孙宏彬
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院更多>>
- 发文基金：上海市科委重大科技攻关项目上海市教委科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- T7噬菌体表达巨细胞病毒PP65蛋白抗原的初步研究
- 2006年
- 目的利用噬菌体展示技术构建巨细胞病毒基质蛋白PP65的抗原,初步评价其抗原性。方法PP65的基因片段经酶切后,与T7噬菌体的基因组相应酶切位点结合,借助包装蛋白组装成为完整的噬菌体。PP65目的蛋白以融合蛋白的形式表达在T7噬菌体的头蛋白部位,每个噬菌体颗粒表面可表达5～15个拷贝。噬菌体可以在宿主细胞中快速繁殖,并且能够迅速裂解宿主细胞,使目的蛋白的富集达到很高的效率。人巨细胞病毒基质蛋白PP65可以激发机体强烈的免疫反应,运用T7噬菌体载体展示系统表达PP65的部分肽段,扩增噬菌体,以SDS-PAGE电泳和western-blot鉴定所表达的抗原特性。结果获得了重组T7-PP65噬菌体,通过鉴定,噬菌体表达在其头蛋白上的PP65抗原可以被天然PP65的单克隆抗体所识别。结论噬菌体展示技术可以有效地进行病毒蛋白抗原的表达,为抗原筛选和疫苗的研制提供科学依据。将PP65表达在T7噬菌体表面,可以研究其免疫原性及评估其作为疫苗的可能性。
- 谈意隽周彩存唐亮刘岽曾宪卓孙宏彬张钥季育华
- 关键词：噬菌体展示巨细胞病毒PP65抗原表位
- 人巨细胞病毒pp65核酸疫苗的构建、表达与动物免疫效应被引量：1
- 2005年
- 构建真核重组表达质粒PVAX1-pp65,通过对其表达产物的鉴定和免疫小鼠实验,探讨PVAX1-pp65载体对诱导免疫应答的效果及方式。用已构建的原核表达载体pp65-pet32a,经酶切后与DNA疫苗载体PVAX1连接,构建HCMVpp65核酸疫苗(PVAX1-pp65)。用脂质体法将其转染293细胞,经间接免疫荧光、免疫印迹试验来验证其表达的产物。同时,免疫小鼠后取其脾脏细胞,经流式细胞仪检测其CD4+和CD8+T细胞;并利用MTT法测定免疫小鼠的T细胞对ConA和重组pp65蛋白刺激后的增殖活性。结果显示构建的真核表达载体PVAX1-pp65,经测序验证其序列正确。体外转染实验结果表明转染重组质粒的细胞胞浆内呈现与特异性pp65单克隆抗体反应的颗粒状荧光产物,免疫印迹试验也显示重组质粒转染的细胞裂解物中有pp65蛋白条带。另外,免疫小鼠脾CD8+T细胞的含量明显高于对照组;免疫鼠脾细胞对重组pp65抗原蛋白的刺激后增殖反应明显。综上结果证实,成功地构建了HCMVpp65核酸疫苗,并能有效地表达,表达的蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性。HCMVpp65DNA疫苗可诱导小鼠产生针对HCMV的特异性细胞免疫应答,可作为一种有应用前景的核酸疫苗进一步深入研究。
- 张玥孙宏彬谈意隽季育华
- 关键词：人巨细胞病毒PP65核酸疫苗细胞免疫
- 人巨细胞病毒pp65蛋白的原核表达及免疫学特性分析被引量：2
- 2004年
- 目的应用生物工程方法研制人巨细胞病毒包膜蛋白pp65,并行相应抗体制备的探讨性研究。方法利用DNA重组技术,以HCMVAD169病毒株基因组为模板,通过PCR克隆HCMVpp65基因。以pET32a(+)为表达载体,构建重组质粒,并在E.Coli(DE3plys)中诱导表达。然后经柱层析获得纯化蛋白,由蛋白质印迹法验证蛋白的特异性。最后,免疫小鼠获取抗血清,检测抗体产生的效价。结果重组质粒经测序与Genebank序列一致,转染的细菌能高效表达目的蛋白,纯化后的蛋白能与已知单克隆抗体结合,免疫后的小鼠抗血清能同时识别重组蛋白和病毒抗原。结论重组表达的HCMVpp65全蛋白经纯化获得较高纯度,且保留良好的免疫原特性。为HCMV感染诊断用单克隆抗体的研制奠定了基础,并为HCMV感染的免疫诊断和治疗提供了新的研究方向。
- 孙宏彬赵缜卫玲王升年季育华
- 关键词：人巨细胞病毒PP65表达纯化蛋白质印迹法ELISA
