乔俊文
- 作品数：18 被引量：38H指数：3
- 供职机构：中国农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家自然科学基金实验用小型猪地方标准研究更多>>
- 相关领域：农业科学生物学建筑科学轻工技术与工程更多>>
- 鸡传染性囊病病毒青岛分离株VP2基因的克隆及序列分析被引量：1
- 2009年
- 为了克隆传染性囊病病毒青岛分离株(IBDV-QD)的VP2基因及对其高变区序列进行分析,首先根据GenBank上已经发表的传染性囊病病毒(IBDV)UK661株的核苷酸序列,设计并合成了一对特异性的扩增IBDV-QDVP2基因的引物。以IBDV-QD株基因组为模版,利用RT-PCR技术扩增出长约1.5kb的基因片段,将其连接到pGEM-T-Easy载体上。经酶切分析、PCR鉴定及核苷酸序列测定,成功获得该分离株VP2基因的重组质粒。将IBDV-QD株VP2基因的高变区核苷酸序列及推导出的氨基酸序列与GenBank中公布的14株IBDV相应序列应用软件进行同源性比较,并构建系统进化树。同源性比较和进化树分析表明,IBDV-QD与IBDV超强毒株(vvIBDV)关系最近,与标准强毒株、弱毒株、变异株相差较远;并且我国不同地区的vvIBDV存在差异,这为我国传染性囊病的流行病学调查奠定了基础。
- 苏晓鸥乔俊文李玉荣赵德明杨利峰尹晓敏周向梅杨建民
- 关键词：VP2基因
- 3种肝损伤模型的组织病理学特征观察被引量：1
- 2007年
- 乔俊文赵德明刘红艳王辉暖
- 关键词：病理学特征SD大鼠SPF级
- 绵羊朊病毒受体37kD/67kD LRP/LR实时荧光定量PCR标准质粒和标准曲线的构建被引量：2
- 2009年
- 为实时相对荧光定量PCR检测绵羊组织中朊病毒受体LRP/LRmRNA表达水平,构建目的基因LRP/LR、内参基因β-actin的标准质粒和标准曲线;根据GeneBank中绵羊37 kD/67 kDLRP/LR（LRP/LR）和β-actin基因编码区保守序列,设计特异引物;提取肠道组织mRNA,经反转录RT-PCR扩增,产物回收纯化后,与pGEM-T-easy载体连接,转化大肠杆菌感受态细胞DH5α;质粒提取后经酶切、PCR和测序鉴定后,获得阳性LRP/LR,β-actin重组质粒;将阳性重组质粒107～102梯度稀释作为模板,然后进行实时荧光定量PCR;系统软件自动生成标准曲线及回归方程。结果显示产物溶解曲线峰值单一,说明无引物二聚体及引物特异性高;LRP/LR和-βactin标准曲线相关系数分别为r2=0.999,r2=0.997,说明线性关系好;重复性试验结果显示所构建的重组质粒10次同条件扩增均Ct值具有较好的重现性,且变异率均小于5%,说明标准曲线重复性好,稳定性高。说明成功构建目的基因LRP/LR,内参基因β-actin标准质粒和标准曲线,为实时荧光定量PCR检测绵羊组织中朊病毒受体mRNA表达水平提供了基础。
- 乔俊文苏晓鸥赵德明李玉荣王伊琴
- 关键词：REAL-TIMEPCR绵羊重组质粒
- 热力学因素对绵羊重组朊蛋白体外构象转化的作用
- 2009年
- 构建了绵羊朊蛋白的原核表达载体,获得了高纯度的融合表达蛋白。并在热力学因素的作用下,研究了重组绵羊朊蛋白的构象转化。以基因型为ARQ/ARQ蒙古绵羊的血液DNA为模板,利用DNA重组技术,将绵羊朊蛋白正常成熟蛋白基因OvPrP插入表达载体pET30a,在大肠杆菌BL2l(DE3)中高效表达,获得的表达产物以包涵体形式存在,并对其进行纯化和复性。超滤浓缩后浓度约为0.5 mg/mL的OvPrP97-234,进行热力学处理,利用远紫外线圆二色谱(CD)分析热力学处理前、后蛋白的二级结构的变化,同时,对热力学处理前、后的蛋白进行了蛋白酶K抗性的检测,并对其高级结构进行了预测。结果表明:获得的表达产物经SDS-PAGE分析可见分子量为16kD的蛋白条带,Western-blotting的鉴定证实了所获得的蛋白是特异性的朊蛋白。经Jascow32软件分析,测得天然构象的OvPrP97-234的二级结构含量为:α螺旋为28.8%、β折叠为0%、转角和无规卷曲为71.1%,无蛋白酶K的抗性。经过热力学处理之后,OvPrP97-234的二级结构含量为:α螺旋为19.3%,β折叠为36.9%,转角和无规卷曲为43.8%,有一定的蛋白酶K抗性。绵羊重组朊蛋白的体外构象转化的分析为朊蛋白的体外构象转化机制和致病机理的研究提供科学依据。
- 王伊琴秦贞奎包勇敢乔俊文赵德明
- 关键词：原核表达圆二色谱
- 免疫印迹法检测绵羊朊蛋白prp^c的研究被引量：1
- 2008年
- 乔俊文赵德明吴长德王志刚周向梅王秀菊
- 关键词：蛋白免疫印迹法朊蛋白病理组织学检查海绵状脑病绵羊
- RNAi抑制PrP表达载体的构建及其在PrP功能研究中的初步应用
- 2008年
- 本文旨在构建有效抑制朊蛋白(Prion protein,PrP)表达的重组质粒,并以此为工具控制PrP表达,从而探讨PrP对细胞SOD活性的影响。设计并化学合成1对含有发夹结构的寡核苷酸片段(shPrP),退火后与表达载体pG-super(Hairpin siRNA expressing vector)定向连接,构建重组质粒pG-super-shPrP。对重组子进行PCR鉴定,测序正确后,脂质体法转染C6细胞,采用实时荧光定量RT-PCR检测PrP mRNA的表达水平,以验证pG-super-shPrP的抑制效率;结果表明:重组质粒pG-super-shPrP构建成功,且显著降低C6细胞PrP mRNA表达(P<0.05),抑制效率为34.2%。利用pG-super、pG-super-shPrP分别转染C6细胞,并检测细胞SOD总活性及SOD表达水平,探讨PrP对细胞SOD活性的影响及其作用机制,结果表明PrP促进细胞SOD的活性(P<0.01),但对细胞SOD的表达量无影响,即PrP对SOD活性的促进作用与SOD1的表达量无关。本研究在成功构建了PrP的RNA干扰表达质粒的基础上,利用此质粒,在细胞水平上揭示了PrP对细胞SOD活性的促进作用。
- 李玉荣周向梅尹晓敏杨建民乔俊文赵德明
- 关键词：RNAIC6细胞朊蛋白超氧化物歧化酶
- 猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)检测方法的建立被引量：12
- 2009年
- 根据GeneBank中已经发表的PRRSV毒株的ORF6基因高度保守序列，设计并合成了一对特异性引物，建立了用于检测PRRSV的RT—PCR诊断方法。从感染PRRSV—QD的Marc-145细胞中提取病毒RNA，然后经RT—PCR扩增，获得预期266bp的目的片断，而猪伪狂犬病毒（PRV）、猪细小病毒（PPV）、猪圆环病毒（PCV）细胞培养物及Marc-145细胞进行同条件检测，结果为阴性；PRRSV扩增产物测序结果与GeneBank中已发表的PRRSV毒株序列同源性达94．4％～97．4％且应用本研究检测方法对已知基因型的10株PRRSV盲检，检出率100％。上述研究结果表明，所建立的RT—PCR诊断方法特异性好、敏感性高，可进一步应用于猪繁殖与呼吸综合征的临床诊断。
- 苏晓鸥李玉荣乔俊文赵德明
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征PRRSVORF6RT-PCR
- 绵羊重组PrPc蛋白单克隆抗体的制备和初步鉴定
- 本研究将纯化的绵羊重组蛋白PrP(23-256),免疫Balb/c小鼠,经细胞融合和2～3 次克隆,用间接ELISA方法筛选出两株能够稳定分泌抗prion蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株2D11和2G1,Western bl...
- 周向梅梁芳王志刚乔俊文赵德明
- 关键词：绵羊单克隆抗体WESTERN-BLOT
- 文献传递
- 苜蓿皂甙对绵羊瘤胃内纤维物质降解动力学的影响被引量：14
- 2007年
- 选用12只2周岁体况良好、体重30kg左右的安装有永久性瘤胃瘘管的内蒙古半细毛羯羊,随机分成4组,每组3只,饲喂4种不同水平苜蓿皂甙日粮。结果表明,苜蓿皂甙对羊草在绵羊瘤胃中降解有影响。当苜蓿皂甙添加量为8 g/d时,羊草中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)在瘤胃内的表观降解率最高。
- 胡明卢德勋牛文艺任晓萍娜仁羿静乔俊文
- 关键词：绵羊苜蓿皂甙纤维物质降解
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立被引量：1
- 2009年
- 以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组核衣壳蛋白(rN蛋白)为抗原,初步建立了检测PRRSV抗体的rN-ELISA方法。根据GenBank公布的PRRSV VR2332株编码核衣壳蛋白的ORF7基因序列设计合成了一对引物,成功扩增出ORF7基因。将其克隆到PET-30a构成原核表达载体,转化宿主菌BL21(DE3)并获得表达。通过SDS-PAGE和Western blot检测证实rN蛋白获得了高效表达,且具有良好的免疫学活性。以纯化的重组蛋白为抗原建立检测PRRSV抗体的间接ELISA法。试验证明,该方法与IDEXX公司生产的PRRSV抗体检测ELISA试剂盒对同批临床血清样本的检测结果完全相符,且对其他常见的6种猪疫病阳性血清检测均为阴性,无交叉反应。本研究建立的rN-ELISA方法敏感性高、特异性强,可用于猪繁殖与呼吸综合征常规诊断及流行病学的调查研究。
- 苏晓鸥乔俊文赵德明杨利峰周向梅尹晓敏杨建民
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白ORF7基因
