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脂肪储存小滴蛋白5基因真核表达载体的构建及亚细胞定位被引量：2: 2010年; 目的:构建pCMV5-HA与脂肪储存小滴蛋白5(LS-DP5)的融合基因真核表达载体,观察其在非洲绿猴肾成纤维细胞COS7中的表达,通过免疫荧光技术确定LSDP5的亚细胞定位。方法:采用NdeI和BamHI酶切pCMV5-HA质粒,用BglII和NdeI酶切pMD18-LSDP5质粒,克隆到pCMV5-HA载体,测序鉴定后,通过脂质体法转染COS7细胞,通过免疫荧光技术观察其在COS7细胞中的表达,并利用荧光染料Bodipy493/503定位脂滴,探讨LSDP5与脂滴之间的关系。结果:酶切及DNA测序证实重组质粒pCMV5-HA-LSDP5构建成功。荧光显微镜观察显示,pCMV5-HA-LSDP5融合蛋白定位于细胞质内,并定位于脂滴表面。结论:成功构建了重组质粒pCMV5-HA-LSDP5;融合蛋白分布于细胞质并与脂滴存在共定位关系。; 刘芳张利军叶菁张丽英李烦繁李航谷雨李青; 关键词：融合蛋白 COS7细胞亚细胞定位

EZH2在原发性肝癌中的表达及与分化和增殖的关系被引量：3: 2013年; 目的:探讨EZH2的表达水平与原发性肝癌(HCC)的恶性程度和增殖能力的关系及其意义。方法:采用HE染色判断HCC的分化级别;免疫组化SP法检测EZH2与Ki67蛋白在不同分化级别HCC组织中的表达水平。结果:EZH2在HCC组织中的表达率显著高于正常肝组织(P<0.05);EZH2的表达水平随着HCC分化程度的降低而明显升高(P<0.05);EZH2与Ki67蛋白在不同分化级别的HCC中表达趋势一致。结论:HCC中EZH2蛋白的表达水平显著升高,与肿瘤的分化程度和增殖相关,提示EZH2可为判断HCC病理分级和增殖能力提供参考。; 曹相玫王映梅谷雨蒋丽娜李青; 关键词：HCC EZH2 KI67 分化增殖

脂肪基质干细胞的分离培养及其作为软骨种子细胞的研究被引量：18: 2007年; 目的研究人体脂肪基质干细胞(ADSC)分离培养的方法,探讨其在体外向成软骨细胞诱导分化的能力。方法取临床吸脂所得脂肪组织,胶原酶消化分离后,接种于培养基中进行原代培养,传至一代时换软骨诱导培养液进行成软骨诱导分化,定期通过阿尔辛蓝染色、天狼猩红染色及免疫组化等方法进行证实。结果ADSC在体外成软骨诱导后,可向软骨细胞分化,经诱导的细胞可分泌软骨细胞特异性的Ⅱ型胶原以及硫酸蛋白多糖。结论在适当诱导条件下,ADSCs有向软骨细胞分化的潜能,为软骨组织工程种子细胞来源的研究提供了新方法。; 马钰李青赵大庆王淑芳李望舟闵婕谷雨; 关键词：脂肪基质干细胞软骨

EZH2在原发性肝癌发展中的作用及临床病理意义被引量：2: 2012年; 目的探讨EZH2在原发性肝细胞癌(HCC)以及癌旁组织中表达的差异及其临床病理意义。方法收集2011年6月至2012年6月第四军医大学附属医院HCC患者手术切除标本46例,免疫组化采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法(SP法)检测HCC组织及癌旁组织中EZH2蛋白表达情况;分析其与临床病理因素的关系。结果 HCC组织中EZH2蛋白表达水平明显高于相应癌旁组织(P<0.05),其在HCC中表达率较高[45.7%(21/46)];在癌旁组织中表达率低[4.3%(2/46)]。EZH2蛋白表达水平与有无癌栓、肝硬化及肝脂肪变性等临床病理因素无明显相关性。结论 EZH2在HCC中呈高表达,提示EZH2的异常表达与HCC的发生和发展有关。; 曹相玫郭东更谷雨蒋丽娜李青; 关键词：免疫组织化学癌旁组织 EZH2

EGFP-CIDE-3及D sRed1-CIDE-3融合基因真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达和定位被引量：2: 2008年; 目的:分别构建EGFP、DsRed1与CIDE-3的融合基因真核表达载体,观察其在人胚肾上皮细胞293T中的表达,确定CIDE-3的亚细胞定位。方法:分别以质粒pEGFP-C3、pDsRed1-N1及本实验室克隆得到的质粒pET28a(+)-CIDE-3为模板,PCR扩增EGFP、DsRed1 DNA片段及人CIDE-3基因的CDS序列,再分别将EGFP、CIDE-3及DsRed1、CIDE-3克隆入真核表达载体pShuttle-CMV中。酶切、测序鉴定后,经磷酸钙转染入293T细胞,通过荧光显微镜观察其在293T细胞中的表达,并利用荧光染料Bodipy 493/503定位脂滴,探讨CIDE-3与脂滴之间的关系。结果:酶切及DNA测序证实,重组质粒pShuttle-CMV-EGFP-CIDE-3和pShuttle-CMV-DsRed1-CIDE-3构建成功。荧光显微镜观察显示,pShuttle-CMV-EGFP-CIDE-3融合蛋白定位于细胞质,pShuttle-CMV-DsRed1-CIDE-3融合蛋白也定位于细胞质,并与脂滴存在共定位关系。结论:成功构建了重组质粒pShuttle-CMV-EGFP-CIDE-3和pShuttle-CMV-DsRed1-CIDE-3;两者均可在239T细胞中表达,融合蛋白分布于细胞质,并与脂滴存在共定位关系。; 谷雨李青叶菁李烦繁闵婕张丽英马钰李航刘芳; 关键词：融合蛋白 EGFP 293T细胞

脂肪储存小滴蛋白5基因的克隆与原核表达被引量：1: 2009年; 目的:克隆脂肪储存小滴蛋白5(LSDP5)基因,并在大肠杆菌中表达。方法:利用PCR技术从小鼠肝脏cDNA中扩增LSDP5基因,并将其克隆到pMD18-T载体中,进行测序。同时,通过疏水性和二级结构分析,将LSDP5的片段克隆到原核表达载体pEGX-4T-1,构建GST融合表达质粒pEGX-LSDP5,在大肠杆菌BL21中进行表达。结果:成功地克隆了LSDP5基因,DNA测序证实,与GenBank公布的序列一致。含LSDP5片段的pGEX-LSDP5基因表达质粒在大肠杆菌经IPTG诱导后,能够表达相对分子质量(Mr)40000的融合蛋白。结论:获得了LSDP5全长基因,成功构建了原核表达质粒pEGX-LSDP5,并在大肠杆菌中得到表达,为其相关研究奠定了一定的基础。; 刘芳李青叶菁张静张丽英李烦繁李航谷雨; 关键词：克隆原核表达

鞍区软骨样脊索瘤: 2014年; 目的探讨鞍区软骨样脊索瘤的临床病理学特征,复习相关文献。方法与结果男性患者,66岁。临床表现为反复性低钠血症,MRI显示鞍区类圆形、边界清楚占位性病变。经右侧鼻腔入路行内镜下鞍区肿瘤切除术,术中可见肿瘤呈实性,质地坚韧,边界清楚;组织形态学表现为典型的脊索瘤组成,肿瘤组织内呈灶性软骨样分化;肿瘤细胞表达细胞角蛋白、上皮膜抗原和S-100蛋白,Ki-67抗原标记指数约为1%,病理诊断为鞍区软骨样脊索瘤。术后随访11个月,一般状况良好,肿瘤无复发。结论软骨样脊索瘤多生长于中轴骨骼,具有特殊的组织学构象和免疫表型,患者预后较典型脊索瘤好,诊断时应注意与典型脊索瘤和软骨肉瘤相鉴别。; 李侠李青王映梅张丽英谷雨; 关键词：脊索瘤软骨细胞蝶鞍免疫组织化学

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