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密码子优化的鸭坦布苏病毒E基因在昆虫细胞中的表达被引量：1: 2013年; 为了使鸭坦布苏病毒(Duck tembusu virus,DTMUV)的E蛋白在Bac-to-Bac杆状病毒/昆虫细胞表达系统中高效表达,本研究将DTMUV的E基因按照昆虫细胞偏嗜性密码子进行了优化,合成了基因optiE,并将其插入到pFastBac HT载体上,得到质粒pFastBac-optiE。将该质粒转化DH10BAC感受态细胞,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组转座子rBacmid-optiE。将rBacmid-optiE转染对数生长期的Sf9昆虫细胞,间接免疫荧光试验和Western blot方法都证实目的蛋白在重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞中获得了表达。本研究为进一步研究DTMUV E蛋白的结构与功能奠定了基础。; 肖亚莉刘建龙李雪松余磊滕巧泱闫丽萍李国新李泽君; 关键词：E蛋白密码子优化

鸭坦布苏病毒在鸡胚成纤维细胞上的传代致弱研究: 自2010年鸭坦布苏病毒病在中国发生以来,该病给我国的养鸭产业造成了巨大的经济损失.目前,仍没有有效的措施预防和控制该病的发生和流行.为了获得鸭坦布苏病毒的弱毒株,我们把鸭坦布苏病毒强毒株FX2010在鸡胚成纤维细胞(C...; 李国新吴晓刚颜丕熙闫丽萍滕巧泱童光志李泽君高旭元肖亚莉刘绍琼彭珊李雪松石迎张月娥余磊

不同代次鸭坦布苏病毒对蛋鸭的致病力研究被引量：1: 2014年; 为探讨鸭坦布苏病毒奉贤分离株(FX2010)在鸡胚成纤维细胞上传代培养对病毒致病力的影响,采用FX2010及其第100代(FX2010-100P)和180代(FX2010-180P)传代培养的病毒肌肉注射接种6月龄蛋鸭,观察接种鸭的临床表现、病理变化以及病毒在鸭体内的分布,评价不同代次病毒对蛋鸭的致病力。结果显示,FX2010感染鸭发病非常明显,各脏器均有明显病理变化,FX2010-100P感染鸭表现较轻的临床发病症状和病理变化,而FX2010-180P感染鸭未表现临床发病症状和病理变化;FX2010组在大部分鸭的脾、肺、肾、脑和卵巢中都能分离到病毒,而FX2010-100P组仅在少部分鸭的脾、肺、肾和卵巢中能分离到病毒,在脑中分离不到病毒,FX2010-180P组仅在少部分鸭的脾中分离到病毒。研究表明传代毒对鸭的致病力逐渐降低,其毒力的降低可能与病毒在体内增殖能力下降相关。; 石迎高旭元余磊李雪松闫丽萍滕巧泱刘思当李国新李泽君; 关键词：传代致病力

鸭坦布苏病毒病活疫苗(FX2010-180P株)毒种保存期的研究被引量：10: 2014年; 鸭坦布苏病毒病是新发的一种以蛋鸭产蛋下降为主要特征的传染病,目前仍没有疫苗可预防和控制该病。将鸭坦布苏病毒强毒(FX2010株)在鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fi broblasts,CEFs)上连续传代培养180代,获得1株致弱毒株(FX2010-180P株),利用该弱毒株研制了鸭坦布苏病毒病活疫苗。本研究为了测定鸭坦布苏病毒病活疫苗(FX2010-180P株)毒种的保存期,将-80℃条件下保存了16个月的原始种子批和基础种子批各取3支,进行纯净性检验、鉴别检验以及病毒滴度测定。结果表明,各批次毒种在保存16个月后,病毒纯净无污染,病毒滴度没有明显下降。把基础种子在CEFs上增殖后,低剂量接种鸭子,检验毒种的免疫原性。结果显示,用毒种增殖的病毒免疫原性良好,101.5和102.5 TCID50的剂量可以为接种鸭提供90%和100%的保护。; 吴晓刚高旭元余磊李雪松闫丽萍滕巧泱李国新李泽君; 关键词：毒种保存期

鸭坦布苏病毒E蛋白结构域III原核表达产物诱导中和抗体的研究被引量：6: 2014年; 黄病毒E蛋白结构域Ⅲ能够介导病毒与宿主受体结合以及诱导产生中和抗体,本研究利用原核表达系统表达了鸭坦布苏病毒E蛋白结构域Ⅲ,并研究了其免疫原性。按照大肠杆菌偏好性密码子对鸭坦布苏病毒E蛋白结构域Ⅲ核苷酸序列进行优化并合成后,克隆至pCold-TF载体构建重组质粒pCold-TF-optiEDIII。Western blot证实重组蛋白能与鸭坦布苏病毒特异性血清发生反应。用纯化的重组蛋白免疫BLAB/c小鼠3次,间接ELISA和间接免疫荧光实验证实E蛋白结构Ⅲ诱导了鸭坦布苏病毒特异性的体液免疫反应。中和实验证实鸭坦布苏病毒E蛋白结构域Ⅲ可诱导产生中和抗体。本研究为进一步研制鸭坦布苏病毒诊断抗原和亚单位疫苗奠定了基础。; 余磊闫大为高旭元肖亚莉刘绍琼李雪松闫丽萍滕巧泱李国新李泽君; 关键词：E蛋白中和抗体

密码子优化的鸭坦布苏病毒E基因在昆虫细胞中的表达: 为了使鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)的E蛋白在Bac-to-Bac杆状病毒/昆虫细胞表达系统中高效表达,本研究将DTMUV的E基因按照昆虫细胞偏嗜性密码子进行了优化,合成了基因optiE...; 肖亚莉刘建龙李雪松余磊滕巧泱闫丽萍李国新李泽君

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余磊