王书晖
- 作品数：21 被引量：5H指数：1
- 供职机构：中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 新冠灭活疫苗序贯免疫对Wuhan-Hu1和Omicron变异株的体液免疫反应
- 2023年
- 目的研究新冠灭活疫苗序贯免疫策略对Wuhan-Hu1和Omicron变异株中和抗体的影响。方法BALB/c小鼠免疫两针Wuhan-Hu-1灭活疫苗,再分别用Omicron或Wuhan-Hu-1灭活疫苗加强免疫,采用酶联免疫吸附试验检测小鼠血清结合抗体水平;用水疱性口炎病毒假病毒检测系统检测小鼠血清中Omicron变异株中和抗体水平;采用酶联免疫吸附斑点实验检测特异性T细胞反应。结果与免疫一针Wuhan-Hu1灭活疫苗相比,免疫两针疫苗提高小鼠血清特异性Wuhan-Hu1、Delta和Omicron受体结合域(receptor binding domain,RBD)IgG滴度。与加强免疫Wuhan-Hu1灭活疫苗组相比,小鼠加强免疫Omicron灭活疫苗后,血清Wuhan-Hu1和Omicron特异性结合抗体RBD IgG GMT分别提高1.41和1.26倍;针对Omicron变异株BA.1、BA.2、BA.4/5和BF.7的中和抗体GMT分别提高4.5、3.4、12.1和6.5倍。加强免疫Wuhan-Hu1或Omicron灭活疫苗后,小鼠血清Wu-RBD IgA滴度高于免疫一针Wuhan-Hu1灭活疫苗(P=0.0057,P=0.0061)。结论加强免疫Omicron灭活疫苗能提高Omicron变异株的中和抗体水平。Wuhan-Hu1或Omicron灭活疫苗加强免疫能显著增强小鼠诱导的Wuhan-Hu1 RBD IgA。
- 申秀丽郝彦玲王书晖刘颖任莉李丹朱美玲李静唐雯琪李宾邵一鸣
- 关键词：中和抗体体液免疫
- 牛泡沫病毒内部启动子上顺式作用元件具有增强子特性被引量：1
- 2002年
- 以牛泡沫病毒（bovine foamy virus,BFV）中国毒株 BFV3026为材料,研究env基因内部启动子（internal promoter,IP）上顺式作用元件的功能特点.用PCR方法进行系列缺失,将IP中BFV反式激活因子 Tas应答元件（TREIP）精确定位于 TATA盒近上游的 72bp区段中（9205～9276）.发现此段可激活同源及异源启动子,具有典型增强子特性;此区段与已知SFV-1TREIP近启动子区和 SFV-3 TREIP序列同源性高,都具有核因子 NF-1（nuclear factor1）的结合位点,位置相同,推测此类顺式作用元件具有相似功能特点.
- 乔文涛郭春光王书晖王金忠陈启民耿运琪
- 关键词：牛泡沫病毒ENV基因
- 缺失C8-K3片段重组天坛痘苗病毒的免疫策略研究
- 2013年
- 目的探索不同的DNA疫苗初免-重组痘苗病毒加强免疫策略的效果,为建立最佳免疫方案提供依据。方法对小鼠进行DNA疫苗初免,之后分别加强免疫一针、两针和三针重组痘苗病毒VTT△C8-K3-gag,在不同时间点采取血样及制备脾细胞,检测针对痘苗病毒和HIV特异性体液免疫及细胞免疫应答。结果三种免疫策略中,DNA疫苗初免-VTT△C8-K3-gag加强免疫两次的效果最佳,诱导的针对p55的结合抗体滴度达到106,分泌IFN-γ的T细胞数为342/106细胞。针对痘苗病毒的体液和细胞免疫应答显著低于加强免疫三针诱导的免疫反应。结论DNA疫苗初免-VTT△C8-K3-gag加强免疫两针可诱导较高水平的HIV免疫应答,同时保证了较低水平的载体免疫反应。
- 刘铮刘颖王书晖张其程王荣敏侯爵刘畅吉栩邵一鸣
- 关键词：痘苗病毒天坛株DNA疫苗免疫策略
- BHIVgag-pol基因在MT-4细胞中的表达
- 2001年
- 以HIV 1HXBc2毒株为遗传背景 ,通过DNA重组技术构建出嵌合有BIVR2 9gag pol基因的重组病毒BHIVcDNA .BHIVcDNA经电转染导入人源细胞MT 4后 ,分别收集第 1d到第 7d的细胞和培养液上清进行检测 .RT PCR分析证实BHIV的 gag基因已得到转录 ;反转录酶活性测定表明 ,BHIV中源于BIV的反转录酶已得到正确转录、翻译并加工成熟 .这些结果说明重组病毒BHIVcDNA中HIV控制下的BIV gag pol基因能够在MT
- 王书晖熊鲲刁丽榕陈国敏王金忠陈启民耿运琪曾毅
- 关键词：CDNART-PCR基因表达艾滋病疫苗
- BIV在人源细胞MT-4中的活性研究被引量：1
- 2002年
- 牛免疫缺陷病毒 (Bovineimmunodeficiencyvirus,BIV)在分类上属于反转录病毒科的慢病毒属 ,目前尚未见BIV感染人的报道。为进一步确定BIV对人源细胞的感染性 ,我们用BIV12 7cDNA转染人源细胞MT 4 ,通过RT PCR检测到BIVgag基因的转录 ,IFA则显示BIV12 7的 gag或 gag pol基因在MT 4细胞中得到了翻译 ,而RT值的测定也有力地说明BIV12 7cDNA已经在MT 4细胞内表达出有活性的反转录酶 ,但细胞传代实验表明BIV不能在MT
- 王书晖熊鲲杨怡姝朱义鑫夏秋雨陈国敏王金忠陈启民耿运琪曾毅
- 关键词：IBV牛免疫缺陷病毒基因表达
- BHIV cDNA的构建及其生物学活性研究
- 该文用DNA重组技术分别置换HIV和BIV的相应基因,构建出3种以HIV为主体的BHIV cDNA和1种以BIV为主体的BHIV cDNA,将这些重组病毒cDNA转染MT-4细胞,通过RT-PCR方法分析病毒早期基因和晚...
- 王书晖
- 关键词：HIVBIV活性分析
- 文献传递
- 以化学合成和体外转录RNA为参考品的SIV/SHIV RNA定量检测方法比较研究
- 2023年
- 目的比较化学合成与体外转录的RNA作为参考品定量检测SIV/SHIV RNA的重复性、稳定性及灵敏度,建立一种实时、灵敏、特异的SIV/SHIV RNA载量检测方法。方法用化学合成的方法合成91个核苷酸(nucleotide,nt)的SIV/SHIV Gag RNA;用带T7启动子的特异性引物逆转录SHIVSF162 P3的基因组RNA,得到带T7启动子的DNA序列后,经体外转录合成385 nt Gag RNA。将两种RNA分别进行10倍系列稀释,通过一步法TaqMan探针荧光定量逆转录PCR(quantitative Real-time reverse transcription PCR;qRT-PCR)测定标准曲线和扩增曲线,10次独立实验重复测量,对比两种RNA的灵敏度和重复性,检测在4℃和25℃分别放置3 h、6 h和9 h后的两种RNA的扩增曲线和Ct值,比较两种RNA的稳定性。结果体外转录RNA组中,相同浓度复孔的扩增曲线重合度高,各浓度Ct值线性关系较好,标准曲线方程为:Y=-3.709x+49.143,R2=0.999,检测灵敏度为5.5×103拷贝/ml,10次重复测量的平均变异系数仅为2.24%;而化学合成RNA组的标准曲线方程为:Y=-4.014x+53.108,R2=0.944,检测灵敏度为5.5×104拷贝/ml,10次重复测量的平均变异系数为5.33%。体外转录RNA组检测结果的稳定性、重复性和灵敏度更高。结论使用体外转录RNA作为参考品,建立的检测方法的灵敏度、特异性、重复性及稳定性均优于化学合成的RNA,用该参考品建立的一步法TaqMan探针qRT-PCR检测方法可用于SIV/SHIV RNA载量分析。
- 李静刘颖李丹申秀丽王书晖
- 关键词：体外转录化学合成荧光定量PCR
- 重组李斯特细菌载体HIV疫苗LmHIV CN54 gag的培养温度及免疫剂量与其毒力及免疫原性的关系研究
- 刘莹刘芳王荣敏刘颖邵一鸣王书晖
- 表达EIAV Gag蛋白的DNA载体与重组痘苗病毒联合免疫效果的观察
- 2004年
- 将中国马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗及其亲本株的gag基因通过同源重组插入到痘苗病毒天坛株的TK区,经蓝白斑筛选获得重组痘苗病毒rvv-DLVgag和rvv-LNgag.Westernblot检测可知重组痘苗病毒能够有效表达完整的EIAVGag蛋白.使用本实验室构建的表达EIAVDLV和LNGag蛋白的DNA载体单独或与表达相应蛋白的重组痘苗病毒联合免疫小鼠,结果表明各免疫组小鼠体内均产生了针对EIAV的特异性体液和细胞免疫应答.统计学分析显示,联合免疫组与单独免疫组相比,诱导的特异性结合抗体滴度无显著性变化,而淋巴细胞增殖应答和CTL水平则显著增强,CTL杀伤率最高可达31%,DLVGag蛋白与LNGag蛋白诱导的免疫应答强度无显著性差异.研究结果有助于阐明我国按照传统路线研制成功的EIAV弱毒疫苗的免疫机制,并为EIAV基因工程疫苗的开发研制奠定基础.
- 代春铭张晓燕王书晖刘颖段丹丽沈荣显邵一鸣
- 关键词：重组痘苗病毒联合免疫CTL马传染性贫血病毒
- 中国恒河猴外周血淋巴细胞免疫表型及功能研究被引量：1
- 2023年
- 目的通过研究中国恒河猴外周血淋巴细胞免疫表型及其功能,为以恒河猴为模型的研究提供数据参考。方法通过优选抗体克隆和荧光配色,确定了主要淋巴细胞亚群检测和T细胞功能检测Panel,并用此方法分析15只健康中国恒河猴外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中T、B、NK等多种细胞亚群的比例,以及在非特异性刺激条件下T细胞分泌细胞因子的能力。结果成功建立了两套多色流式Panel,Panel 1可同时检测细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T-lymphocyte,CTL)、滤泡辅助性T细胞(follicular helper T cell,Tfh)、调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)、B细胞和NK细胞等多种淋巴细胞亚群,Panel 2可检测多种T细胞亚群功能和免疫检查点分子的表达。中国恒河猴PBMCs中主要淋巴细胞亚群比例的平均值分别为T细胞(75.32±7.73)%、B细胞(13.22±7.50)%、NK细胞(0.88±0.48)%、Tfh细胞(0.73±0.27)%、Treg细胞(0.75±0.43)%、CD16+NK细胞(47.87±22.35)%、CD56+NK细胞(10.69±12.41)%。非特异性刺激后,分泌IL-2和TNF-α的CD4+T细胞比例高于CD8+T细胞,分泌CD107a和IFN-γ的CD8+T细胞比例高于CD4+T细胞,而这两种细胞分泌IL-17A的比例均较低。结论本研究建立了可在单细胞水平同时检测多个细胞表面分子和分泌因子的多色流式检测方案,能够准确、全面地分析恒河猴PBMCs中免疫细胞亚群、免疫功能以及免疫检查点分子的表达,为利用恒河猴模型进行传染病疫苗及药物研发提供新的实验方法和基础数据。
- 李静王书晖王硕李丹刘颖
- 关键词：中国恒河猴淋巴细胞亚群T细胞功能
