目的:研究斑蝥酸钠(Sodium Cantharidinate,SCA)联合氟尿嘧啶(Fluorouracil,5-FU)或顺铂(Cisplatin,DDP)对肝癌细胞(SMMC-7721)协同增效和减少对正常肝细胞(LO-2)杀伤的作用及其相关机理。方法:采用MTT法筛选具有减毒增效作用的最佳药物配比;流式细胞术分析该浓度配比的药物对细胞凋亡率的影响;Hoechst-33258荧光染色法观察凋亡细胞核形态的变化;Western blot分析该浓度配比的药物对SMMC-7721和LO-2细胞中凋亡和生长抑制相关蛋白的表达调控。结果:MTT检测结果显示,SCA、5-FU、DDP分别单独使用时对SMMC-7721的细胞增殖抑制均呈时间和剂量依赖关系。SCA在12、24 h分别对LO-2与SMMC-7721抑制具有显著性作用(P<0.01),其对LO-2抑制作用较小。并且,SCA和DDP以2.5、2μg/m L的浓度配比处理细胞48 h时,相对于其他处理组,其对SMMC-7721抑制率较高,对LO-2抑制率相对较低,故确定该浓度配比为最佳浓度配比;流式细胞术检测结果显示,2.5μg/m L SCA与2μg/m L DDP联合作用相对于SCA(2.5μg/m L)或DDP(2μg/m L)单独作用,其对SMMC-7721凋亡诱导作用有显著性差异(P<0.01)。倒置显微镜观察及Hoechst-33258荧光染色观察均发现,在该药物配比浓度下作用48 h后细胞形态出现显著的凋亡特征;Western-blot结果显示,该药物配比能显著上调SMMC-7721细胞中BAX、P53和P21蛋白的表达,并下调BCL-2、Casepase-3、p-Erk、p-Ras和p-c-Raf蛋白的表达。同时,其对LO-2相关蛋白的表达影响较小。结论:以上结果显示在2.5μg/m L SCA+2μg/m L DDP的配比浓度下,药物显示出对肝癌细胞较好的抑制作用及对正常肝细胞相对较低的杀伤作用。其抗癌机制主要和抑制Erk信号通路及通过线粒体途径诱导凋亡有关。
