张艳玲
- 作品数：8 被引量：16H指数：3
- 供职机构：北京大学第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金北京大学人类疾病基因研究中心科研基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 应用酵母双杂交系统筛选新基因AngRem104相关蛋白被引量：6
- 2003年
- 目的 :应用酵母双杂交系统筛选与新基因AngRem10 4相互作用的蛋白 ,为该基因的功能研究提供线索。方法 :构建AngRem10 4的真核表达载体AngRem10 4 pGBKT7/c myc,转化酵母菌AH10 9,Westernblot证实蛋白表达 ,进行毒性和自激活检验 ,与转化了成人肾脏cDNA文库的酵母菌Y187接合 ,筛选与AngRem10 4相互作用的蛋白。结果 :AngRem10 4蛋白能在酵母中正常表达 ,对酵母细胞无毒性 ,不存在自激活现象。筛选出的蛋白包括真核翻译延伸因子 1α1、糖皮质激素受体AF 1特异延伸因子、β2 微球蛋白、巴戴 -比德尔综合征 2蛋白及 4个与细胞代谢有关的蛋白。结论 :AngRem10 4可能影响细胞内某些转录因子活性和细胞代谢 ,并与某些免疫相关疾病和遗传病发病有关。酵母双杂交结果为AngRem10
- 张艳玲张宏梁秀彬侯平王海燕
- 关键词：酵母双杂交系统基因蛋白
- 应用酵母双杂交系统筛选新基因Collectrin相关蛋白被引量：3
- 2005年
- Collectrin是在小鼠 5 6肾切除后 ,在肾小球的高滤过、高增生期分离克隆的一个新基因 .通过酵母双杂交系统从人肾脏cDNA文库中筛选与collectrin相互作用的蛋白 ,可以为该基因的功能研究提供线索 .构建collectrin的真核表达载体collectrin pGBKT7 c myc ,转化酵母菌AH10 9.Western印迹证实 ,collectrin蛋白能够在酵母中正常表达 ,对酵母细胞无毒性 ,不存在自激活现象 .将AH10 9 collectrin pGBKT7 c myc与转化了成人肾脏cDNA文库的酵母菌Y187接合 ,共筛选到 5个与细胞代谢有关的蛋白 ,包括鞘磷脂激活蛋白、精氨琥珀酸合成酶、氨基酸转运蛋白XAT2、NADH脱氢酶 1和金属硫蛋白 2A .由此推论 ,collectrin可能通过与细胞内某些酶类相互作用而影响细胞代谢 ,为新基因collectrin的功能研究提供了重要线索 .
- 张宏张艳玲梁秀彬侯平王海燕
- 关键词：酵母双杂交系统蛋白间相互作用
- 小儿丙酸血症1例被引量：3
- 2001年
- 张艳玲张月华田上泰子花井润师福士胜王颖冯琪郭在晨秦炯
- 关键词：儿童丙酸血症
- 新基因AngRem104与糖皮质激素受体特异延伸因子的相互作用被引量：2
- 2004年
- 目的应用免疫共沉淀技术,验证新基因AngRem104和糖皮质激素受体特异延伸因子(GR-EF)蛋白在哺乳动物细胞中的相互作用,为进一步研究AngRem104的生理功能奠定基础。方法构建AngRem104-pcDNA3.1/V5-His和GR-EF-pCMV/c-myc融合表达载体,共转染HEK293T细胞。分别用小鼠抗人c-myc单克隆抗体和小鼠抗人V5-HRP抗体进行免疫沉淀和免疫印迹,以验证AngRem104和GR-EF蛋白间的相互作用。结果AngRem104-V5融合蛋白能够在c-myc抗体的免疫沉淀物中检测出来;在V5抗体的免疫沉淀物中也能检测到GR-EF-c-myc融合蛋白。结论新基因AngRem104和GR-EF蛋白在哺乳动物细胞中存在直接相互作用。
- 张艳玲张宏侯平梁秀彬崔太根王海燕
- 关键词：糖皮质激素免疫共沉淀
- 应用酵母双杂交系统筛选新基因Collectrin相关蛋白
- 目的：应用酵母双杂交系统筛选与新基因Collectrin相互作用的蛋白,为该基因的功能研究提供线索。
方法：构建Collectrin的真核表达载体Collectrin-pGBKT7／c-myc,转化酵母茵AHl...
- 张艳玲张宏梁秀彬侯平王海燕
- 关键词：相互作用蛋白酵母双杂交
- 文献传递
- 新基因AngRem104与Bardet-Biedl综合征2蛋白的相互作用
- 2005年
- 目的 筛选与新基因AngRem104相互作用的蛋白,并验证AngRem104和BardetBiedl综合征2(BBS2)蛋白在哺乳动物细胞中的相互作用,为进一步研究AngRem104的生理功 能奠定基础。方法 构建AngRem104的酵母真核表达载体AngRem104-pGBKT7／c-myc.用以转 化酵母菌AH109,并与转化了成人肾脏cDNA文库的酵母菌Y187接合,筛选与AngRem104相互 作用的蛋白。从中挑选Bardet-Biedl综合征2蛋白进行免疫共沉淀,构建AngRem104-pcDNA3.1／ V5-His和BBS2-pCMV／c-myc融合表达载体,共转染HEK293T细胞。分别用小鼠抗人c-myc单 克隆抗体和小鼠抗人V5-HRP抗体进行免疫沉淀和免疫印迹,以验证AngRem104和BBS2蛋白 间的相互作用。结果 以AngRem104为诱饵蛋白在人肾脏cDNA文库中共筛选到包括BBS2在 内的7个与之存在相互作用的蛋白。免疫共沉淀结果显示,AngRem104-V5融合蛋白能够在cmyc抗体的免疫沉淀物中检测出来:在V5抗体的免疫沉淀物中也能检测到BBS2-c-myc融合 蛋白。结论AngRem104和BBS2蛋自在哺乳动物细胞中存在某种相互作用,为新基因 AngRem104功能探讨和Bardet-Biedl综合征发病机制的研究提供了有价值的线索。
- 张宏张艳玲侯平梁秀彬王海燕
- 关键词：BARDET-BIEDL综合征相互作用融合表达载体293T细胞S2蛋白诱饵蛋白
- 人Collectrin同源基因的分离克隆及其在人肾集合管和远曲小管的特异表达被引量：3
- 2004年
- 为探讨collectrin在人类疾病中的作用 ,利用人类collectrin同源性引物 ,经末端cDNA快速扩增法分离获得人collectrin基因全长序列并对collectrin进行生物信息学分析及定位表达研究 .结果发现 ,人类collectrin(GenBank登录号为AF2 2 9179)基因全长含 1345bp ,开放阅读框架编码 2 2 2个氨基酸 .在核苷酸和氨基酸水平 ,与小鼠collectrin序列分别有 86 9%和 87 4 %同源性 .生物信息学分析结果提示 ,collectrin为一个 2 5kD的具有一个信号肽和一个跨膜区的跨膜糖蛋白 .人类collectrin与人类血管紧张素转换酶相关的羧基肽酶 (ACE2 )具有 4 7 8%高度同源性 .人多组织Northern杂交结果显示 :collectrin基因为人类肾脏特异性表达基因 .原位杂交及免疫组化证实 ,与小鼠collectrin特异表达于集合管细胞不同 ,人collectrin基因mRNA及其蛋白产物除位于肾脏集合管细胞外 ,远曲肾小管细胞也有表达 .由此推论 ,人类collectrin基因为肾脏特异性表达基因 ,与人类血管紧张素转换酶相关的羧基肽酶具有高度同源性 ,可能为血管紧张素转换酶 (ACE)基因家族的新成员 .
- 张宏和田淳李寒张艳玲桢野博史王海燕
- 关键词：血管紧张素转换酶特异性表达细胞外特异表达
- 小鼠Collectrin正反义真核表达载体的构建及其功能被引量：1
- 2004年
- 目的 :构建新基因Collectrin的正反义真核表达载体 ,研究其与细胞生长的关系。方法 :以PCR的方法扩增Collectrin的开放阅读框序列 ,与载体 pcDNA3.1 /V5 His相连构成融合基因表达质粒。将重组后的质粒进行细菌转化 ,质粒扩增、纯化后 ,测序鉴定Collectrin的正义及反义序列。以脂质体介导的方法体外转染肾皮质集合管细胞系 (M 1 )。以 β Galstaining的方法测定转染效率。分别行逆转录 PCR和Westernblot,检测不同融合基因转染后细胞CollectrinmRNA和蛋白水平的表达变化。以四甲基偶氮唑蓝 (MTT)参入法分别在第 2 4小时、第 4 8小时测定不同融合基因转染后细胞增殖活性。结果 :M 1细胞在融合基因转染第 2 4小时转染效率最高。Collectrin正义转染组较反义、空载体和正常对照组在核酸和蛋白水平表达量都显著增高 ,Collectrin反义转染组蛋白表达较其他组明显下调。反义转染组细胞较其他组明显减少。结论 :成功构建了Collectrin正义及反义真核表达载体 ,Col
- 张宏王湘玲张艳玲侯平李寒王海燕
- 关键词：小鼠真核表达载体脂质体细胞分裂肾素-血管紧张素系统
