包怡华
- 作品数：21 被引量：30H指数：3
- 供职机构：首都儿科研究所更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金北京市优秀人才培养资助国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- 神经管畸形神经组织DNA的基因组甲基化水平液相色谱——串联质谱( LC-MS/MS)定量检测
- 张敏权力陈晓丽包怡华卢晓琳张霆
- 文献传递
- 人甲3型流感病毒基质蛋白及其诱导抗体在临床检测中的应用
- 2008年
- 目的探讨抗重组人甲3型流感病毒基质蛋白(M1)抗体在临床检测中应用的可行性。方法在生物信息学分析的基础上,经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从人甲3型流感病毒感染细胞中获得目的基因,构建pET-28c(+)/IFV.M1P2重组质粒并在BL21DE3中诱导表达;重组蛋白经亲和层析纯化后免疫家兔制备多克隆抗体。采用间接免疫荧光法检测重组蛋白抗体与病毒感染细胞和临床标本的反应性,并与流感病毒凝血抑制试验结果比较分析,确定重组蛋白抗体的灵敏度和特异性。结果间接免疫荧光法检测抗M1P2重组蛋白抗体与人甲3型﹑甲1型流感病毒反应的抗体滴度可达1∶1200和1∶1000,与乙型流感病毒及其他呼吸道常见病毒无特异性反应。同样方法检测262例上呼吸道感染患儿鼻咽分泌物标本,阳性18例(6.87%),凝血抑制试验阳性24例(9.16%)。与凝血抑制试验相比,间接免疫荧光法检测敏感性为62.5%,特异性为98.7%。结论重组M1P2蛋白具有较强的免疫原性,可模拟天然病毒蛋白诱导产生较强的抗人甲3型流感病毒抗体,该抗体具有较高的反应特异性和一定的灵敏度。
- 包怡华辛若雷邓洁王芳钱渊吴建新张霆
- 关键词：甲3型流感病毒抗原分析原核表达间接免疫荧光法
- 肺炎支原体重组P1蛋白抗体研究被引量：3
- 2007年
- 目的研制针对肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)主要粘附蛋白-P1蛋白的特异性抗体。方法用纯化后重组P1蛋白免疫BALB/c小鼠,获得多克隆抗体(Polyclonal Antibody,PcAb),通过传统的杂交瘤技术制备抗P1重组蛋白单克隆抗体(Monoclonal Antibody,McAb),采用ELISA和IFA法对单抗和多抗进行反应性和特异性检测。结果ELISA法检测P1重组蛋白抗原性显示,P1蛋白与Mp抗血清有较好的反应性,蛋白敏感性大于1ng/ml;在重组P1蛋白免疫小鼠获得的PcAb与Mp的反应中,检测到的抗体滴度可达到1∶1600;获得针对Mp重组P1蛋白的特异性McAbs2株,在ELISA检测中均与P1抗原有较好的反应特异性,抗体滴度可达到1∶800～1600;IFA结果显示,上述PcAb和McAbs均与Mp有较好反应性,与生殖支原体等无交叉反应。结论本研究选取的重组P1蛋白具有较好的免疫原性;其特异性PcAb和McAbs与Mp有较好的特异性,为临床Mp感染的抗原快速、早期诊断方法的建立打下了基础。
- 孙红妹冯燕玲赵汉青张建芝寿成超包怡华张霆
- 关键词：肺炎支原体抗体
- 重组人甲3型流感病毒基质蛋白及其制备方法和应用
- 本发明涉及生物工程产品的生产及应用技术领域，具体涉及一种重组人甲3型流感病毒基质蛋白以及该蛋白的生产方法及应用领域。本发明通过对人甲3型流感病毒M1蛋白抗原性的分析，选取抗原性较高的区域运用分子生物学方法进行抗原基因片段...
- 包怡华辛若雷钱渊王芳张霆
- 文献传递
- 久坐行为对学龄前儿童肌肉力量的影响
- 2023年
- 目前的研究尚未明确久坐行为(sedentary behavior,SB)与肌肉力量(muscle strength,MS)之间的关系,尤其缺乏国内学龄前儿童的相关证据。为探讨SB对3~6岁学龄前期儿童MS的作用,采用横断面研究设计,以北京市3~6岁学龄前儿童为研究对象(n=275),利用握力测试和立定跳远测试分别对上、下肢肌肉力量进行评测,根据肌肉力量标准分公式,结合测评结果计算得出MS的T分;连续佩戴7 d ActiGraph GT9X Link加速度计以评估学龄前儿童的SB的总时间、持续SB时间。结果显示,在控制性别、年龄、家庭年收入,父、母亲学历因素之后,SB的总时间和持续SB时间与肌肉力量均呈显著负相关,SB的总时间每增加10 min/d,MS的T总分下降0.739(95%CI:-1.122,-0.355),持续SB时间每增加10 min/d,MS的T总分下降0.825(95%CI:-1.644,-0.007)。此外,上肢MS和下肢MS与SB的总时间均呈显著负相关,SB的总时间增加10 min/d,上肢MS的T分降低0.427(95%CI:-0.664,-0.189),下肢MS的T分下降0.312(95%CI:-0.533,-0.091)。结果表明SB的总时间和持续SB时间与MS总T分值均呈显著负相关,对于MS而言,SB可能是一个风险因素。为促进学龄前儿童的肌肉力量的发育,应该控制学龄前期儿童的SB的总时间和持续SB时间。
- 张豪文吴剑路朝旭郭金包怡华
- 关键词：学龄前期儿童
- 基于RNA-seq的甲氨蝶呤处理sv129胚胎干细胞的转录组学分析
- 2023年
- 目的利用转录组测序(RNA sequencing,RNA-seq)技术探讨抗叶酸代谢药物甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)处理的小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESC)基因转录表达的变化,并探讨其可能影响的生物学过程和关键信号通路。方法将mESC分为两组,其中对照组采用完全培养基培养,MTX组在此基础上加入0.12μmol/L MTX药物处理。MTX处理24 h分别收集细胞,提取总RNA进行RNA-seq,获得胚胎早期全基因转录组图谱并采用Deseq2软件筛选差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),采用生物信息学R软件包对MTX组与对照组进行差异基因的功能及通路分析。结果MTX组与对照组的转录组相比,共有365个DEGs,其中144个显著上调表达,221个显著下调。GO(Gene Ontology)功能富集分析显示,生物学过程(biological process,BP)分类集中在肌肉系统发育、肌肉收缩、肌纤维发育等肌肉系统发育过程,细胞组分(cellular component,CC)分类集中在细胞膜组分、肌原纤维、收缩纤维、肌丝、肌节等肌肉组分,分子功能(molecular function,MF)分类集中在跨膜转运蛋白结合活性及膜通道活性。KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)生物功能分析显示DEGs显著性富集的通路在钙信号通路、紧密连接。结论抗叶酸代谢药物甲氨蝶呤能够引起mESC基因组的转录改变,DEGs功能主要与肌肉发育以及肌肉纤维发育相关,同时DEGs富集的关键信号通路主要有肌肉发育相关的膜通道的钙离子信号通路和紧密连接。
- 王芳包怡华李建婷谢秋张霆
- 关键词：转录组测序甲氨蝶呤差异表达基因叶酸胚胎干细胞
- 抗人3型副流感病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的制备及其活性鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的制备抗人3型副流感病毒核衣壳蛋白特异性单克隆抗体,为研发3型副流感病毒新型诊断试剂提供基础。方法利用重组克隆表达技术,获得可溶性的重组核衣壳蛋白;采用纯化的重组核衣壳蛋白免疫小鼠,采用杂交瘤技术制备抗人3型副流感病毒核衣壳单克隆抗体;采用ELISA及间接免疫荧光法筛选并鉴定可识别天然3型副流感病毒核衣壳蛋白单克隆抗体。结果获得9株分泌抗重组核衣壳蛋白的特异性单克隆抗体的细胞株,其中2株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体能识别天然的3型副流感病毒核衣壳蛋白。结论利用重组核衣壳蛋白作为免疫原制备出了识别天然核衣壳蛋白的单克隆抗体,并且具有较高的反应性。
- 杨圣海包怡华辛若雷徐婧瑶王芳张霆
- 关键词：重组克隆核衣壳蛋白杂交瘤单克隆抗体
- 肺炎支原体P1重组蛋白多克隆抗体与单克隆抗体的制备与比较被引量：1
- 2007年
- 肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae，Mp）是引起人类原发性非典型肺炎及其他呼吸道感染性疾病的常见病原微生物，不做病原学检查，很难将Mp与其他病原体引起的呼吸道感染相区别。本研究利用具有抗原特异性的重组P1抗原，研制特异、敏感的抗体，为建立临床标本的怖抗原诊断方法奠定了基础。
- 孙红妹冯燕玲赵汉青张建芝寿成超包怡华张霆
- 关键词：单克隆抗体肺炎支原体多克隆抗体呼吸道感染性疾病抗原特异性原发性非典型肺炎
- 人神经营养因子4基因的分子克隆及序列分析被引量：3
- 1998年
- 以正常人血淋巴细胞染色体ＤＮＡ为模板，ＰＣＲ扩增出神经营养因子４（ＮＴ４）编码基因．将所得基因片段重组于噬菌体载体Ｍ１３ｍｐ１８ＲＦ，筛选得到含人ＮＴ４基因的克隆．采用Ｓａｎｇｅｒ单链末端终止法测出其全部的核苷酸序列，该序列与国外文献所报道的完全一致．
- 王爱坤刘哲伟包怡华
- 关键词：基因克隆
- DNA总体低甲基化、错配修复基因启动子甲基化异常与神经管畸形的相关性被引量：4
- 2012年
- 目的研究神经管畸形(NTDs)胚胎脑组织和皮肤组织DNA总体甲基化以及错配修复基因启动子区甲基化水平。方法在山西省吕梁地区以医院为基础进行病例-对照研究。从县级医院及妇幼保健院收集经B超诊断为NTDs的胎儿标本,同时收集非病理性引产、无畸形和发育迟缓的胎儿作为正常对照组。运用甲基化定量试剂盒测定脑组织和皮肤组织的DNA总体甲基化水平,甲基化特异性多连接依赖性探针扩增试剂盒检测7个错配修复基因(MLH1,MSH2,MSH6,MSH3,MLH3,PMS2和MGMT)启动子区甲基化水平。结果共有65例NTDs胚胎,48例对照胚胎进入研究。①NTDs组的脑组织DNA总体甲基化水平显著低于对照组(5.3%vs6.5%,P<0.001),DNA总体低甲基化显著增加了NTDs发生风险(OR=4.98,95%CI:1.42～17.53)。皮肤组织DNA总体甲基化水平在两组间差异无统计学意义(13.3%vs13.1%,P>0.05);②NTDs和对照组的MSH6启动子(MSH6-301:2.5%vs3.7%,P<0.05)和PMS2启动子(PMS2-328:5.7%vs6.7%;PMS2-142:2.0%vs2.7%,P<0.05)的甲基化水平存在显著差异。结论 DNA总体低甲基化、错配修复基因启动子区的异常甲基化修饰与NTDs发生有关。
- 陈晓丽郭金邹继珍卢晓琳包怡华吴丽华牛勃
- 关键词：神经管畸形错配修复基因病例对照研究
