刘腾飞
- 作品数：6 被引量：20H指数：3
- 供职机构：新疆农业大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：新疆维吾尔自治区高技术研究发展计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 犬瘟热病毒N蛋白基因的克隆、原核表达及其表达产物抗原性鉴定被引量：8
- 2010年
- 参考GenBank中发表的CDVN蛋白基因序列，用Oligo6．0软件设计一对特异性引物，从患犬瘟热的犬全血样品中提取总RNA，经RT—PCR扩增得到1572bp的基因片段，将其插入pMD18-T克隆载体中构建了pMD18-CDVN重组质粒，将其转入到大肠杆菌DH5a中，进行鉴定、测序。将目的基因与原核表达载体pGEX-4T-2连接构建了pGEX-4T-2-CDVN重组质粒，转化到大肠杆菌BL21（DE3）中，进行鉴定、测序、IPTG诱导表达。序列分析表明克隆的CDVN蛋白基因从起始密码子ATG开始到终止密码子TAA结束全长为1572个核苷酸，与GenBank中发表的CDVN蛋白基因序列相比同源率达到93．9％～99．1％。Western-blotting分析显示表达产物为84kDa的融合蛋白，可被犬瘟热抗血清所识别，具有良好的抗原性。
- 申卫红马素贞陈胜男刘腾飞陶玉成简子健
- 关键词：犬瘟热病毒N蛋白基因克隆原核表达抗原性
- 犬细小病毒VP2基因的克隆表达与免疫印迹分析被引量：1
- 2010年
- 根据基因库已发表犬细小病毒序列设计合成了VP2基因的1对特异引物,以细小病毒感染的犬粪样品中提取的总DNA为模板,进行PCR扩增。把扩增产物克隆至pMD18-T载体进行测序、鉴定。将克隆的VP2基因片段克隆至原核表达载体pGEX-4T-2,再将构建成功的原核表达质粒载体pGEX-4T-2-VP2转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,进行鉴定、测序、表达。结果表明,克隆的VP2基因片段全长1 755 bp,与13个VP2基因序列的同源性为98.4%～99.8%。系统进化树分析表明,所克隆的VP2 CSN830611序列同日本株(AB054222)、意大利株(AF306445)的进化途径一致。Western-blotting分析显示,表达产物为90 kD的融合蛋白,可被犬细小病毒阳性血清所识别,具有良好的反应原性。
- 陈胜男马素贞陶玉成申卫红刘腾飞简子健
- 关键词：犬细小病毒VP2基因克隆原核表达反应原性
- RT-PCR检测CPIV方法的建立与应用被引量：3
- 2011年
- 【目的】建立CPIV的RT-PCR检测方法。【方法】从临床上疑似犬副流感(CPI)的犬鼻腔分泌物中提取CPIV总RNA。根据Genebank中收录的CPIV(序列号AY581307)中NP基因保守序列,设计一对特异性引物,扩增出667 bp片段,以此建立CPIV的RT-PCR检测方法。【结果】特异性试验表明该引物不能扩增犬其它常见的传染病病毒基因。敏感性试验表明该引物能检测到10^(-6)的CPIV总RNA量。重复性试验表明该引物具有良好的稳定性和重复性。对临床采集的32份样品进行RT-PCR检测时,阳性率为53.12%。【结论】实验建立了CPI的RT-PCR检测方法,可适合于临床CPIV的早期快速诊断和小规模的分子流行病学调查。
- 简子健马素贞刘腾飞翟少华赵森
- 关键词：犬副流感病毒NP基因反转录聚合酶链反应早期快速诊断
- 犬传染性肝炎病毒Hexon蛋白基因的克隆和原核表达质粒的构建被引量：5
- 2010年
- 通过设计特异性引物,以犬传染性肝炎患犬的全血基因组DNA为模板,经PCR扩增,获得了犬传染性肝炎病毒Hexon蛋白基因,将其插入到pMD18-T载体进行测序、鉴定,构建原核表达质粒载体pGEX-6p-1-Hex-on。结果显示,犬传染性肝炎病毒Hexon基因已被成功地克隆,基因全长2 718 bp,包含从起始密码子ATG到终止密码子TAA的完整序列。与犬传染性肝炎病毒国际标准株Hexon蛋白基因的同源性为99.7%,通过实验鉴定表明pMD18-Hexon克隆载体和原核表达质粒载体pGEX-6p-1-Hexon已成功构建。
- 陶玉成马素贞陈胜男刘腾飞申卫红简子健
- 关键词：犬传染性肝炎克隆原核表达质粒
- 犬副流感病毒的检测和NP基因的克隆、表达及其重组蛋白的免疫学活性的研究
- 犬传染性呼吸系统疾病（Canine Infectious Respiratory Disease，CIRD）即犬窝咳，临床特征表现为发热、咳嗽、流涕，是一种多因素和多病原引起的犬的重要疾病，其中犬副流感病毒（Canine...
- 刘腾飞
- 关键词：犬副流感病毒RT-PCRNP蛋白免疫学活性
- 犬副流感病毒NP基因的克隆与原核表达被引量：2
- 2010年
- 以犬副流感病毒RNA为模板,采用RT-PCR方法,连接pMD18-T载体获取NP蛋白编码基因核苷酸序列,并应用定向克隆技术,构建原核表达载体pGEX-6P-1-NP。经测序鉴定证实获取的NP蛋白核苷酸序列与GeneBank中标准序列存在两处碱基变异,导致编码的蛋白质出现一个氨基酸的变异。测序结果表明,克隆出的目的基因序列已定向克隆到pGEX-6P-1载体,成功构建了其原核表达载体,并能在大肠杆菌BL21(DE3)中得到表达。Westen-Blotting分析结果显示,表达的GST-pGEX-6P-1-NP重组融合蛋白为82.1 kDa,可被犬副流感阳性血清所识别,表明NP基因所编码的蛋白具有一定的免疫活性。
- 刘腾飞马素贞申卫红陶玉成陈胜男简子健
- 关键词：犬副流感病毒NP蛋白RT-PCR原核表达免疫活性
