陈正兰 作品数:6 被引量:6 H指数:2 供职机构: 中国药科大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 江苏省自然科学基金 更多>> 相关领域: 生物学 化学工程 医药卫生 更多>>
人生长激素释放因子基因的高效表达 被引量:1 1999年 将人生长激素释放因子 ( h GRF)基因和编码 L-天门冬酰胺酶 ( L- ans B) C-末端 12 6个氨基酸残基的基因片断进行融合表达 ,融合蛋白在菌体总蛋白中的比率达到 30 %左右 ,比和 L- ans B全基因融合表达时高得多 ,表达条件优化后 ,比率可增加到 4 5%。融合蛋白以不溶性的包含体形式存在。包含体的尿素抽提液经乙醇分级沉淀后得到较纯的融合蛋白 ,60 mmol/ L的盐酸水解融合蛋白 ,通过 SDS- PAGE和电喷雾质谱分析 ,融合蛋白释放出一分子量为 52 35.59Da的物质 ,而 GRF的分子量是 52 35.4 8Da,也就是说融合蛋白酸水解释放出了 陈正兰 刘景晶 胡卓逸 丁敏关键词:生长激素 用基因工程菌生产D-对羟基苯甘氨酸 刘景晶 李志强 胡卓逸 李隽 黄红辉 刘猛六 陈正兰 罗雪 D-对羟基苯甘氨酸(D-p-HPG)是制备羟氨苄青霉素、羟氨苄头孢菌素和羟氨唑头孢菌素等β-内酰胺类抗生素的重要中间体, 同时它也用于多种多肽类激素及农药的合成。在D-对羟基苯甘氨酸的多种制备方法中,生物酶转化法具有原料...关键词:关键词:D-对羟基苯甘氨酸 D-海因酶 基因工程 生物活性肽和功能基因片段表达和加工新系统研究 刘景晶 胡卓逸 陈正兰 明欣 丁敏 戴翔翎 肖伟 凌娅 李明慧 李泰明 吴洁 曹荣月 唐松山 王春晓 肖益热 杨立 张彦凯 该课题采用基因工程技术和蛋白质工程技术,设计建立了具有重大应用前景的生物活性肽表达和加工新系统,该系统技术特征如下:构建成可酸水解释放生物活性肽的高效表达系统,事例蛋白表达量占菌体总蛋白40-50%,目标多肽占菌体总蛋白...关键词:关键词:生物活性肽 活性肽融合表达和加工新系统的研究 利用已高效表达的L-天门冬酰胺酶为融合载体,建立了一活性肽融合表达和加工新系统.首先,通过PCR法对高效表达L-ansB的pKA质粒进行改造,点突变消除L-ansB中的唯一酸水解位点,为了便于克隆消除了TRC启动子前的B... 陈正兰关键词:酸水解 文献传递 胰高血糖素基因的合成、克隆与融合表达 被引量:2 1999年 选用E.coli偏爱的密码子,用计算机辅助设计合成了四段寡核苷酸序列,通过二步PCR法构建胰高血糖素基因,总长124bp,并直接克隆在pUC18质粒中。序列分析证实合成与克隆的胰高血糖素基因序列与设计完全相符。将该基因引入质粒pKA,使胰高血糖素连在AnsB的C端,实现融合表达。用ELISA和SPR分别检测表达产物。 丁敏 刘景晶 王朝晖 陈正兰关键词:胰高血糖素 基因合成 克隆 一种新的融合表达载体的构建 被引量:3 2000年 利用 L-ans B基因片段构建了融合表达载体 p EC,其中 L-ans B基因中编码唯一酸水解位点的序列已通过定点突变消除 ,并在它的 3′端引入了新的酸水解位点编码序列和方便外源基因插入的克隆位点 Bam H 和 Hind ,外源基因可从克隆位点 Bam H 和 Hind 处插入 p EC中 ,表达的融合蛋白用酸水解法加工后仅被切割成一大一小两个片段 ,不会导致产物混杂。 h GRF对它进行验证的结果显示 h GRF基因不仅能按正确的读码框插入 ,而且表达的融合蛋白与预期大小一致 ,说明 p 陈正兰 刘景晶 胡卓逸 丁敏关键词:融合表达载体