张琴
- 作品数：7 被引量：5H指数：2
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- TAT-tCNTF对CD损伤细胞的作用机制研究
- 2014年
- 目的:探讨TAT-tCNTF对细胞松弛素D(CD)导致的人脐静脉内皮细胞株(HUVECs)损伤的作用机制。方法:TATtCNTF处理经CD损伤的细胞,CCK-8法检测其对细胞活力的影响;荧光显微镜观察罗丹明-鬼笔环肽标记的F-actin的变化;荧光显微镜和流式细胞术(FCM)检测细胞内Fluo 4-AM标记的Ca2+浓度变化;Western blot检测F-actin蛋白水平变化。结果:10μmol·L-1 CD降低HUVECs的细胞活动度(P<0.000 1),而10μg·mL-1的TAT-tCNTF明显升高HUVECs的细胞活动度(P=0.003);荧光显微镜下观察到CD作用后的细胞F-actin断裂且分布减少,而TAT-tCNTF可改善这一现象;TAT-tCNTF可降低由CD引起的细胞内Ca2+超载;FCM显示CD组Ca2+荧光强度(MFI)较对照组增强,而(CD+TAT-tCNTF)组的MFI较CD组减弱。Western blot结果显示各组F-actin表达量无明显差异。结论:TAT-tCNTF对CD引起的细胞损伤有改善作用,其机制与维持细胞骨架结构和缓解细胞内Ca2+超载有关。
- 张宏张琴刘泽源徐亚飞曲恒燕
- 关键词：F-ACTIN
- TAT-tCNTF对CD诱导HUVEC细胞损伤的作用研究
- 2013年
- 目的探讨TAT—tCNTF对细胞松弛素D（cD）诱导人脐静脉内皮细胞（HuvEc）损伤作用的影响。方法CCK-8法检测TAT—tCNTF对CD致HUVEC生长抑制的作用；荧光显微镜检测CD诱导HUVEC的F—actin的变化，以及在TAT—tCNTF作用下对细胞微丝的影响；荧光显微镜和流式细胞术检测CD和TAT—tCNTF作用后细胞内Ca^2＋浓度；Westernblot检测CD和TAT—tCNTF作用后F—actin的蛋白水平的变化。结果在1μg·ml^-1。的CD作用HUVEC后，细胞表现出明显的生长抑制，而在0．05～10μg·ml^-1。浓度范围内，TAT—tCNTF促进HUVEC的生长，并可改善CD对HUVEC的损伤，TAT—tCNTF组与CD＋TAT—tCNTF组细胞活动度具有明显差异；荧光显微镜下检测到经CD作用后细胞F-actin分布减少，而经TAT—tCNTF作用后细胞F-actin分布密集；采用Fluo4-AM荧光探针标记细胞内Ca^2＋浓度，荧光显微镜和流式细胞术检测到TAT—tCNTF能够降低经CD损伤HUVEC后的细胞内Ca^2＋浓度升高；FCM检测显示，CD组的MFI相对于对照组明显增加，而CD＋TAT—tCNTF组MFI较CD组明显降低。Westernblot显示各组之间的F—actin表达量没有明显改变。结论TAT—tCNTF对CD致内皮细胞的损伤有改善和逆转作用，其改善机制可能与增加细胞活性和维持细胞骨架有关。
- 张琴刘泽源曲恒燕
- 关键词：HUVEC细胞损伤TAT细胞内CA^2+浓度CDWESTERNBLOT
- TAT-tCNTF提高Aβ损伤细胞模型的GSH水平和SOD酶活性研究被引量：2
- 2012年
- 目的:探讨TAT-tCNTF、TAT48-58、rhCNTF对Aβ损伤/非损伤SH-SY5Y细胞模型的GSH水平和SOD酶活性的影响,以分别评价其抗氧化应激效应。方法:采用析因设计研究经TAT-tCNTF、TAT48-58和rhCNTF处理后,Aβ损伤/不损伤的SH-SY5Y细胞模型的GSH水平和SOD酶活性;采用单因素多水平设计五个浓度水平的TAT48-58对SH-SY5Y细胞的GSH水平和SOD酶活性。结果:不同蛋白类型对GSH水平和SOD活性影响的结果分别为F=11.13,P<0.000 1和F=10.18,P<0.000 1。TAT-tCNTF与SH-SY5Y共孵育后损伤和非损伤模型的SOD活性和GSH水平分别为(0.57±0.01)%,(0.61±0.02)%和(5283±578)U.L-1,(6394±173)U.L-1。加入不同TAT48-58浓度对SH-SY5Y细胞的SOD活性和GSH含量影响方差分析FSOD=1.86,P=0.156 6,FGSH=1.55,P=0.261 7。结论:TAT-tCNTF能提高Aβ损伤的SH-SY5Y细胞模型的GSH水平和SOD活性的效应,TAT48-58不能引起细胞内氧化应激作用。
- 吴行伟张琴唐希吴坤任文静赵振满陈晓倩金欣王德花刘泽源曲恒燕
- 关键词：睫状神经营养因子蛋白转导域析因设计
- 质粒pBV220-PTD-tCNTF转化BL21菌株感受态细胞的高效制备方法被引量：3
- 2012年
- 目的比较几种常用大肠杆菌感受态制备方法,探讨影响pBV220-PTD-tCNTF转化大肠杆菌感受态细胞的因素并得出最优水平组合。方法采用4种制备感受态细胞的方法即CaCl2法,CaCl2-甘油法,TSSG法和INOUE法,比较4种方法制备的感受态细胞即时和-80℃保存30 d对质粒PBV220-PTD-tCNTF的转化效率;L8(27)正交设计研究Mg2+、INOUE重悬液、PEG、甘油和DMSO对pBV220-PTD-tCNTF转化大肠杆菌感受态的影响;对得出的最佳水平组合进行验证并对转化好的细胞进行测序验证。结果 CaCl2法,CaCl2-甘油法,TSSG法,INOUE法4种方法的转化率分别为:(5.43±0.72)×106、(7.45±0.65)×106、(9.71±1.81)×106、(8.52±1.22)×107;-80℃保存30 d的转化效率为:(6.20±0.31)×104、(6.57±0.97)×106、(9.76±1.31)×106、(1.63±0.019)×106;正交结果 Mg2+(A)、IN-OUE重悬液(B)、PEG(C)、甘油(D)和DMSO(E)各因素的P值分别为0.0357、0.0154、0.0677、0.2503和0.1749;最佳水平组合实施的转化率为(29.63±4.95)×107并经测序确定转入质粒的正确性。结论分析出各因素对pBV220-PTD-tCNTF转化感受态细胞转化率的影响程度,得出了其最佳水平组合A1B1C1D2E1,并得到了(29.63±4.95)×107的转化效率。
- 吴行伟刘泽源李前蒲韵竹任汝通许秀丽刘霏霏张琴吴媛曲恒燕
- 关键词：感受态细胞正交设计PBV220CNTF
- 重组蛋白TAT-tCNTF的可溶性表达
- 目的:通过用改造过的E.clon BL/21工程菌株来实现对融合蛋白TAT-tCNTF的可溶性表达,并对获得的蛋白进行活性鉴定。方法:使用转化入PBV220-IAT-tCNTF的工程菌株对目标蛋白进行表达,产物过阴离子交...
- 吴行伟刘泽源张琴曲恒燕
- 关键词：睫状神经营养因子可溶性表达生物活性
- 文献传递
- rhCNTF对Aβ损伤海马神经元的作用机制研究
- 2014年
- 目的:探讨重组人睫状神经营养因子(rhCNTF)对Aβ损伤的海马神经元的作用机制。方法:分离、纯化Wistar乳鼠海马组织,获得海马神经元并进行体外培养。采用神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫细胞化学进行鉴定。100 ng·mL-1的rhCNTF和10μmol·L-1的聚集态Aβ作用于海马神经元。CCK-8法检测rhCNTF对Aβ损伤的海马神经元活力影响。流式细胞术检测rhCNTF对Aβ致海马神经元早期凋亡的影响。结果 :免疫细胞化学法成功鉴定了海马神经元。海马神经元活动度随着rhCNTF浓度增加而增大且呈指数相关。镜下观察到rhCNTF+Aβ组细胞形态较Aβ组好;相对于Aβ组,rhCNTF+Aβ组和Aβ+rhCNTF组的海马神经元活动度显著增高(P<0.01)。rhCNTF可减少Aβ引起的细胞早期凋亡。结论 :rhCNTF对Aβ损伤的海马神经元有保护作用,其机制与促进神经元生长和减少细胞凋亡有关。
- 张琴刘泽源曲恒燕
- 关键词：海马神经元Β淀粉样肽阿尔茨海默病细胞凋亡
- TAT-tCNTF对CD诱导HUVEC细胞损伤的作用研究
- 目的：探讨TAT-tCNTF对细胞松弛素D(CD)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤作用的影响.
方法：CCK-8法检测TAT-tCNTF对CD致HUVEC生长抑制的作用;荧光显微镜检测CD诱导HUVEC的...
- 张琴刘泽源曲恒燕
- 关键词：人脐静脉内皮细胞
- 文献传递
