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项海涛: 作品数：35 被引量：71H指数：4; 供职机构：甘肃农业大学动物医学院更多>>; 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项甘肃省自然科学基金甘肃省高等学校基本科研业务费项目更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>

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牦牛源干燥棒状杆菌的分离与鉴定被引量：6: 2019年; 一只牦牛屠宰后肝有干酪样结节,为了探究其形成原因,本研究对该牦牛肝进行细菌的分离培养,对所分离可疑致病菌的16SrRNA以及rpoB基因序列进行扩增和序列分析,并用Vitek 2全自动微生物鉴定仪进行生化表型的鉴定,用K-B法进行药敏试验。结果显示,经细菌分离培养得到一株革兰阳性、棒状、可疑致病菌;其16S rRNA扩增片段大小1 483bp,GenBank序列编号为MH000696,该菌的16SrRNA与干燥棒状杆菌GD34株(KF928790.1)等的相似性最高,序列一致性为99%,系统进化树显示,本菌与干燥棒状杆菌在同一进化分支上;rpoB基因扩增片段大小434bp,GenBank序列编号为MH006608;Vitek 2全自动微生物鉴定仪鉴定为变异库克菌,可信度为93%。该菌对妥布霉素、氨曲南、头孢哌酮、米诺环素等多种药物高度敏感。综上所述,分离的细菌为干燥棒状杆菌,但基因序列,如rpoB等以及生化表型均存在一定程度的变异,本研究为兽医临床上该菌的分离和鉴定提供了依据,且为该菌的致病性研究奠定了基础。; 温峰琴项海涛郝宝成邢小勇包世俊胡永浩; 关键词：RPOB 生化试验药敏试验

猪戊型肝炎病毒swCH189株衣壳蛋白基因CP239片段的表达、纯化及抗原性分析被引量：1: 2012年; 根据已克隆的戊型肝炎病毒株swCH189株结构蛋白基因(ORF2)的抗原性及水溶性分析,在其序列上设计套式引物,采用RT-PCR技术扩增猪戊型肝炎病毒(HEV)结构蛋白基因ORF2主要抗原基因片段,长度为728bp,将其克隆于PMD18-T载体,测序结果表明插入的片段属于猪戊型肝炎病毒结构蛋白基因ORF2部分;将该片段插入pet32a表达载体,经酶切、测序鉴定证实获得了带有目的基因的重组表达质粒。将重组质粒转化Rosetta菌,经0.3mmol/L IPTG诱导得到融合表达,得到相对分子质量为45 000的重组蛋白,以包涵体形式存在。Western blot分析表明,该蛋白可以与猪戊型肝炎阳性血清反应,表明该蛋白具有良好的反应原性。并用SDS电泳切胶纯化和透析浓缩方法进行纯化,用纯化的蛋白免疫兔子,经每2周免疫1次,连续3次免疫后,对免疫组和对照组,分别在45,60,90d采血,每只兔子采集1份。用夹心ELISA法测定免疫血清抗体,结果表明免疫组在45d后均产生具有HEV抗原结合活性的抗体。本试验对猪swCH189株CP239基因的克隆和表达研究,为进一步研究结构蛋白基因ORF2的生物学功能奠定了基础。; 郝宝成梁剑平兰喜刑小勇项海涛温峰琴胡永浩柳纪省; 关键词：猪戊型肝炎病毒克隆原核表达纯化抗原性分析

一种曲子宫绦虫寄生虫超轻黏土模型: 本实用新型公开了一种曲子宫绦虫寄生虫超轻黏土模型，包括曲子宫绦虫寄生虫头节超轻黏土模型、曲子宫绦虫寄生虫成熟节片超轻黏土模型和曲子宫绦虫寄生虫孕卵节片超轻黏土模型，所述超轻黏土模型采用一种可塑性超轻黏土制成；所述曲子宫绦...; 秦磊崔玉珍赵宝娟周旋项海涛; 文献传递

牛支原体二氢硫辛酸脱氢酶基因的克隆表达及表达产物酶比活性的测定: 2015年; 参照GenBank中牛支原体PG45株二氢硫辛酸脱氢酶基因(pdhD)的序列设计特异性引物,应用PCR扩增牛支原体武威株的pdhD基因,然后将其克隆至pMD19-T。在完成测序及点突变的基础上构建重组表达质粒pET-28a(+)-pdhD,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后纯化表达产物His-DLD,并对其酶促反应活性进行测定。结果显示,表达产物在底物NADH存在条件下,能将硫辛酰胺催化生成二氢硫辛酰胺,且其最适酶促反应温度为25℃、pH为7.5;其米氏常数Km(NADH)为9.72μmol/L,最大反应速率为25.6μmol/(L·min)。上述结果为研究二氢硫辛酸脱氢酶的生物学功能奠定了基础。; 李娜包世俊苏炜德邢小勇伏小平温峰琴项海涛薛慧文; 关键词：牛支原体原核表达

犬细小病毒临床分离株VP2基因进化分析被引量：1: 2019年; 为了对犬细小病毒临床分离株的VP2基因进行遗传变异分析,了解本地区犬细小病毒流行的优势型别及病毒变异情况。采集2例患犬细小病毒病的动物粪便,提取病毒基因组,设计特异性引物,PCR扩增VP2基因,对扩增产物测序,对序列结果与同属其他毒株VP2基因序列用MEGA 7和MegAlign进行同源性分析和遗传进化分析。同时比较其氨基酸变异情况。结果显示,PCR扩增出VP2基因,测序结果显示大小为1755 bp,2株病毒VP2基因NCBI序列登录号分别为MH155192和MH155193,MH155192与MF467233.1和JQ743891.1的核苷酸同源性为99.9%,MH155193与KY937651.1、KP260509.1、KY937641.1核苷酸同源性为99.8%。MH155192主要位点氨基酸分别为为267Y,324I,370Q,426D,440A。MH155193主要位点氨基酸分别为267Y,324I,370R,426E,440T。且2株病毒297位均为A。表明分离到的2株病毒分别为新CPV-2b和CPV-2c型。; 温峰琴项海涛郝宝成邢小勇包世俊胡永浩; 关键词：犬细小病毒 VP2基因

牛支原体脂蛋白P48单克隆抗体的制备及鉴定被引量：1: 2016年; 为制备牛支原体表面脂蛋白P48的单克隆抗体,应用纯化的牛支原体武威株脂蛋白P48基因的原核表达产物免疫BALB/c小鼠,继而取免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,经克隆和筛选,获得2株能分泌抗牛支原体脂蛋白P48抗体的杂交瘤细胞融合株,并分别命名为C7及E5。ELISA和W estern-blot检测结果表明,2株单克隆抗体均可与牛支原体特异性地结合,而与牛的其他常见病原菌无任何反应。亚类鉴定结果表明,2株单克隆抗体重链均为Ig G 1,轻链均为λ型。稳定性试验结果表明,2株杂交瘤细胞均可稳定分泌单克隆抗体。本研究结果为建立牛支原体有效的检测方法和深入研究脂蛋白P48的生物学功能奠定了基础。; 包世俊胡国明邢小勇郝宝成薛惠文伏小平温峰琴胡永浩项海涛; 关键词：牛支原体单克隆抗体杂交瘤

兽医寄生虫学教学中引入PBL教学法的探讨被引量：4: 2014年; 兽医寄生虫学是动物医学类专业学生的专业必修课程,与兽医临床关系密切,更与人们的生活息息相关。以讲授为主的传统教学模式虽然能够完成教学任务,但已不能适应学科的发展要求。PBL教学法是目前国际上比较流行的一种教学方法。针对兽医寄生虫学教学中存在的问题,在认真总结当前教学模式的基础上,引入了以问题为导向的PBL教学法,得到了大部分学生的普遍认可,收到了良好的教学效果。; 项海涛温峰琴邢小勇李新军赵晋军; 关键词：兽医寄生虫学教学模式 PBL教学法

一种简便的虫卵检查粪便过滤装置: 本实用新型公开一种简便的虫卵检查粪便过滤装置，包括钵状容器、滤勺和杵状匙，钵状容器侧壁刻有刻度，钵状容器内放置滤勺，滤勺开口处均匀设置有三个耳状夹，滤勺直径与钵状容器的直径相一致，滤勺内放置有杵状匙，钵状容器、滤勺和杵状...; 项海涛; 文献传递

一种一次性虫卵计数板: 本实用新型涉实验用器具，具体涉及一种一次性虫卵计数板，包括盒体，所述盒体为长方体透明盒体，所述盒体内，设置有计数室，所述计数室上表面设置有方格，所述方格通过分割线划分为若干等份。本实用新型所公开的一种一次性虫卵计数板，设...; 项海涛; 文献传递

多房棘球绦虫apomucin基因qPCR引物的筛选及潜在应用被引量：2: 2016年; 目的筛选多房棘球绦虫（Echinococcus multilocularis）apomucin基因（Em-apo）的qPCR最佳引物，探索该基因的表达水平。方法根据GeneDB中4种Em-apo序列，设计引物并通过荧光定量PCR（qPCR）对引物进行分析，确定每对引物的特异性、PCR扩增效率。利用筛选得到的最佳引物，分别检测经阿苯达唑（5 μg/ml）和胰岛素（100 ng/ml）培养处理的多房棘球绦虫原头节（1 000个）Em-apo表达水平的变化，用稀释阿苯达唑的DMSO和胰岛素的PBS作为各自的对照。结果筛选分别得到了Em-apo-1、Em-apo-2/3、Em-apo-4和内参基因actin的特异引物各1对，qPCR熔解曲线分析结果显示，每对引物的扩增产物只出现单峰，且扩增效率均为95%～101%。qPCR分析结果显示，与DMSO对照组（1.00）相比，多房棘球绦虫原头节经阿苯达唑处理后，Em-apo-1、Em-apo-2/3和Em-apo-4的表达水平均有所上升，分别为1.51±0.27、1.39±0.30和1.14±0.18，三者差异无统计学意义（P〉0.05）；与PBS对照组（1.00）相比，原头节经胰岛素处理后，Em-apo表达水平的变化不一，其中Em-apo-1的表达水平基本不变，Em-apo-4的表达水平有所下降，而Em-apo-2/3明显下调（0.73±0.09），但三者差异无统计学意义（P〉0.05）。结论本实验筛选确定的Em-apo基因的qPCR引物特异，可用于Em-apo基因表达水平的检测。多房棘球绦虫原头节经阿苯达唑和胰岛素处理后，对Em-apo-1、Em-apo-2/3和Em-apo-4的表达水平有一定的影响。; 苏梦郭小腊杨静邵忠伟丁军涛项海涛骆学农郑亚东孙晓林; 关键词：多房棘球绦虫阿苯达唑胰岛素

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