明晓波
- 作品数：11 被引量：19H指数：3
- 供职机构：东北农业大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：黑龙江省教育厅科学技术研究项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鸡氨肽酶N基因克隆及原核表达
- 本实验从鸡胚肾组织中克隆到表达鸡氨肽酶N的全长基因，将扩增到的全长鸡氨肽酶N基因连接到pMD18-T载体并转化大肠杆菌感受态TG1，提取重组质粒，经PCR及酶切鉴定阳性后送测序，结果与公布序列符合率达99.48％，与预期...
- 明晓波张颖尹鑫魏萍王宗尉李若飞
- 关键词：鸡传染性支气管炎氨肽酶N基因克隆原核表达多克隆抗体
- 文献传递
- 鸡传染性支气管炎病毒受体研究进展被引量：1
- 2008年
- 鸡传染性支气管炎是一种世界性分布的严重影响养鸡业的高度接触性传染病,其病原是一种最早发现的冠状病毒鸡传染性支气管炎病毒(IBV)。IBV入侵细胞的受体是目前IBV研究中的热点之一。已知IBV囊膜上的纤突蛋白(S)是宿主组织和细胞嗜性及致病性的主要决定因素,S蛋白通常断裂为S1和S2两部分,S1与宿主细胞膜上的细胞受体相结合,在S2的作用下病毒囊膜与宿主细胞膜融合,IBV与受体结合之后于中性或微碱性pH时发生构象改变,从而获得病毒进入宿主细胞的能力。对于IBV的受体研究主要集中于IBV可能使用的几种功能性受体,包括氨肽酶N、唾液酸、硫酸乙酰肝素等。
- 明晓波魏萍
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒S1基因细胞受体氨肽酶N硫酸乙酰肝素
- 鸡氨肽酶N的高效可溶性表达及生物学功能分析被引量：6
- 2010年
- 本研究旨为克隆鸡氨肽酶N(chAPN)基因,高效表达可溶性目的蛋白,并测定其生物学功能。应用RT-PCR方法从鸡胚肾细胞中克隆chAPN的基因片段,经测序鉴定后再克隆至原核表达载体pCOLD-TF,构建重组原核表达质粒pCOLD-TF-chAPN,在大肠杆菌BL21(DE3)中经不同条件诱导表达目的蛋白;利用镍柱亲和层析法纯化可溶性蛋白,并进行SDS-PAGE、Western blotting鉴定;Leu-PNA酶促反应和ELISA等方法检测目的蛋白生物学功能。结果显示,重组质粒pCOLD-TF-chAPN在大肠杆菌中以可溶形式高效表达;酶促反应及ELISA结果显示该蛋白具有酶活性,可结合传染性支气管炎病毒(IBV),并表现为剂量依赖性。这为今后研究chAPN的酶活性、作为IBV受体及抗病毒功能奠定了实验基础。
- 尹鑫刘澜澜贾莹明晓波张颖李甜甜魏萍
- 关键词：可溶性酶活性
- 不同日龄雏鸡各组织中氨肽酶N酶活性比较
- 本实验通过采取5个不同日龄雏鸡的心、肝、脾、肺、肾、腺胃、胸肌、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、法氏囊等十二个组织器官,提取各组织中的总蛋白,通过BCA试剂盒测定各组织的蛋白浓度,使等量各组织总蛋白与等量Leu-PNA在37...
- 明晓波张颖谭睿尹鑫魏萍
- 关键词：蛋白质提取氨肽酶N酶活性测定组织嗜性细胞受体
- 文献传递
- 鸡氨肽酶N基因克隆及原核表达
- 本实验从鸡胚肾组织中克隆到表达鸡氨肽酶N的全长基因,将扩增到的全长鸡氨肽酶N基因连接到pMD18-T载体并转化大肠杆菌感受态TG1,提取重组质粒,经PCR及酶切鉴定阳性后送测序,结果与公布序列符合率达99.48%,与预期...
- 明晓波张颖尹鑫魏萍王宗尉李若飞
- 关键词：氨肽酶N基因克隆原核表达多克隆抗体
- 文献传递
- 鸡APN组织定量、表达及其作为IBV受体可能性评价
- APN作为多种Ⅰ群冠状病毒的功能性受体，在冠状病毒感染细胞中发挥着重要作用。受体利用在冠状病毒几个群及属之间一致性很少，冠状病毒似乎可以采用多种策略便于与宿主受体结合从而与靶细胞发生相互作用。作为冠状病毒的IBV进入细胞...
- 明晓波
- 关键词：酶活性
- 文献传递
- 不同日龄雏鸡各组织中氨肽酶N酶活性比较
- 本实验通过采取5个不同日龄雏鸡的心、肝、脾、肺、肾、腺胃、胸肌、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、法氏囊等十二个组织器官，提取各组织中的总蛋白，通过BCA试剂盒测定各组织的蛋白浓度，使等量各组织总蛋白与等量Leu-PNA在37...
- 明晓波张颖谭睿尹鑫魏萍
- 关键词：雏鸡传染性支气管炎氨肽酶N酶活性组织嗜性
- 文献传递
- 鸡氨肽酶N基因转染BHK-21细胞后IBV感染情况的改变被引量：1
- 2010年
- 构建了带绿色荧光蛋白基因及鸡氨肽酶N全长基因的真核表达重组载体,重组载体转染BHK-21细胞后12h开始可见绿色荧光,36h荧光最强,试验中转染24h后感染IBV鸡胚肾细胞适应毒,72h收获病毒接下一次转染的BHK-21细胞,如此在转染细胞上连续传5代,用间接免疫荧光检测各代次病毒感染转染BHK-21细胞,可见随着代次增加,感染程度增加;病毒毒力EID50逐渐增加,第5代时原病毒毒力基本恢复,半定量RT-PCR检测各代次病毒也可见病毒含量逐渐增加。结果表明,鸡氨肽酶N转染至IBV非易感的BHK-21细胞系后,BHK-21细胞变得对IBV敏感,鸡氨肽酶N可能用作IBV感染的细胞受体。
- 明晓波张颖刘澜澜魏萍
- 关键词：氨肽酶N间接免疫荧光绿色荧光蛋白BHK-21
- 氨肽酶N mRNA在雏鸡不同组织中的表达情况被引量：5
- 2009年
- 为揭示鸡氨肽酶N(cAPN)含量差异与传染性支气管炎病毒(IBV)组织嗜性之间的关系,以看家基因鸡β-actin为内参基因,与cAPN目的基因在相同体系中扩增,以cAPN-pMD18-T标准质粒扩增曲线为标准,计算内参基因及目的基因各自的表达量,并将二者的比值作为相对定量依据,比较不同日龄雏鸡各组织cAPN含量的不同。结果显示,随着日龄增加,肝、脾、法氏囊、回肠、肾等组织中的cAPN表达量相对稳定,肺、腺胃、空肠等组织中的cAPN表达量呈现持续下降趋势,而十二指肠中的cAPN表达量持续上升,但盲肠、空肠中的cAPN表达量规律性不强且波动较大。表明cAPN的表达与IBV亲嗜组织存在着密切的相关性,同时也侧面反映了IBV组织嗜性的差异在一定程度上取决于机体不同组织器官cAPN的含量差异。
- 明晓波尹鑫张颖曾祥伟魏萍
- 关键词：逆转录聚合酶链反应氨肽酶NΒ-ACTIN基因
- 传染性支气管炎病毒(IBV)小囊膜蛋白基因的原核表达被引量：6
- 2008年
- 以传染性支气管炎病毒(IBV)M41毒株为材料,克隆该毒株的小囊膜蛋白(E)基因,并将其连接到表达载体pGEX-6P-1中,转化到大肠杆菌BL21中。经IPTG诱导后,SDS-PAGE分析目的蛋白与谷胱苷肽硫转移酶(GST,大小约为26ku)融合后大小约为38ku,表明目的蛋白相对分子质量约为12.4。这一结论为E蛋白的进一步研究提供了条件。
- 张芳曾祥伟明晓波魏萍祝玉卿王琳
- 关键词：蛋白表达
