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吴刚: 作品数：11 被引量：115H指数：6; 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院基础医学院基础医学研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划中国博士后科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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高脂血症和动脉粥样硬化不同痰瘀证候患者血浆蛋白质差异表达谱与脏腑功能的关系被引量：20: 2008年; 目的:探讨高脂血症及动脉粥样硬化不同痰瘀证候患者血浆特异性蛋白质群与脏腑功能之间的相关性。方法:采用中医证候诊断,观察146例高脂血症及动脉粥样硬化不同痰瘀证候病人的脏腑功能状况。获取病人的血浆样品进行二维凝胶电泳,对差异表达蛋白进行二级质谱分析,寻找可区别不同痰瘀证候的特异性标志蛋白群。采用图模型分析方法研究不同痰瘀证候可能的标志蛋白与脏腑功能之间的相关性。结果:区分高脂血症及动脉粥样硬化病人中医痰证与痰瘀互阻证可能的标志蛋白群中纤维蛋白原γ链、白蛋白及载脂蛋白AI前体主要与心气虚、肾气虚及脾气虚有关;区分痰证与血瘀证可能的4种标志蛋白质中,白蛋白和肾上腺髓质素结合蛋白前体与心气虚、肾气虚均有关,结合珠蛋白前体只与肾气虚有关,并通过肾上腺髓质素结合蛋白前体与心气虚相关,补体C4与之均无关;区分血瘀证与痰瘀互阻证可能的标志蛋白群中白蛋白与心气虚、肾气虚及脾气虚均有关,而肾上腺髓质素结合蛋白前体只与脾气虚相关;区分非痰非瘀类与痰瘀类证候可能的标志蛋白纤维蛋白原β链主要与肾气虚有关,载脂蛋白AI前体主要与肾气虚及心气虚有关。结论:高脂血症及动脉粥样硬化不同痰瘀证候可能的血浆标志蛋白与不同的脏腑功能之间存在不同的关联组合。; 宋剑南刘军莲房祥忠胡元会雷燕牛晓红吴刚陈保生马雅銮陈冰金红; 关键词：高脂血症动脉粥样硬化痰证血瘀脏腑

低密度脂蛋白诱导下调的新基因cDNA的克隆及组织表达被引量：23: 2003年; 用改进的mRNA差异显示 PCR技术分析ECV30 4在低密度脂蛋白的诱导下表达水平明显差异的cDNA。获得一差异表达的 2 6 5bp新EST ;以该EST为探针 ,从人主动脉cDNA文库中筛选到一个 172 6bp的cDNA克隆 ,其 74 8 12 6 6bp之间的 5 19个碱基构成一个完整的开放阅读框架 ,编码 172个氨基酸组成的蛋白质。其羧基端 94 172区间氨基酸序列中含有三个重复的C2H2型锌指蛋白基序CX2CX3FX5LX2HX3H ,NorthenBlot证实两组ECV30 4中均出现一条 1 7kb的区带 ,LDL诱导后其表达降低了 2 2倍。与差异显示 PCR的结果一致 ,该基因被定名为LRZFG。LRZFG是多组织表达的基因。; 张文成陈保生曾武威吴刚薛红; 关键词：低密度脂蛋白 MRNA差异显示基因克隆 CDNA

血脂异常及动脉粥样硬化不同痰瘀证候血浆蛋白差异表达谱的研究被引量：29: 2010年; 目的通过研究血脂异常及动脉粥样硬化不同痰瘀证候(包括痰证、血瘀证、痰瘀互阻证)血浆蛋白质的表达差异,寻找不同痰瘀证候的特异性标志蛋白群。方法收集146例北京地区汉族血脂异常及动脉粥样硬化中医痰证、血瘀证、痰瘀互阻证和非痰非瘀类证候患者及37名健康对照的血浆样品,采用二维凝胶电泳(two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis,2-DE)方法进行电泳和图像扫描及差异度分析,找出不同痰瘀证候的差异蛋白质表达谱;从凝胶上切取相应差异蛋白质斑点,酶切后于Q-TOF-MS仪上进行二级质谱分析,进一步采用Fisher判别法对差异蛋白进行典型性分析,筛选出能够显著区分不同痰瘀证候可能的标志蛋白群。结果在组间匹配变异度超过100%的11个斑点中除2个斑点未确定外,发现有7种不同的蛋白质。经对这9种不同的蛋白质进行典型性分析后发现:能区分血脂异常及动脉粥样硬化患者与正常人群间的血浆标志蛋白群可能是结合珠蛋白前体和纤维蛋白原γ链;能区分血脂异常及动脉粥样硬化患者痰瘀类证候与非痰瘀类证候的血浆标志蛋白群可能是纤维蛋白原β链和载脂蛋白AI前体;能区分痰证与痰瘀互阻证可能的标志蛋白群是纤维蛋白原γ链、白蛋白和载脂蛋白AI前体;能区分痰证与瘀证可能的标志蛋白群是结合珠蛋白前体、肾上腺髓质素结合蛋白前体、白蛋白和补体C4;能区分瘀证与痰瘀互阻证可能的标志蛋白群是白蛋白和肾上腺髓质素结合蛋白前体。结果还发现上述可能的标志蛋白的表达差异可随痰瘀证候间不同的传变方式而有不同的变化规律。结论采用蛋白质组学方法获得了可显著区分血脂异常及动脉粥样硬化不同痰瘀证候及痰瘀类证候与非痰瘀类证候间可能的标志蛋白群的特异性组合,及在功能蛋白质水平上有关痰瘀证候的传变主要是由痰致瘀进而; 刘军莲宋剑南雷燕吴刚胡元会牛晓红房祥忠陈保生马雅銮陈冰金红; 关键词：血脂异常动脉粥样硬化痰瘀证候蛋白质组学

人磷脂转移蛋白的原核表达及其抗体的制备与鉴定: 2008年; 目的利用大肠杆菌表达人磷脂转移蛋白(PLTP),制备兔抗人PLTP的多克隆抗血清。方法采用RT-PCR技术,将人PLTP蛋白编码序列克隆入pET-30b(+)原核表达载体,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,切胶纯化蛋白后免疫家兔,制备PLTP抗血清。用间接ELISA法、Western blot、细胞免疫荧光检测对抗血清效价及特异性进行鉴定。结果SDS-PAGE分析表明,PLTP基因在大肠杆菌BL21(DE3)菌株的包涵体中高效表达,最佳诱导表达时间为3h;将纯化的蛋白免疫家兔,ELISA法测定的抗血清效价为1∶256000;Western blot及细胞免疫荧光检测显示,抗血清可以与PLTP原核及真核表达蛋白特异结合。结论成功地将PLTP进行了原核表达,制备了高效价、高特异性的兔抗人PLTP抗血清,为PLTP的临床检测及其结构与功能的进一步研究提供了有力工具。; 刘惠荣吴刚周冰申乐薛红陈保生; 关键词：原核表达抗体

人胆固醇酯转运蛋白的cDNA克隆、原核表达及抗血清制备被引量：1: 2008年; 目的:克隆人胆固醇酯转运蛋白(CETP)cDNA序列,利用大肠杆菌表达人CETP,制备兔抗人CETP的多克隆抗血清。方法:采用RT-PCR方法,将人CETP基因克隆到pET-30b(+)上,构建CETP原核表达载体并转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,切胶纯化蛋白后免疫家兔,制备CETP抗血清,以ELISA、Western blot、细胞免疫荧光方法对抗血清效价及特异性进行鉴定。结果:SDS-PAGE分析表明,经IPTG诱导,CETP基因在大肠杆菌BL21(DE3)的包涵体中高效表达,最佳诱导表达时间为4h。将切胶纯化的蛋白免疫家兔,ELISA法测定的抗血清效价为1∶5.12×105。Western blot及细胞免疫荧光检测结果显示,抗血清可以与CETP原核及真核表达蛋白特异结合。结论:成功地将CETP进行了原核表达并制备了高效价、高特异性的兔抗人CETP抗血清,为进一步研究CETP的结构与功能奠定了基础。; 刘惠荣曾武威周冰申乐吴刚薛红陈保生; 关键词：胆固醇酯转运蛋白原核表达抗血清

载脂蛋白C3基因多态性-482C>T与血浆脂质的关系被引量：13: 2005年; 目的研究载脂蛋白C3基因上游调控区内-482C>T多态性位点与血浆脂质以及载脂蛋白水平的关系。方法应用聚合酶链反应—限制片长多态性方法逐个鉴定每个个体的基因型,并测定其血浆脂质和载脂蛋白水平。结果-482T等位基因携带者具有较高的甘油三酯水平(P=0.044);同时该等位基因的携带者也具有较高的载脂蛋白C2水平(P=0.017)。结论载脂蛋白C3基因-482C>T位点和血浆甘油三酯以及其它几种脂蛋白密切相关。; 李国平陈保生薛红曾武威吴刚; 关键词：分子生物学基因多态性甘油三酯

人载脂蛋白A-Ⅰ半胱氨酸突变体的二级结构和脂质结合能力的比较被引量：1: 2005年; 为探讨人载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ,apolipoproteinA-Ⅰ)α螺旋不同位点的半胱氨酸突变后,对蛋白二级结构和脂质结合能力的影响,利用定点诱变技术构建apoA-Ⅰ的天然半胱氨酸突变体apoA-ⅠMilano(R173C),及其它α螺旋片段上的半胱氨酸突变体,分别为apoA-Ⅰ(S52C),apoA-Ⅰ(N74C),apoA-Ⅰ(L107C),apoA-Ⅰ(K129C),和apoA-Ⅰ(L195C).观察比较各种野生型及突变apoA-Ⅰ单体蛋白的α螺旋含量和二级结构稳定性及其脂质结合能力.结果显示,野生型apoA-Ⅰ,apoA-Ⅰ(S52C),apoA-Ⅰ(N74C),apoA-Ⅰ(L107C),apoA-Ⅰ(K129C),apoA-ⅠMilano和apoA-Ⅰ(L195C)的α螺旋含量分别为54±4%,49±4%,50±2%,51±6%,56±4%,52±3%,和54±1%,各种蛋白的α螺旋含量无显著性差异(P>0.05).野生型apoA-Ⅰ的变性标准自由能(ΔG0D)为10.5kJ/mol;apoA-Ⅰ(S52C)和apoA-ⅠMilano的ΔG0D比野生型低2.1kJ/mol;而apoA-Ⅰ(K129C)的ΔG0D比野生型apoA-Ⅰ高1.6kJ/mol.与野生型apoA-Ⅰ相比,apoA-Ⅰ(K129C)和apoA-Ⅰ(L195C)两个突变体与脂质结合能力明显下降(P<0.05),而其它半胱氨酸突变体(包括apoA-ⅠMilano)在脂质结合动力学方面与野生型apoA-Ⅰ无明显差异.以上结果提示,不同位点发生的半胱氨酸突变对apoA-Ⅰ单体蛋白的α螺旋含量无明显影响,但对蛋白的二级结构稳定性和脂质结合能力影响不尽相同.; 祝学卫吴刚曾武威薛红陈保生

差异显示法证实氧化型低密度脂蛋白刺激血管内皮细胞胸腺素β_4的高表达被引量：4: 2000年; 克隆、分离在致动脉粥样硬化因素作用下血管内皮细胞基因的差异表达对了解动脉粥样硬化发生的分子机制至关重要 ,用改进的差异显示 -多聚酶链技术分离、克隆氧化型低密度脂蛋白刺激培养的内皮细胞有差异表达的基因 ,用Northern印迹法证实差异表达的基因。结果发现氧化型低密度脂蛋白诱导培养的人脐静脉内皮细胞中出现一个上调节的cDNA片段 ,长 2 83bp ,其序列与人胸腺素 β4基因有 10 0 %的同源性 ,具有完整的开放阅读框架。Northern印迹分析证实氧化型低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞胸腺素β4升调了 3倍。从而提示氧化型低密度脂蛋白刺激血管内皮细胞胸腺素 β4的高表达 ,进而调节血管内皮细胞的增殖、分化。改进的差异显示 -多聚酶链技术具有便捷、特异性高。; 张可满陈保生薛红吴刚曾武威; 关键词：低密度脂蛋白胸腺素动脉粥样硬化

组织因子功能的多样性被引量：1: 2002年; 组织因子(TF)是一个分子量为47kD的跨膜糖蛋白。作为凝血因子FⅦ/FⅦa的受体在引发凝血中起着非常重要的作用。近几年陆续发现TF还在肿瘤血管形成、肿瘤迁移、信号转导、炎症、动脉粥样硬化及胚胎发育等方面都有一定作用。但其机制仍知之甚少。有些是TF与凝血因子FⅦ/FⅦa结合后继发的效应,有些则是非Ⅶ依赖性的。本文就TF的这些功能做一综述,并初步探讨了其机制及相应的治疗策略。; 白玲陈江曾武威吴刚陈保生; 关键词：多样性糖蛋白

人载脂蛋白A5基因多态性56C→G与血浆甘油三酯的关系被引量：11: 2004年; 为研究载脂蛋白A5基因编码区 5 6C→G这一多态性位点与血浆脂质以及载脂蛋白水平的关系 ,选择4 6 8个健康汉族人 ,应用聚合酶链反应限制片长多态性的原理 ,逐个鉴定每个个体的基因型。结果发现 ,5 6C→G这一位点在中国汉族人群中突变频率小于 1% ,提示它在中国汉族人群中不是一个多态性位点。; 李国平王建跃鄢盛恺张立军薛红曾武威吴刚陈保生; 关键词：生物化学载脂蛋白A5 基因多态性甘油三酯

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