两种蛋白的细胞内分布及共定位状态。结果:利用GST-α-synuclein融合蛋白捕获及免疫共沉淀技术,检测到特异的PINK1条带。激光扫描共聚焦显微镜检测到两者存在部分共定位。结论PINK1和α-synuclein在体外和细胞内均可发生相互作用并在MN9D细胞中存在共定位关系。 范春香 崔韬 谷利 张韬 刘琦 赵焕英 赵春礼 杨慧关键词:PINK1 Α-SYNUCLEIN 蛋白质相互作用 共定位 纤维粘连蛋白基因ED-B片段在涎腺肿瘤中的表达 被引量:2 2005年 目的:研究纤维粘连蛋白基因ED-B片段在涎腺正常组织及其良、恶性肿瘤组织中的表达情况,探讨其与涎腺良、恶性肿瘤发生、发展的关系。方法:分别提取涎腺正常组织及其良、恶性肿瘤组织的总RNA,RT-PCR法扩增ED-B片段,重组于pGEM-T easy载体,酶切制备成模板,体外逆转录方法合成cRNA探针,通过RT-PCR和原位杂交方法分别检测ED-B mRNA的表达情况。结果:ED-B-在正常涎腺及其良、恶性肿瘤组织中均呈高表达;ED-B+在正常腺体组织中不表达,而在良性肿瘤中有表达,且在恶性肿瘤中其阳性表达程度增高。结论:随着涎腺向肿瘤、恶性肿瘤方向的转化,FN基因ED-B剪切片段的表达逐渐增强。 王鸿琳 赵焕英 李翠英关键词:涎腺 肿瘤 纤维粘连蛋白 PTN及其受体在诱导人脐血间充质干细胞分化为多巴胺能神经元中的作用及其机制研究 薛丹丹 季风清 孙海梅 赵焕英 张晓明 杨慧人胰岛素样生长因子-1基因的克隆、表达和活性检测 被引量:5 2003年 目的 克隆人胰岛素样生长因子Ⅰ型 (hIGF 1) ,构建真核表达载体并进行表达及活性检测 ,为IGF 1基因治疗糖尿病奠定基础。 方法 提取胎儿肝脏总RNA ,RT PCR法扩增IGF 1cDNA片段 ,重组于pUCM T载体 ,测序正确后构建表达载体 ,转染猴肾成纤维细胞系COS 7,用原位杂交和免疫组织化学检测表达 ,收集培养上清以胰岛素刺激释放实验进行活性测定。 结果 扩增得到 710bp带有Kozak序列的IGF 1cDNA片段 ;成功构建了真核表达载体pCI neo hIGF 1;IGF 1在COS 7细胞得到了表达 ,并具有刺激胰岛素分泌的活性。 结论 新构建的载体pCI neo hIGF 1能在COS 7细胞中表达、分泌 ,且所分泌的IGF 1具有生物活性。 岳凤鸣 赵焕英 杨慧 高福禄 徐群渊关键词:人胰岛素样生长因子-1 基因克隆 基因表达 生物活性 糖尿病 人胚胎脑多巴胺D2受体(D2R)基因的克隆、表达及活性检测 <正> 帕金森病神经元变性早期,DA受体数目及递质转化率增加,引起神经超敏化状态,使纹状体体内DA能神经末梢的突触后神经元对DA的敏感性提高;但到PD晚期,DA受体的数量减少,药物治疗的效果也同时减退。因此,对旨在增 赵焕英 杨慧 岳凤鸣 苏月 张宇新 赵春礼 徐群渊文献传递 利用RNA干扰技术构建IER5-SiRNA-Hela细胞系 被引量:4 2011年 目的观察小干扰RNA(siRNA)转染Hela细胞后,对IER5基因抑制效果,筛选出高效的siRNA转染质粒。方法利用siRNA设计软件,将设计好的RNA片断插入到siRNA表达质粒载体PsilencerTM 3.1-H1 hygro中,测序正确后转染至Hela细胞中。利用Real-time PCR的方法 ,测定siRNA对Hela细胞中IRE5的抑制效果。结果在mRNA水平及Western blot测试,IER5-siRNA-Hela细胞的IER5基因mRNA表达抑制效果明显。从细胞形态上讲,IER5-siRNA-Hela细胞与正常Hela细胞相比,IER5-siRNA-Hela细胞比Hela细胞体积大。结论本实验成功的获得了特异性抑制IER5基因的IER5-siRNA-Hela细胞系。 李莉 赵焕英 杨川杰 鲁苇媛 郝淳 乔茶 周平坤 徐勤芝 丁库克关键词:REAL-TIMEPCR 阿托伐他汀对糖尿病ApoE基因敲除小鼠组织中CD55和CD59表达的影响 被引量:1 2011年 目的观察阿托伐他汀对糖尿病ApoE基因敲除小鼠主动脉组织中CD55、CD59表达的影响。方法 22只雄性6周龄ApoE基因敲除小鼠随机分为糖尿病动脉粥样硬化(对照)组(12只)和阿托伐他汀干预(干预)组(10只),予链脲佐菌素(55 mg.kg-1.d-1体质量)连续5次腹腔注射建立糖尿病模型,普通饲料喂养。造模成功后,干预组予阿托伐他汀(10 mg.kg-1.d-1体质量)灌胃8周。监测生化指标,测量斑块面积;采用免疫荧光和Real-time PCR技术,观察阿托伐他汀干预后小鼠主动脉组织中CD55和CD59的表达变化。结果与对照组相比,阿托伐他汀干预后体质量增加,血糖和血脂无变化,血清淀粉样蛋白-A[(5.9±3.2)μg/mL vs.(3.8±1.6)μg/mL,P>0.05]和动脉粥样硬化病变面积呈减少趋势[(264046.4±88374.97)μm2vs.(218752.4±87927.16)μm2,P>0.05]。免疫荧光显示,阿托伐他汀干预后小鼠主动脉组织中CD55和CD59表达较对照组增强。Real-time PCR结果显示,与对照组比较,阿托伐他汀干预后CD55和CD59 mRNA相对表达量无明显变化(0.55±0.2 vs.0.43±0.11,0.76±0.36 vs.0.55±0.13,P均>0.05)。结论独立于调脂作用之外,阿托伐他汀可能具有上调CD55和CD59蛋白表达的作用。 马西文 秦明照 赵焕英 常志文 张勇 宋爱丽关键词:糖尿病 CD55 CD59 阿托伐他汀 一种硅壳荧光磁性纳米粒及制备方法和应用 一种氨基或酯基树枝状分子修饰的硅壳荧光磁性纳米粒,采用共沉淀法制备超顺磁性Fe<Sub>3</Sub>O<Sub>4</Sub>内核,通过正硅酸乙酯(TEOS)的碱性水解形成二氧化硅包埋的Fe<Sub>3</Sub>O<... 叶玲 于景娴 王楠 杨慧 赵焕英 王迎 库姝婷 高琳文献传递