张友鸿
- 作品数：9 被引量：28H指数：4
- 供职机构：中国医学科学院中国协和医科大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程更多>>
- 人δ珠蛋白基因启动子区CAAT盒C→T突变对其转录的影响被引量：5
- 2002年
- 目的研究人δ珠蛋白基因启动子区-64位C→T点突变对其转录调控的影响。方法将人δ基因启动子区-64位C突变为T后,克隆于去除强启动子CMV的真核基因表达载体pcDNA3.1穴-雪/Myc-HisA中,分别将含野生型CAAT盒和突变型CAAT盒的人δ基因转染鼠红白血病(MEL)细胞,经DMSO诱导细胞分化,利用半定量RT-PCR技术检测人δ基因转录的变化。结果δ基因启动子区CAAT盒C→T点突变后,含突变型CAAT盒的人δ基因的转录水平是含野生型CAAT盒的2.2倍。结论在mRNA水平直接证实δ基因启动子区CAAT盒的缺陷是影响其转录的重要原因。
- 姚杰陈松森杨克恭狄旭熊安琪张友鸿
- 关键词：转录调节
- 人FL在大肠杆菌中的表达及表达产物的纯化和生物学活性测定被引量：2
- 2002年
- 建立人FL(humanflt3ligand ,hFL)在大肠杆菌中的高效表达系统 ,分离纯化重组hFL为其功能和应用研究打下基础。根据大肠杆菌偏爱密码子人工合成hFL基因膜外区DNA片段 ,由PCR方法获得的hFL基因膜外区DNA片段 ,经测序证明序列正确。构建表达载体pET30a Trx hFL并转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,IPTG诱导表达 ,hFL融合蛋白的表达占菌体总蛋白的 6 0 %以上 ,并以包涵体形式存在。融合蛋白经离子交换层析、分子筛层析纯化 ,并用FXa切割 ,切割效率 >80 %。切割产物经亲和层析纯化。纯化产物进行Westernblot鉴定。纯化的rhFL(recombinanthFL)与GM CSF及TNFα联合作用 ,具有良好的刺激DC增殖活性 ,其增殖能力是GM CSF +TNFα的 2 5倍左右。本文以大肠杆菌为宿主 ,成功地表达了融合蛋白Trx hFL。经纯化的rhFL在体外与GM CSF及TNFα联合使用能有效地刺激人DC的增殖。
- 张友鸿周希亚陈松森娄可佳刘深基杨克恭何维
- 关键词：大肠杆菌FL纯化
- 人FL基因在大肠杆菌中的表达研究
- 造血细胞生长因子在血细胞生成调节机制中具有重要意义。主要包括：红细胞生成素/(Epo/)、粒细胞集落刺激因子/(G-CSF/)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子/(GM-CSF/)、巨噬细胞集落刺激因子/(M-CSF/)、干...
- 张友鸿
- 关键词：造血细胞生长因子FLT3配体分泌表达生物学活性
- 文献传递
- 蛋白质在大肠杆菌间周质中的折叠被引量：1
- 2001年
- 张友鸿杨克恭陈松森
- 关键词：折叠大肠杆菌蛋白质
- 大肠杆菌Sec依赖性蛋白质转运途径被引量：4
- 2000年
- 与真核细胞蛋白质外运方式不同 ,大肠杆菌分泌蛋白的合成和跨内膜转运是不偶联的 ,对于一些小分子蛋白质 (例如噬菌体M 13外壳蛋白 )不需要其它分子协助能自发保持松散构象从核糖体定位到质膜 ,而对于大的蛋白质分子 ,尤其含有疏水结构域或疏水信号肽 ,需要其它分子伴侣的协助以保持转运感受状态才能被有效转运。除了这种依赖Scc(secretory)蛋白的一般分泌途径以外 ,还存在其它Sec非依赖性的Tat途径〔1,2〕等。本文对大肠杆菌Sec依赖性蛋白质转运途径进行综述。
- 张友鸿杨克恭
- 关键词：大肠杆菌
- 一种新型人源化鲑鱼降钙素突变体的构建与表达被引量：5
- 2001年
- 目的 降低鲑鱼降钙素（sCT）对人体的免疫原性。方法 设计并合成人源化鲑鱼降钙素（11 ～ 17）hsCT基因，用基因重组方法构建表达载体，转入大肠杆菌G1724中，经色氨酸诱导表达；用渗透压法处理菌体纯化融合蛋白；以大鼠血清钙浓度降低方法测定hsCT生物活性；用定量Western blot法测定hsCT免疫原性。结果 重组pTrxFus-hsCT质粒在大肠杆菌中获得高效可溶性融合蛋白表达, 表达水平达46%以上, 并得到纯度约90%的融合蛋白,rhsCT保存了鲑鱼降钙素前体活性的一半以上, 免疫原性降低了55%。结论 获得一种新型人源化降钙素（11 ～ 17）hsCT，其保存较高sCT前体的活性，免疫原性明显降低。
- 刘深基陈松森狄旭熊安琪张友鸿
- 关键词：免疫原性生物活性
- 硫氧还原蛋白突变基因用于鲑鱼降钙素的高效可溶性融合表达被引量：3
- 2001年
- 为了化学裂解后重组多肽的分离纯化 ,用双引物定点突变的方法将表达质粒pTrx sCT Gly中硫氧还原蛋白 (Trx)与鲑鱼降钙素 (sCT)的融合基因的第 38位Met突变为Ala,并将突变后的基因克隆到pET30a中 ,然后转入大肠杆菌BL2 1,以IPTG诱导 ,使降钙素与硫氧还原蛋白融合表达 ,融合蛋白占菌体总蛋白的 5 6 %左右。并发现本原核表达体系存在“表达渗漏”现象 ,此现象为在菌体的对数生长期中 ,外源蛋白极少表达 ,随着培养时间的延长 ,外源蛋白逐步积累 ,达到 5 1%的高水平。该发现在基因工程生产重组蛋白工艺中具有应用价值。
- 刘深基陈松森狄旭熊安琪张友鸿
- 关键词：鲑鱼降钙素定点突变
- 应用原位双膜法快速筛选人Flt3配体甲醇酵母高表达转化子被引量：4
- 2002年
- 原位双膜法是一种基于免疫原理的快速筛选高表达甲醇酵母转化子的方法 ,即首先将固体培养基上的菌落转印至醋酸纤维素薄膜上 ,再利用硝酸纤维素薄膜原位捕获穿过醋酸纤维素薄膜的菌落外泌蛋白 ,然后用免疫方法检测与硝酸纤维素薄膜结合的蛋白 .利用此法筛选到人Flt3配体 (hFL)的甲醇酵母高表达转化子 ,液体诱导表达量约 2 0mg L .ELISA结果证明 ,原位双膜法所得的菌落染色强度与该菌落液体诱导表达水平正相关 .蛋白质印迹结果显示 ,培养上清在 2 5ku处有明显杂交条带 ,而对照组杂交呈阴性 ,且表达量随诱导天数增加 .原位双膜法是一种良好的筛选方法 ,可以快捷、准确地筛选高表达酵母转化子 .
- 张艳丽陈松森杨克恭狄旭熊安琪张友鸿
- 关键词：甲醇酵母巴斯德毕赤酵母
- 重组鲑鱼降钙素前体多肽的制备及其性质研究被引量：5
- 2000年
- 硫氧还原蛋白的第 38位 Met突变为 Ala的 Trx- s CT- Gly基因在 E.coli BL2 1 ( DE3)中得到高效表达 .用 Thio Bind亲和树脂纯化表达的融合蛋白 .结果说明 38位的 Met突变为 Ala不影响融合蛋白与树脂的特异性结合 ,融合蛋白的纯度达 90 %以上 .在含有 3mol/L尿素的 70 %甲酸中 ,室温 48h,至少 80 %融合蛋白被溴化氰裂解开 .采用 CM-纤维素吸附 ,用稀盐酸解吸附 ,得到纯度为92 %的降钙素前体多肽 s CT- Gly.氨基酸的序列分析结构表明 ,重组 s CT- Gly的 N端 1 0个氨基酸与预期一致 .在强酸性条件下 ,没有发生氨基酸的脱酰胺反应 ,氨基酸组成分析与预期基本一致 .质谱法测定的分子量为 3492 ,毛细管电泳测定的等电点 p I为 6.46,大鼠降钙素比活性为 1 90 IU/mg左右 ,与天然的人降钙素相当 .
- 刘深基陈松森狄旭熊安琪张友鸿
- 关键词：基因工程药物
