孙小涵
- 作品数：8 被引量：14H指数：3
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 曲古抑菌素A诱导甲状腺鳞癌SW579细胞株凋亡的实验研究被引量：1
- 2010年
- 目的:观察曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对甲状腺鳞癌SW579细胞株生长增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测培养细胞的增殖情况;吖啶橙染色后荧光显微镜下观察细胞凋亡情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR方法检测细胞凋亡相关基因caspase-3mRNA表达。结果:TSA明显抑制SW579细胞生长,且呈剂量依赖性。吖啶橙染色后荧光显微镜下观察发现,经TSA处理的各组细胞均可见染色质浓集和边集,核膜出芽及凋亡小体等现象。流式细胞仪分析细胞凋亡率随TSA浓度的升高而升高(P<0.05)。RT-PCR方法检测发现细胞凋亡相关基因caspase-3mRNA表达水平上调。结论:不同浓度的TSA可抑制甲状腺鳞癌SW579细胞增殖,促进细胞凋亡,且呈剂量依赖性;其诱导细胞凋亡的作用机制可能与上调caspase-3基因表达,激活caspase途径有关。
- 孙小涵肖建英王新张秀梅王翠瑶崔明宇赵颂陈景青
- 关键词：曲古抑菌素A甲状腺鳞癌细胞凋亡CASPASE-3
- CDC25B蛋白S149/S321位点突变对小鼠1-细胞期受精卵发育的影响被引量：2
- 2012年
- 目的:研究小鼠CDC25B蛋白S149位点对小鼠1-细胞期受精卵发育的影响及S149位点与S321位点的关系。方法:构建pBSK-CDC25B-S149A和pBSK-CDC25B-S149A/S321A突变体,体外转录成mRNA;采用小鼠超排卵技术取G1期受精卵,显微注射CDC25B-WT-mRNA和突变CDC25B-S149A-mRNA、CDC25B-S149A/S321A-mRNA,观察其对受精卵发育、M期促进因子(MPF)活性及CDC2-pTyr15磷酸化状态的影响。结果:CDC25B-S149A-mRNA注射组受精卵卵裂率明显高于CDC25B-WT-mRNA注射组,MPF活性提前1 h达到高峰;而联合突变体CDC25B-S149A/S321A-mRNA注射组卵裂率又显著高于CDC25B-S149A-mRNA注射组。结论:在小鼠1-细胞期受精卵有丝分裂过程中,蛋白激酶A(PKA)对小鼠CDC25B蛋白S149位点的磷酸化修饰是控制受精卵G2/M转换的重要方式,并且S149位点与S321位点可能具有协同作用。
- 刘超肖建英孙小涵徐晓燕于秉治
- 关键词：小鼠受精卵
- TSA对甲状腺鳞癌细胞株Akt、p21、mTOR基因表达的影响被引量：3
- 2010年
- 目的观察曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)对甲状腺鳞癌SW579细胞株Akt、mTOR和p21基因表达的影响,探讨TSA抗甲状腺癌的作用机制。方法体外培养SW579细胞,用CCK-8法检测TSA对SW579的生长抑制作用,计算半数抑制浓度。实验分为对照组、TSA组、Wortmannin组、Wortmannin+TSA组、Rapamycin组,用RT-PCR方法检测SW579细胞Akt、p21及mTOR的mRNA表达,分析各处理组Akt、p21及mTOR基因表达变化。结果 CCK-8结果显示,TSA可明显抑制SW579的增殖,并呈剂量依赖性,半数抑制浓度约为147nmol/L。RT-PCR检测结果表明,与对照组相比,TSA组、Wortmannin组和Wortmannin+TSA组Akt、mTOR mRNA表达水平明显降低,TSA组p21表达显著上调,Wortmannin组p21表达明显降低,各组mTOR表达均明显降低。结论 TSA在一定浓度范围内对甲状腺鳞癌细胞株SW579有剂量依赖性的增殖抑制作用,其机制可能与TSA降低SW579细胞Akt、mTOR基因的表达,进而再上调p21的表达有关。
- 赵颂申静琳孙小涵闫纪亮高月王翠瑶肖建英
- 关键词：曲古抑菌素A甲状腺鳞癌AKTP21MTOR
- CDC25B蛋白亚细胞定位调控小鼠1-细胞期受精卵发育被引量：2
- 2013年
- 为探讨小鼠细胞分裂周期25B(CDC25B)蛋白149位丝氨酸磷酸化状态对小鼠1-细胞期受精卵中CDC25B的亚细胞定位和发育的影响,应用定制的CDC25B-pS149位的磷酸化和非磷酸化抗体检测小鼠1-细胞期受精卵各细胞时期的磷酸化和非磷酸化状态;应用免疫荧光观察各期受精卵中CDC25B蛋白的定位情况;将质粒pEGFP-CDC25B-WT、pEGFP-CDC25B-S149A和pEGFP-CDC25B-S149D融合质粒及空载体质粒显微注射入G1期受精卵中,观察不同显微注射组小鼠1-细胞期受精卵中外源性CDC25B蛋白亚细胞定位.结果显示,CDC25B-S149位丝氨酸在G1和S期被磷酸化,在G2和M期去磷酸化.1-细胞期受精卵从G2向M期的转换过程中,发生了CDC25B向细胞核区的移位,到2-细胞初期,部分CDC25B蛋白又从细胞核回到细胞浆.实验结果提示,小鼠1-细胞期受精卵G2/M期转换过程中,CDC25B的S149位点磷酸化修饰可能是对CDC25B细胞内定位及其活性的精确调节方式.
- 肖建英刘超孙小涵于秉治
- 关键词：亚细胞定位有丝分裂点突变小鼠受精卵
- 蛋白激酶A对CDC25B蛋白S149与S321位点磷酸化的修饰抑制小鼠1-细胞期受精卵有丝分裂被引量：4
- 2012年
- 在小鼠1-细胞期受精卵,蛋白激酶A（protein kinase A,PKA）可通过磷酸化细胞分裂周期25B（cell division cycle25B,CDC25B）的321位Ser引起受精卵分裂阻滞。本文旨在研究PKA对CDC25B149位点Ser的磷酸化对小鼠受精卵发育的影响,及其与321位点的关系。质粒pBSK-CDC25B-WT（野生型）、pBSK-CDC25B-S149A（149位Ser突变成Ala）、pBSK-CDC25B-S321A（321位Ser突变成Ala）、pBSK-CDC25B-S149A/S321A（149位和321位Ser联合突变成Ala）体外转录成mRNAs;显微注射入小鼠S期受精卵中,在PKA抑制剂H-89预处理的M16培养基中培养,观察其对受精卵发育、有丝分裂成熟促进因子（matu-ration promoting factor,MPF）活性及CDC2-Tyr15磷酸化状态的影响。结果显示,H-89呈剂量（0~50μmol/L）依赖性的方式加速小鼠受精卵卵裂。然后选择卵裂率接近100%、H-89（40μmol/L）培养的小鼠受精卵,与对照组相比,CDC25B各种mRNAs注射组受精卵卵裂率明显增高,MPF活性提前达到高峰;CDC2-Tyr15磷酸化状态和MPF活性变化相一致,以上结果说明,CDC25B蛋白的149位Ser也是PKA在体内调控CDC25B的重要靶点。因此在小鼠1-细胞期受精卵有丝分裂过程中,PKA对小鼠CDC25B蛋白S149位点与S321位点的磷酸化修饰可能是控制受精卵G2/M转换的重要方式。
- 肖建英刘超孙小涵于秉治
- 关键词：蛋白激酶A小鼠受精卵
- dbcAMP通过Cdc25B蛋白调控小鼠1-细胞期受精卵发育被引量：3
- 2011年
- 为了研究PKA激活剂dbcAMP通过调控小鼠Cdc25B蛋白S149和S321位点磷酸化状态影响小鼠1-细胞期受精卵的发育,将质粒pBSK-Cdc25B-WT、pBSK-Cdc25B-S149A、pBSK-Cdc25B-S321A和pBSK-Cdc25B-S149A/S321A体外转录成mRNA;显微注射入S期受精卵中,在2 mmol/LdbcAMP的M16培养基中培养,观察其对受精卵发育、MPF活性及CDC2-pTyr15磷酸化状态的影响.结果显示,在有dbcAMP存在时,各组受精卵卵裂时间延迟,但Cdc25B-S/A-mRNAs注射组受精卵卵裂率明显高于Cdc25B-WT-mRNA注射组,MPF活性提前达到高峰;CDC2-pTyr15磷酸化状态和MPF活性变化相一致.因此,在小鼠1-细胞期受精卵有丝分裂过程中,PKA对小鼠Cdc25B蛋白S149位点与S321位点的磷酸化修饰是控制受精卵G2/M转换的重要方式.
- 刘超肖建英孙小涵于秉治
- 关键词：蛋白激酶A小鼠受精卵
- hNIS基因在不同甲状腺组织中表达的实验研究
- 2010年
- 目的观察hNIS在不同病理类型的甲状腺组织中的表达情况,进而探讨hNIS表达水平与甲状腺疾病发生、发展的关系。方法收集临床甲状腺术后患者的组织块,包括桥本甲状腺炎3例,甲状腺瘤4例、结节性甲状腺肿4例、Graves病3例、亚急性甲状腺炎2例,分别采应用RT-PCR和Western bolt的方法检测不同病理类型的甲状腺组织中hNISmRNA及蛋白质的表达水平。结果桥本甲状腺炎hNIS表达明显降低,Graves hNIS表达明显增加,亚急性甲状腺炎、结节性甲状腺肿中的hNIS表达低于正常组织,腺瘤中的hNIS表达情况高于正常甲状腺组织。结论不同病理甲状腺组织hNIS在甲状腺疾病中发挥重要的作用,hNIS表达的改变,对甲状腺疾病的发生、发展有着十分重要的意义。
- 申静琳赵颂孙小涵王翠瑶肖建英
- 关键词：甲状腺瘤结节性甲状腺肿GRAVES亚急性甲状腺炎
- 蛋白激酶B(AKT)抑制剂对小鼠1-细胞期胚胎分裂的影响被引量：3
- 2009年
- 目的:研究蛋白激酶B(AKT)在小鼠1-细胞期受精卵中的作用。方法:激酶活性分析检测2种AKT的抑制剂在小鼠1-细胞期胚胎中对MPF活性的调节;G2/M期的细胞计数检测AKT抑制剂对小鼠1-细胞期胚胎细胞分裂的影响;Western blotting检测AKT抑制剂对小鼠1-细胞期胚胎中pCDC2Tyr15的去磷酸化状态的改变。结果:AKT抑制剂抑制了MPF活性、G2/M期的转换,pCDC2Tyr15的去磷酸化状态。结论:AKT存在于小鼠1-细胞期胚胎中并通过调节MPF活性和pCDC2Tyr15的去磷酸化状态调节细胞分裂的进程。
- 邓欣李亘松朱丽娜周洪伟宋阳刘莹崔城孙小涵于秉治
- 关键词：小鼠受精卵
