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季少平: 作品数：24 被引量：87H指数：5; 供职机构：第四军医大学西京医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家杰出青年科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>; 相关领域：生物学医药卫生更多>>

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一种胶质瘤相关的酸性成纤维细胞生长因子mRNA同源物被引量：2: 2001年; 目的　克隆胶质瘤相关基因 .方法　取胶质瘤患者新鲜肿瘤标本及肿瘤附近正常脑组织提取 m RNA,反转录成c DNA.采用基于 PCR的消减杂交法获得差异的 c DNA,并经多聚酶链反应扩增后克隆入 T载体测序 .用打点杂交法验证差异克隆 .结果　获得一胶质瘤相关的酸性成纤维生长因子基因同源物 .结论　该酸性成纤维生长因子基因同源物是酸性成纤维生长因子 m RNA的不同拼接产物 ,可能参与胶质瘤的形成 .; 邓艳春药立波王吉村刘新平聂晓燕季少平李福洋; 关键词：神经胶质瘤肿瘤相关基因酸性成纤维细胞生长因子 MRNA

鼠源抑癌新基因Ndr2的克隆、测序与生物信息学分析被引量：1: 2003年; 背景与目的:人源Ndr2(N-mycdown-streamregulator2)基因是本室于1999年从正常人全脑cDNA文库中克隆到的一个新基因犤GenBank,AF159092犦。初步实验表明,Ndr2有可能是一个抑癌基因。为进一步研究该基因的功能,我们拟克隆小鼠的Ndr2的基因组序列。方法:以小鼠的基因组文库为模板,采用RT-PCR方法扩增Ndr2基因的基因组片段,用310GeneticAnalyzer自动测序仪测序,GenBankBLAST相似性分析其与人源Ndr2基因同源性,PcGene和ORFFinder作读框分析,ProDom软件作结构域分析。结果:经琼脂糖DNA电泳鉴定,获得一约3310bp大小的特异条带,并克隆入pMD18-T载体。BLAST相似性分析结果表明该序列与人源Ndr2基因高度同源(同源性为91.4%),与鼠基因组数据库无同源性。已公布的鼠源Ndr2mRNA序列比较发现该基因有8个外显子,7个内含子。读框分析表明,该序列编码含200个氨基酸的蛋白质。ProDom软件分析发现其含有酰基携带蛋白(ACP)样结构域。结论:本研究克隆了一个鼠的Ndr2基因并已测序。该基因为一新基因,该序列已被GenBank收录(登录号:AY151387)。; 杨兴龙张亚历药立波刘新平季少平邢飞跃; 关键词：基因克隆生物信息学

信号分子GRF的PH结构域基因片段的克隆与表达被引量：3: 1999年; 目的：从大鼠脾脏克隆信号分子ｇｕａｎｉｎｅ－ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ－ｒｅｌｅａｓｉｎｇｆａｃｔｏｒ（ＧＲＦ）的ｐｌｅｃｋｓｔｒｉｎｈｏｍｏｌｏｇｙ（ＰＨ）结构域基因并进行谷胱甘肽转移酶（ＧＳＴ）融合表达，为进一步寻找其新配基、研究其功能打下基础．方法：采用一步法从大鼠新鲜脾组织中提取总ＲＮＡ，反转录合成ｃＤＮＡ，ＰＣＲ方法扩增目的基因片段，并克隆到载体ｐＵＣ１９中．引物末端标记后，以双脱氧终止法测序．然后再克隆到表达载体ｐＧＥＸ－４Ｔ－１中作ＧＳＴ融合表达．结果：信号分子ＧＲＦ的ＰＨ结构域基因完全正确，内部不含终止码．并在表达载体ｐＧＥＸ－４Ｔ－１中获得融合表达．结论：从组织细胞中克隆ＰＨ结构域基因是可行的方法，可在大肠杆菌中以ＧＳＴ融合蛋白的形式表达．; 季少平药立波白玉杰范金水苏成芝; 关键词：信号分子 PH结构域克隆基因表达 GRF

OS-9基因的融合表达、纯化及多克隆抗体制备被引量：14: 2003年; OS 9基因广泛表达于人体多种组织 ,该基因的表达产物可能与肿瘤的发生相关 .为获得可溶性表达的OS 9蛋白 ,制备多克隆抗体 ,深入了解OS 9基因的功能 ,将OS 9基因片段克隆入组氨酸标签融合的表达载体pET2 8a中 ,IPTG诱导 ,利用金属螯合亲和层析 (MCAC)进行纯化 ,薄层扫描及Bradford法检测纯化蛋白的纯度与含量 .免疫家兔制备多克隆抗体 ,利用间接ELISA法检测抗体效价 ,Western印迹检测抗体特异性 .经表达形式分析证明 ,融合蛋白大部分可溶 .薄层扫描分析纯度可达 90 %以上 ,Bradford法检测蛋白浓度约 0 1mg ml.抗血清效价可达 1∶32 0 0以上 ,Western印迹检测证明抗体特异性良好 .经诱导表达及纯化制备出可溶的纯度较高的OS 9蛋白产物。; 韩月恒张文红沈岚季少平刘新平药立波; 关键词：纯化多克隆抗体肿瘤

EphB2受体N端结构域蛋白的纯化及其对胃癌细胞蛋白酪氨酸磷酸化的作用被引量：1: 2001年; EphB2受体在细胞生长、分化和信号转导过程中具有重要作用,为深入研究其在胃癌的信号转导中的作用及功能,检测了EphB2受体刺激胃癌细胞后的酪氨酸磷酸化的变化。利用Ni-NTA金属螯合亲和层析法将在E.coli中融合表达的重组蛋白EphB2受体的N端球状区进行纯化,并经Western印迹进行确证和ELISA方法检测该蛋白活性,得到纯度95％以上的融合蛋白,并有结合其天然配体的活性,EphB2受体诱导可以使胃癌细胞发生明显的蛋白质酪氨酸磷酸化的改变,即通过反向刺激其ephrinB配体引起了胃癌细胞信号转导通路中一些信号分子酪氨酸磷酸化的改变。; 张晓光药立波俞强刘新平季少平韩炯苏成芝; 关键词：胃癌细胞信号转导酪氨酸激酶 N端结构域

蛋白激酶B的PH结构域可溶性表达与纯化及其二级结构分析被引量：2: 2003年; The serine/threonine protein kinase B(PKB) is related to cellular survival and regulation. PKB is composed of PH domain, catalytic domain and carboxyl terminal regulator domain. The PH domain of PKB is crucial to the activation of kinase. In order to investigate the function and the structure function relationship of PKB, the cDNA coding fragment of PKB PH domain was amplified from human dental pulp mRNA by RT PCR and cloned into pMD18 T vector to analyze the sequence. The result showed that DNA sequence of cloned human PKB PH domain was consistent with that reported previously. To express PKB PH domain, the cDNA was subcloned into expression vector pRSET A which was then transformed into E.coli BL21(DE3) pLysS, and the strain highly expressing soluble 6His PKB PH domain in minimal medium was obtained. The fusion protein was purified by Ni 2+ NTA agarose beads. The secondary structure of the purified 6His PKB PH domain fusion protein was analysed by circular dichroism. The results indicated that the PH domain was composed of α helix 1 7%,β pleated sheet 80 5% and radom coli 17 8%.; 沈岚季少平刘新平王吉村王立峰苏金药立波; 关键词：蛋白激酶B PH结构域可溶性表达纯化

PH结构域与细胞信号转导: 2000年; 药立波季少平; 关键词：PH结构域细胞信号转导

抑癌基因NDR2在肺癌中的表达: 目的:NDR2是本实验室从全脑cDNA文库中自主克隆的一个新的抑癌基因,为进一步明确抑癌基因在肺癌组织中的表达情况,研究与癌症发生之间的关系.方法:提取肺癌组织和其正常肺组织的总RNA,反转录成cDNA.利用RT-PCR...; 李树钧药立波刘新平季少平; 文献传递

ndr2基因在肺腺癌细胞GLC-82中的诱导表达被引量：4: 2002年; 目的　构建蜕皮素诱导的抑癌基因 ndr2哺乳动物真核表达载体 (p IND- ndr2 ) ,转染肺腺癌细胞 GL C- 82 ,观察ndr2基因表达 ,为进一步研究 ndr2的生物学功能打下基础 .方法　以 RT- PCR方法确定正常人肺组织和肺腺癌 GL C- 82细胞 ndr2的表达高低 . PCR方法扩增 ndr2 ,以 Bam HI+Eco RI双酶切连接入 p U C19载体中 ,测序正确后 ,插入到蜕皮素诱导的真核表达载体 p IND中 .连有 ndr2基因的载体(p IND- ndr2 )用脂质体方法转染到培养的肺腺癌细胞 GL C-82中 .经 G4 18和 zeocin双抗生素筛选后 ,挑取单克隆进行培养 ,用蜕皮素诱导 ndr2表达 ,用 RT- PCR,western印迹和免疫组织化学方法验证获得表达的细胞株 .结果　 PCR的方法扩增获得大小约 12 0 0 bp的片段 ,连接入预先插入 HA- tag的 p UC19载体的 ndr2基因经 H ind +Eco RI酶切后 ,构建到真核表达载体 p IND中 ,酶切鉴定后证明连接片段正确 .通过双载体转染和双抗生素筛选后 ,培养的细胞经诱导后检测到实验组 ndr2的高表达 ,而对照组和未诱导的实验组 ndr2表达均较低 .结论　 ndr2基因成功转染培养的肺腺癌 GL C-82细胞 ,建立了; 李树钧王华戚好文张健何鹏张文红季少平刘新平药立波; 关键词：肺腺癌细胞转染肺肿瘤 GLC-82细胞

MIP4的突变体构建及其对嗜酸粒细胞趋化的抑制被引量：3: 2003年; 目的 :为研究MIP4 (巨噬细胞炎性蛋白 4 )的突变体在拮抗嗜酸粒细胞的趋化作用中的活性 ,构建MIP4突变体(Met MIP4 )并进行原核表达和纯化 ,体外观察其拮抗嗜酸粒细胞的趋化作用 .方法 :将Met MIP4基因片段插入到pRSET A融合表达载体中 .诱导表达后 ,表达工程菌经超声裂菌后鉴定可溶性 ,细菌裂解上清经镍螯合亲和层析纯化 .采用葡聚糖沉淀法分离和纯化嗜酸粒细胞 ,利用 2 4孔Transwell双层板鉴定融合表达蛋白的趋化和抗趋化活性 .结果 :构建入融合表达载体pRSETA的基因在大肠杆菌中得到表达 .裂菌后鉴定显示融合蛋白可溶部分占 80 % ,经镍螯合亲和层析纯化后纯度达 87% .分离的嗜酸粒细胞纯度达到 90 % .拮抗嗜酸粒细胞趋化活性实验表明 ,纯化的Met MIP4蛋白具有明显拮抗嗜酸粒细胞的趋化作用 .结论 :Met MIP4突变体基因在pRSETA融合表达载体中获得可溶性表达和纯化 ,生物学活性实验表明融合的pRSET Met MIP4蛋白具有拮抗嗜酸粒细胞的趋化作用的活性。; 李树钧戚好文叶江枫帝新宇季少平何鹏张英起药立波; 关键词：趋化因子嗜酸粒细胞基因表达

季少平

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