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韩晞: 作品数：18 被引量：95H指数：4; 供职机构：复旦大学附属华山医院神经外科更多>>; 发文基金：上海市科学技术委员会资助项目上海市科学技术发展基金上海市自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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胶质细胞生长因子真核表达载体的构建及其在脊髓内的表达: 2005年; 目的:构建胶质细胞生长因子2真核表达载体pEGFP-N1-GGF2,观察其在大鼠脊髓内的表达。方法:实验于2004-01／10在解放军第二军医大学长征医院神经外科实验室完成。出生1周SD大鼠2只和体质量250-300 g雄性成年SD大鼠12只。将成年大鼠分为对照组和实验组,每组6只。①采用反转录聚合酶链反应方法从大鼠胎脑组织总RNA中扩增出胶质细胞生长因子2 的全序列cDNA。②以融合蛋白方式克隆到增强型绿色荧光蛋白报告基因的真核表达载体pEGFP-N1中,构建重组质粒pEGFP-N1-GGF2。③采用基因注射法将阳离子脂质体Transfectam和pEGFP-M1-GGF2混合后转染至实验组大鼠胸段脊髓组织中;对照组大鼠只注射脂质体和空白质粒pEGFP-N1的混合物。基因注射后1周,两组各取3只大鼠麻醉后取材行反转录聚合酶链反应,另取3只大鼠麻醉后取出T8,T9脊髓,冰冻切片后行荧光照相,观察绿色荧光蛋白表达情况。结果:12只大鼠均进入结果分析。①大鼠胶质细胞生长因子2 cDNA的克隆结果:成功克隆胶质细胞生长因子2 cDNA。②重组质粒pEGFP- N1-GGF2的构建结果:酶切鉴定及测序分析证实成功构建胶质细胞生长因子真核表达载体pEGFP-N1-GGF2。③反转录聚合酶链反应证明胶质细胞生长因子mRNA表达:实验组基因转染1周后局部脊髓内胶质细胞生长因子2 mRNA的表达显著增加。④pECFP-N1-GGF2基因体内转染结果:实验组注射局部脊髓内灰质和白质神经细胞内均有较多绿色荧光蛋白表达;而对照组未见荧光蛋白表达。结论:阳离子脂质体介导胶质细胞生长因子2基因体内转染的方法是可行的,增强型绿色荧光蛋白可作为报告基因观察胶质细胞生长因子2 基因在体内的表达。; 魏梅洋董艳李家顺贾连顺薛亚军韩晞; 关键词：逆转录聚合酶链反应重组融合蛋白质类转染

脂质体介导胶质细胞生长因子2基因治疗颅脑损伤的实验研究被引量：1: 2006年; 目的探讨胶质细胞生长因子2(GGF2)对大鼠液压打击颅脑损伤的神经保护作用。方法采用侧方液压打击装置制备大鼠颅脑损伤模型。将 pEGFP-N1-GGF2表达质粒或 pEGFP-N1载体质粒与阳离子脂质体混合后,脑内直接注射转染大鼠脑组织。将34大鼠随机分为4组,分别为治疗组(pEGFP-N1-GGF2+脂质体,n=10)、载体对照组(pEGFP-N1载体+脂质体,n=10)、脂质体对照组(脂质体,n=10)和假手术组(n=4)。伤后连续观察爬坡、平衡和行走试验,于伤后第10天处死大鼠取脑组织,进行 HE、尼氏及 MBP、NSE、GFAP 免疫组化染色。结果伤后第5d,治疗组大鼠行为学指标的恢复优于载体对照组和脂质体对照组[爬坡试验(角度):66.25±3.54 vs 58.31±3.72、57.21±3.93,P<0.05;平衡试验(评分):2.59±0.21 vs 3.41±0.25、3.24±0.22,P<0.05;行走试验(s):20.15±2.59 vs 27.00±3.47、27.80±3.00,P<0.05],以行走实验改善最为明显。伤后第10天,治疗组大鼠的皮层、海马神经元计数多于载体对照组和脂质体对照组(皮层外颗粒和外锥体层:98±10 vs 75±7、67±8,P<0.05;皮层内锥体层:37±4 vs 19±3、23±4,P<0.05;海马 CA1区:102±11 vs67±8、58±9,P<0.01),皮层、皮层下白质 MBP 染色信号强于对照组。结论阳离子脂质体介导GGF2基因治疗能有效地促进大鼠颅脑损伤后的恢复。; 薛亚军董艳韩晞魏梅洋葛军辉蔡如珏胡国汉骆纯朱诚卢亦成; 关键词：脑损伤基因治疗

脂质体介导增强型绿色荧光蛋白和胶质细胞生长因子双基因载体在脊髓内共转染表达被引量：3: 2005年; 目的:构建携带增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescentprotein,EGFP)和胶质细胞生长因子2(glialgrowthfactor2,GGF2)的双基因真核表达载体pIRES2EGFPGGF2,研究GGF2在大鼠脊髓内的表达。方法:采用RTPCR方法从大鼠胎脑组织总RNA中扩增出GGF2全序列cDNA,利用脑炎心肌炎病毒的内部核糖进入位点(internalribosomeentrysite,IRES),构建GGF2与EGFP双基因真核表达载体pIRES2EGFPGGF2。采用基因注射法将阳离子脂质体Transfectam和pIRES2EGFPGGF2基因混合后转染至大鼠胸段脊髓组织中,观察GGF2在大鼠脊髓中的表达。结果:成功构建pIRES2EGFPGGF2质粒,在转染的局部脊髓内观察到GGF2mRNA表达显著增加。荧光显微镜下观察发现,注射局部灰质和白质神经元内均有较多绿色荧光蛋白表达。结论:阳离子脂质体能介导EGFP和GGF2双基因载体在脊髓内同时表达,EGFP可作为报告基因观察GGF2在脊髓内的表达。; 魏梅洋董艳李家顺薛亚军韩晞王长峰贾连顺; 关键词：增强型绿色荧光蛋白脂质体转染脊髓

短蛋白聚糖cDNA的克隆及其在人脑胶质瘤中的表达: 本研究采用RT-PCR方法,从人脑星形细胞瘤中克隆了人分泌型brevican的全长基因,并采用原位杂交方法检测brevican在脑胶质瘤和非胶质来源脑肿瘤中的组织学分布。; 韩晞董艳卢亦成; 关键词：胶质瘤基因克隆组织学; 文献传递

短蛋白聚糖研究进展被引量：1: 2002年; 短蛋白聚糖 (brevican)是一种中枢神经系统特有的硫酸软骨素蛋白聚糖 ,是脑内最丰富的细胞外基质分子之一。Brevican的表达仅限于中枢神经系统 ,在神经发育和脑损伤后胶质增生过程中均有明显增高。近来的研究表明 ,brevican在脑胶质瘤中有高度特异的表达并与其侵袭性相关。; 韩晞董艳卢亦成; 关键词：神经发育神经损伤胶质瘤

后颅窝骨瓣开颅、深部肌群分层缝合技术在枕下乙状窦后入路手术中的应用被引量：2: 2009年; 目的探讨枕下乙状窦后入路骨瓣开颅和复位，后颅窝深部肌群分层切开、缝合术的手术方法及临床应用。方法上海市第十人民医院神经外科自2003年5月至2005年5月应用枕下乙状窦后人路骨瓣开颅、深部肌群分层切开缝合术治疗40例桥脑小脑角区肿瘤患者，对其临床资料进行回顾性分析。结果骨瓣开颅均顺利完成，手术视野良好，平均用时40-70min；2例患者术后出现皮下积液。无脑脊液漏发生，多数患者数后第6天头部即可自由活动。结论经枕下乙状窦后入路骨瓣开颅、深部肌群分层缝合技术安全、快捷，可降低术后脑脊液漏、假性脑膨出的发生，并可使头部早期恢复自由活动。; 陈先震楼美清卢亦成丁学华候立军韩晞胡国汉骆纯白如林赵耀东; 关键词：后颅窝桥脑小脑角骨瓣开颅

对冲性双额脑挫裂伤治疗策略和预后被引量：11: 2011年; 双额脑挫裂伤多见于车祸、摔倒等致伤因素过程中对冲伤所致，通常在最初的短暂意识丧失后，有明显的中间清醒期，因在入院时可表现为意识清醒，头颅CT早期表现有不同程度的双侧前额底的挫裂伤，环池尚清晰可见，但病情可随着脑挫裂伤和脑内血肿的扩大、脑水肿的进展，病情可以迅速恶化，可在数0．5h甚至数分钟之内由意识清醒转为脑疝、双瞳散大来不及救治而死亡。; 吴雪海高亮金毅韩晞吴惺胡锦毛颖周良辅; 关键词：预后短暂意识丧失致伤因素头颅CT

垂体腺苷酸环化酶激活肽减轻大鼠缺血性脑水肿作用的实验研究被引量：11: 2002年; 目的 :研究垂体腺苷酸环化酶激活肽 (PACAP)在缺血性脑水肿中的作用及其可能的受体机制。方法 :采用大鼠四动脉结扎脑缺血模型 ,分别运用干湿重法和酶学法测定脑组织含水量及Na+ 、K+ 含量。结果 :大鼠四动脉结扎脑缺血 30min ,再灌流 1h ,脑组织含水量明显增加 ,Na+ 含量增高 ,而K+ 含量降低。缺血前经测脑室分别给予 1× 10 -9mol、1× 1110 mol及 1× 11-11mol的PACAP均能抑制脑组织含水量、Na+ 含量的增加和K+ 含量的降低。特异性PACAPⅠ型受体拮抗剂PACAP6 38能完全阻断PACAP的上述作用 ,而单纯给予PACAP6 38对脑缺血后脑组织含水量、Na+ 、K+ 含量无显著影响。结论 :外源性PACAP对缺血性脑水肿具有保护作用 ,该作用是由I型受体介导的。; 董艳何成韩晞王成海路长林; 关键词：垂体腺苷酸环化酶激活肽脑缺血脑水肿

分泌型短蛋白聚糖髓芯蛋白的mRNA在大鼠垂体中的表达: 2003年; 目的 :研究分泌型短蛋白聚糖 (brevican)髓芯蛋白的mRNA在大鼠垂体组织中的表达。方法 :采用RT PCR和原位杂交方法。结果 :RT PCR反应得到一段约 4 0 0bp的DNA片段 ;原位杂交结果显示 ,腺垂体和神经垂体均可见分泌型brevican髓芯蛋白mRNA阳性细胞 ,胞质中可见杂交信号。腺垂体中分泌型brevican髓芯蛋白mRNA阳性细胞大小不一。结论 :神经垂体和腺垂体均有分泌型brevican髓芯蛋白mRNA表达 ,brevican可能不是中枢神经系统特有的细胞外基质成分。; 韩晞董艳薛亚军蔡如珏卢亦成; 关键词：MRNA 垂体原位杂交方法 RT-PCR

pEGFP-N1-GGF2质粒的构建及其在大鼠脑内的表达: 2007年; 目的构建pEGFP-N1-GGF2质粒,观察其在大鼠脑组织中的表达。方法采用RT-PCR方法从人胚胎脑组织总RNA中扩增出人GGF2全长序列,并克隆到增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因真核表达载体pEGFP-N1上,构建pEGFP-N1-GGF2质粒,通过脂质体将pEGFP-N1-GGF2质粒转染大鼠脑组织,荧光显微镜下观察GGF2融合蛋白在大鼠脑内表达的时间和空间分布特征。结果成功构建了pEGFP-N1-GGF2表达载体,荧光显微镜观察可见,pEGFP-N1-GGF2表达载体转染6 h大鼠脑内即可见GGF2融合蛋白表达,3 d时融合蛋白表达最多,7 d时表达量稍有下降但仍高,14 d时表达量已明显下降。GGF2融合蛋白在脑内的表达以针道为中心向周围扩散,荧光信号可达皮层深部。结论脂质体介导的pEGFP-N1-GGF2质粒能够在大鼠脑内表达GGF2融合蛋白。; 韩晞卢亦成薛亚军魏梅洋胡国汉葛军辉蔡如珏陈先震骆纯董艳; 关键词：基因疗法脂质体绿色荧光蛋白

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