何祥虎
- 作品数：38 被引量：101H指数：6
- 供职机构：武汉大学中南医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 大鼠血红素加氧酶-1基因转染对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响被引量：5
- 2007年
- 目的评价重组腺相关病毒（rAAV）介导大鼠血红素加氧酶-1（rHO-1）基因转染在大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及其机制。方法健康雄性SD大鼠81只，体重220～280g，随机分为4组：假手术组（SH组，n=9）、生理盐水组（NS组，n=24）、重组腺相关病毒-荧光蛋白组（rAAV—EGFP组，n=24）和重组腺相关病毒-HO-1组（rAAV-HO-1组，n=24）。NS组、rAAV-EGFP组和rAAV-HO-1组分别心肌注射600μl生理盐水、rAAV-EGFP（1．5×10^11v．g．）或rAAV-HO-1（1．5×10^11v．g．）。在基因转染后3个月，NS组、rAAV-EGFP组和rAAV-HO-1组各处死3只大鼠，取注射部位心肌，通过测定心肌细胞荧光蛋白的表达，计算转染率，并通过免疫组化染色和RT-PCR法检测HO-1蛋白和HO-1 mRNA的表达。采用结扎左冠状动脉前降支30min，再灌注120min的方法建立心肌缺血再灌注模型；再灌注120min后，处死大鼠，测定心肌组织超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量，电镜下观察心肌细胞的超微结构。结果心肌细胞转染率为（53．5±2．0）％。与NS组比较，rAAV-HO-1组HO-1蛋白及HO-1 mRNA表达增加（P〈0．01）；与rAAV-EGFP组比较，rAAV-HO-1组HO-1蛋白及HO-1 mRNA表达增加（P〈0．01）；与SH组比较，NS组和rAAV-EGFP组SOD活性下降，MDA含量升高（P〈0．01）；与NS组和rAAV-EGFP组比较，rAAV-HO-1组SOD活性升高，MDA含量降低（P〈0.01）。NS组及rAAV-EGFP组心肌细胞超微结构损伤较SH组和rAAV-HO-1组重。结论腺相关病毒介导的血红素加氧酶-1基因转染大鼠心肌细胞后，可减轻心肌缺血再灌注损伤，其机制与抗氧化有关。
- 王成夭代乐王焱林何祥虎李娜
- 关键词：心肌再灌注损伤腺病毒科
- 靶向心肌细胞TLR4基因小干扰RNA载体构建
- 2016年
- 目的:设计合成有效靶向Toll样受体4(TLR4)基因小干扰RNA(siRNA)表达载体,且挑选TLR4基因稳定沉默心肌细胞。方法:依据RNA干扰(RNAi)序列设计原则,以TLR4基因为靶基因,合成3对小发夹RNA(shRNA)寡核苷酸链,经退火、与线性化pSilence 2.1-U6neo质粒连接、酶切、测序并鉴定。脂质体法转染心肌细胞,新霉素(G418)加压筛选并收集稳定表达质粒的心肌细胞,并观察光镜下心肌细胞形态。RT-PCR及Western Blot法检测收集的心肌细胞TLR4mRNA和蛋白的表达,确定siRNA对TLR4的抑制效率。结果:测序鉴定插入发夹样序列正确,成功构建了TLR4基因siRNA表达载体;并获得了稳定沉默TLR4的心肌细胞。未见细胞毒性形态学改变。多种方法均证实siRNA作用于TLR4基因后,心肌细胞TLR4 mRNA和蛋白表达均被抑制,其中pSilence2.1-siTLR4-1抑制作用最强。结论:成功构建了靶向TLR4基因siRNA表达载体,并有效抑制心肌细胞TLR4表达。
- 郑勇萍李梦云柯剑娟吴云何祥虎张宗泽王焱林
- 关键词：TOLL样受体4RNA干扰心肌细胞
- 细胞穿透肽PEP-1介导血红素加氧酶-1对大鼠缺血心肌的转导及影响被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨细胞穿透肽PEP-1介导血红素加氧酶-1(HO-1)对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响。方法:制备融合蛋白PEP-1/HO-1,通过酶联免疫吸附法检测给予融合蛋白后各时间点血清HO-1水平,探讨动物实验给予融合蛋白的最佳时间点。健康雄性SD大鼠18只,体重220-280g,随机分为3组:正常对照组(C组,n=6)、缺血再灌注组(IR组,n=6)和PEP-1/HO-1处理+缺血再灌注组(HO组,n=6)。制备心肌缺血再灌注损伤模型,于再灌注结束后,测定血清肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性及心肌梗死面积。结果:给予融合蛋白后,血清HO-1蛋白浓度在1h和3h达峰值。与C组比较,IR组血清CK和LDH活性升高,心肌梗死面积增加(P<0.05);与IR组比较,HO组血清CK和LDH活性降低,心肌梗死面积减少(P<0.05)。结论:细胞穿透肽PEP-1介导的HO-1对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用。
- 何祥虎王焱林王成夭颜学滔江海星
- 关键词：细胞穿透肽
- 腰交感神经节射频热凝对糖尿病痛性周围神经病变大鼠的镇痛作用及对背根神经节TTX-R钠电流的影响被引量：1
- 2007年
- 目的 评价射频热凝毁损腰交感神经节对糖尿病痛性周围神经病变大鼠的镇痛作用及对背根神经节（DRG）细胞上河豚毒素不敏感（TTX-R）钠通道电流的影响。方法 腹腔注射链尿佐菌素诱导大鼠糖尿病痛性周围神经病变模型，取造模成功的大鼠20只，随机分为糖尿病对照组（D组）及交感神经节射频热凝组（R组），每组10只，另取10只同月龄大鼠为正常对照组（C组），R组大鼠行右侧L3，4椎旁射频热凝毁损腰交感神经节。于射频热凝前、射频热凝后1、2周采用von Frey纤维丝测定缩爪反应阈值（PWT）;射频热凝后2周，急性分离小DRG细胞，采用全细胞膜片钳记录方法，在电压钳制下记录TTX-R钠通道电流。结果 与C组比较，射频热凝前D组和R组PWT降低（P〈0．01），射频热凝后1、2周，R组PWT低于C组（P〈0．05），高于D组（P〈0．05）;射频热凝后2周，与C组比较， D组、R组I-V曲线向左移，R组电流密度高于C组（P〈0．01），低于D组（P〈0．05），与C组比较，D组、R组半激活电压及半失活电压升高（P〈0．01），D组和R组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 腰交感神经节射频热凝可有效缓解糖尿病痛性周围神经病变大鼠的痛觉过敏，抑制小DRG细胞TTX-R钠通道电流可能是其发挥镇痛作用机制之一。
- 王汉兵王焱林杨承祥王腾王龙何祥虎
- 关键词：神经节交感钠通道
- 丙泊酚后处理对大鼠在体心肌缺血/再灌注损伤保护作用的实验研究
- 目的 采用冠状动脉左前降支结扎30min再灌注120min的方法复制在体大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,观察丙泊酚(propofol,PPF)后处理对其血清肌酸激酶(creatine kinase,CK)、乳酸脱氢酶(lac...
- 王赟王焱林张宗泽何祥虎
- 关键词：心肌缺血再灌注损伤
- 大鼠气管插管直视下心肌注射方法被引量：1
- 2006年
- 目的:建立大鼠气管插管后开胸直视下心肌注射模型,探讨心血管疾病治疗研究的新兴方法。方法:大鼠开胸后心肌内注射腺相关病毒,并与同期对照组比较,观察大鼠术后存活率、一般状况及病毒感染情况。结果:手术组术后存活率84%,心肌切片可见荧光。结论:该法有效且重复性好,可较理想的将药物注射入心肌,对治疗心血管疾病的相关研究有重要意义。
- 代乐王焱林王成夭何祥虎
- 关键词：SPRAGUE-DAWLEY大鼠心肌注射气管插管
- 血红素氧合酶-1基因转染对大鼠心肌缺血／再灌注损伤诱导心肌细胞凋亡的影响被引量：4
- 2009年
- 目的探讨重组腺相关病毒（rAAV）介导大鼠血红素氧合酶-1（rHO—1）基因转染对心肌缺血／再灌注（I／R）损伤大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法95只体重225～250g的雄性SD大鼠随机分为假手术组（SO组，n-8）、生理盐水组（NS组，n=29）、rAAV-荧光蛋白组（rAAV—EGFP组，n=29）及rAAV—rHO-1组n=29）。NS组、rAAV—EGFP组和rAAV—rHO-1组分别于大鼠左心室前后壁共取4点分别注入生理盐水、rAAv—EGFP或rAAV—rHO-1病毒液共600μl。在基因转染后3个月，各组处死3只大鼠，取注射部位心肌，荧光显微镜下观察荧光蛋白的表达并计算转染率；用免疫组化染色和逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测HO-1的蛋白和mRNA表达。采用结扎左冠状动脉前降支30min、再灌注120min建立心肌I／R模型；成模后处死大鼠测定其心肌梗死面积及心肌细胞凋亡指数（AI），光镜下观察心肌组织病理学改变。结果荧光显微镜下仅rAAV—EGFP组可见心肌有荧光蛋白表达，转染率为（53．54±2．0）％。与SO组比较，NS组、rAAV—EGFP组和rAAV—rHO-1组AI增加（P均〈0．01）；与NS组和rAAV—EGFP组比较，rAAV—rHO-1组HO—1的蛋白及mRNA表达增加，心肌梗死面积减小，AI减少（P均〈0．01）；NS组及rAAV—EGFP组心肌组织病理学损伤较SO组和rAAV—rHO-1组为重。NS组与rAAV—EGFP组间上述指标比较无统计学意义。结论rAAV介导的rHO-1基因转染大鼠心肌细胞后，能够显著减少心肌细胞凋亡，从而减轻心肌I／R损伤。
- 李娜王焱林王成天何祥虎代乐
- 关键词：血红素氧合酶心肌基因转染腺病毒科
- 重组血红素氧合酶-1基因腺相关病毒对慢性脑缺血大鼠认知功能的影响被引量：3
- 2006年
- 目的观察重组血红素氧合酶-1(HO-1)基因腺相关病毒(AAV)对慢性脑缺血大鼠认知功能的影响。方法40只健康雄性SD大鼠,随机分为5组(n=8)：假手术组(SH组)、慢性脑缺血1月组(I1组)、慢性脑缺血3月组(I3组)、基因治疗1月组(G1组)和基因治疗3月组(G3组)。SH组、I1组及I3组大鼠小脑延髓池注射生理盐水10μl,1周后I1组和I3组结扎双侧颈总动脉造成脑缺血,并分别观察1个月或3个月,SH组仅分离颈总动脉不结扎。G1组和G3组小脑延髓池注射重组HO-1基因AAV,1周后结扎双侧颈总动脉,分别观察1个月或3个月。跳台法测试大鼠学习、记忆能力,免疫组化法测定海马HO-1蛋白的表达,逆转录-聚合酶链反应测定海马HO-1 mRNA的表达。结果与SH组比较,I1组、I3组学习、记忆能力下降(P＜0．05),I1组、I3组间差异无统计学意义；G1组学习能力下降(P＞0．05)。G1组学习、记忆能力强于I1组,G3组学习、记忆能力强于I3组(P＜0．05),G1组、G3组间学习、记忆能力差异无统计学意义。SH组、I1组、I3组海马有少量散在的HO-1蛋白表达和HO-1 mRNA(390 bp)基础表达。G1组和G3组海马HO-1蛋白和HO-1 mRNA表达高于SH组、I1组和I3组(P＜0．05)。结论小脑延髓池注射重组HO-1基因AVV可改善慢性脑缺血大鼠的认知功能。
- 王成夭章军建王焱林何祥虎
- 关键词：基因疗法脑缺血
- 血红素加氧酶-1蛋白转导对脓毒症大鼠急性肺损伤的影响被引量：1
- 2016年
- 目的评价血红素加氧酶-1（HO-1）蛋白转导对脓毒症大鼠急性肺损伤的影响。方法健康雄性SD大鼠18只，7～9周龄，体重210～260g，采用随机数字表法分为3组（n=6）：假手术组（Sham组）、脓毒症组（Sep组）和融合蛋白PEP-1-HO-1转导组（HO组）。Sep组和HO组采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症模型。HO组于术前1h和术后5h分别经左侧髂静脉注射PEP-1-HO-1融合蛋白0．6mg；Sham组和Sep组于相应时点给予等容量生理盐水。于术后12h时，右侧颈总动脉采集血样，采用ELISA法测定血清TNF-α和IL-6的浓度；然后处死大鼠取肺组织，光镜下观察病理学结果，测定肺组织湿重／干重（W／D）比值，采用硫代巴比妥酸比色法测定MDA含量。结果与Sham组比较，Sep组和HO组肺组织W／D比值和MDA含量升高，血清TNF-α和IL-6的浓度升高（P〈0．05），肺组织病理学损伤加重；与Sep组比较，HO组肺组织W／D比值和MDA含量降低，血清TNF—α和IL-6的浓度降低（P〈0．05），肺组织病理学损伤减轻。结论HO—1蛋白转导可减轻脓毒症大鼠急性肺损伤，其机制可能与抑制肺组织脂质过氧化反应和全身炎性反应有关。
- 唐隽姣李青文何祥虎王焱林张宗泽
- 关键词：血红素加氧酶-1重组融合蛋白质类转导脓毒症
- 细胞穿透肽PEP-1介导血红素加氧酶-1对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响被引量：4
- 2010年
- 目的 探讨细胞穿透肽PEP-1介导血红素加氧酶-1（HO-1）对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响.方法 雄性SD大鼠,体重220～280g,制备Langendorff离体心脏灌注模型,选取模型制备成功的离体心脏18个,随机分为3组（n=6）：假手术组（S组）、缺血再灌注组（IR组）和PEP-1/HO-1处理＋缺血再灌注组（HO-1组）.IR组K-H液平衡灌注30 min后,采用停灌40 min再灌注50 min的方法制备缺血再灌注模型.HO-1组在停灌前用含50 μmol/L融合蛋白PEP-1/HO-1的K-H液平衡灌注15 min,S组采用K-H液持续灌注120 min.再灌注50 min时,收集冠脉流出液,测定肌酸激酶（CK）和乳酸脱氢酶（LDH）的活性;取心肌组织,采用Western blot法测定HO-1蛋白表达水平,采用硫代巴比妥酸比色法测定MDA含量,黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性.结果 HO-1组心肌组织HO-1蛋白表达水平较IR组升高（P＜0.01）.与S组比较,IR组和HO-1组冠脉流出液CK和LDH活性及心肌组织MDA含量升高,心肌组织SOD活性降低（P＜0.01）;与IR组比较,HO-1组冠脉流出液CK和LDH活性及心肌组织MDA含量降低,心肌组织SOD活性升高（P＜0.01）.结论细胞穿透肽PEP-1可将HO-1蛋白成功导入心肌组织,并减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤.
- 何祥虎王焱林颜学滔王成夭张宗泽饶艳
