张晓 作品数:20 被引量:20 H指数:3 供职机构: 南京医科大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 江苏省自然科学基金 卫生部科学研究基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
抗IMMT全人源Fab抗体及其在制备抗肝癌药物中的应用 抗IMMT全人源Fab抗体及其在制备抗肝癌药物中的应用,轻链的氨基酸序列如SEQIDNo:1所示,重链的氨基酸序列如SEQIDNo:2所示;轻链的核苷酸序列如SEQIDNo:3所示,重链的核苷酸序列如SEQIDNo:4所... 任勇亚 杜丽坚 任政 张晓 李红 冯振卿狂犬病病毒糖蛋白在昆虫细胞中的表达及其免疫学特性分析 被引量:2 2015年 目的 :利用Bac-To-Bac杆状病毒昆虫细胞表达系统对狂犬病病毒糖蛋白(rabies virus glycoprotein,RVG)基因进行克隆、表达、纯化,并对重组RVG进行免疫学特性鉴定。方法:参照Gen Bank收录的狂犬病病毒CVS-11株RVG基因序列,设计特异性引物,扩增目的基因。RVG基因经Bam HⅠ/KpnⅠ双酶切后定向克隆到p Fast Bac-GP67B载体上,阳性重组转座质粒进一步转化E.Coli DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选及PCR鉴定后获得重组穿梭载体r Bacmid-RVG,将其转染至对数生长期的Sf-9昆虫细胞,进行重组RVG的真核表达。His-Trap HP纯化目的蛋白,SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。重组RVG免疫小鼠,检测其免疫原性和血清中和活性。结果:用Bac-To-Bac杆状病毒昆虫细胞表达系统表达并纯化了重组RVG,分子量约58 000。经重组RVG免疫后的小鼠血清具有中和活性。结论:重组RVG具有天然RVG的活性,为进一步研制亚单位疫苗及制备筛选中和抗体奠定了基础。 王晓蕾 陈芳芳 袁伟 钱国强 耿以如 张晓 杨瑾 熊四平 陈雅 唐奇 仇镇宁 冯振卿 朱进关键词:狂犬病病毒 狂犬病病毒糖蛋白 纯化 抗体 LBL结合PBL在医学院校细胞工程课程中的应用 被引量:2 2014年 细胞工程是一门理论与实践相结合的学科,已成为医学院校生物技术、生物科学等相关专业的必修课程。在医学院校细胞工程教学中,于传统LBL教学模式基础上引入PBL教学模式,为细胞工程课程教学探索出一条PBL与LBL相结合的教学模式道路,以期提高教学质量和医学生的综合素质。 张晓 曹新 冯振卿 丁贵鹏关键词:细胞工程 生物技术 结缔组织生长因子ELISA定量检测方法的建立及初步应用 被引量:1 2011年 目的:建立定量检测人结缔组织生长因子(CTGF)双抗体夹心ELISA方法,并应用此方法检测人血清中CTGF含量。方法:利用简易过碘酸钠法对纯化的抗CTGF单克隆抗体(mAbs)进行HRP标记后,行抗体配对实验;通过方阵滴定法确定包被抗体和酶标抗体的最适工作浓度;以纯化的CTGF抗原为标准品建立标准曲线;以重复性、灵敏性和回收率实验评价ELISA方法。用该方法初步对正常人、HBsAg阳性非肝癌患者及HBsAg阳性肝癌患者血清中的CTGF水平进行检测。结果:最佳配对组合为抗CTGFmAb3H5和HRP标记的抗CTGFmAb4C5,最适工作浓度分别为40μg/ml和1/4000,该方法的平均批内、批间变异系数分别为4.59%和5.70%,灵敏度达1.46 ng/ml,平均回收率为(98.73±4.84)%。用本方法测定35例HBsAg阳性肝癌患者、76例HBsAg阳性非肝癌患者和40例正常人血清CTGF水平,与正常对照组[2.65(2.16~3.18)ng/ml]比较,HBsAg阳性非肝癌组[5.53(2.74~8.23)ng/ml]和HBsAg阳性肝癌组[8.27(4.81±13.65)ng/ml]血清CTGF水平均显著升高(P<0.001);且HBsAg阳性肝癌组与HBsAg阳性非肝癌组比较也明显升高(P=0.014)。结论:建立了一种可用于检测人CTGF的双抗体夹心ELISA方法。初步应用结果表明CTGF水平在HBsAg阳性肝癌患者血清中较HBsAg阳性非肝癌患者、正常人异常升高,提示CTGF分子有望成为HBsAg阳性肝癌早期预警标志物。 詹峰 曾晓燕 张晓 徐言 张建平 焦永军关键词:肝细胞性肝癌 结缔组织生长因子 ELISA 标志物 HSP70与TNF-α在甲状腺癌组织中的表达及其与临床病理分期关系的研究 被引量:2 2013年 目的:探讨热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)与肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)在甲状腺癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法:采用RT-PCR以及Western blot技术检测对比40例甲状腺癌组织、20例甲状腺良性病变组织以及15例正常甲状腺组织中HSP70、TNF-α的表达情况,并分析HSP70表达水平与甲状腺癌临床病理学特征的关系。结果:3组人群组织中HSP70 mRNA水平比较差异有统计学意义(P<0.001),甲状腺癌组织中HSP70 mRNA水平显著高于正常甲状腺组织以及甲状腺良性病变组织(P均<0.05);HSP70 mRNA的表达水平与甲状腺癌组织病理分级显著相关(r s=0.810,P<0.05);甲状腺癌组织中HSP70蛋白水平显著高于正常甲状腺组织(P<0.05);3组人群组织中TNF-αmRNA水平比较差异有统计学意义(P<0.05),甲状腺癌组织中TNF-αmRNA水平显著高于正常甲状腺组织以及甲状腺良性病变组织(P均<0.05)。结论:HSP70、TNF-α在甲状腺癌组织中的表达升高,且HSP70与甲状腺癌组织病理分级明显相关,提示HSP70在甲状腺癌发生发展中发挥重要的作用。 苏波 云鹏 张晓 刘燕青关键词:HSP70 TNF-Α 甲状腺癌 病理 抗IMMT全人源Fab抗体及其在制备抗肝癌药物中的应用 抗IMMT全人源Fab抗体及其在制备抗肝癌药物中的应用,轻链的氨基酸序列如SEQIDNo:1所示,重链的氨基酸序列如SEQIDNo:2所示;轻链的核苷酸序列如SEQIDNo:3所示,重链的核苷酸序列如SEQIDNo:4所... 任勇亚 杜丽坚 任政 张晓 李红 冯振卿文献传递 抗狂犬病病毒G蛋白scFv20抗体及其应用 抗狂犬病病毒G蛋白scFv20抗体及其应用,轻链氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示,重链氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明应用噬菌体抗体库技术,以130例狂犬病疫苗免疫后的健康志愿者外周血淋巴细胞,构建全... 张晓 李欣妍 刘方舟 陆辰文献传递 全人源抗狂犬病病毒G蛋白单链抗体制备及中和活性鉴定 被引量:5 2013年 目的:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,筛选针对狂犬病病毒G蛋白不同表位的单链抗体(scFv)并鉴定其中和活性。方法:分离130例经狂犬病疫苗免疫接种志愿者的外周血淋巴细胞,提取总RNA,逆转录制备cDNA,构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库。以纯化的狂犬病病毒G蛋白包板筛选,对阳性克隆进行可溶性表达,并鉴定中和活性。结果:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,库容为5.0×107,经核酸序列分析,证实插入片段为scFv。经过5轮筛选,从富集的次级抗体库中随机挑出140个克隆,通过phage-ELISA鉴定得到4株核酸序列不同的scFv抗体。经His-Trap纯化后进行中和活性鉴定,获得1株有中和活性的scFv,其中和效价为0.13 IU/mg。结论:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,获得1株具有中和活性的抗狂犬病病毒G蛋白scFv抗体,为进一步研发狂犬病治疗性抗体药物奠定了基础。 张倩倩 赵茜 张晓 丁贵鹏 金秋 高畅 熊四平 陈玉平 朱进 冯振卿关键词:噬菌体抗体库 中和活性 抗人生长转化因子15单克隆抗体制备及鉴定 被引量:5 2011年 目的:制备抗人生长转化因子15(GDF15)单克隆抗体(mAb)并鉴定其特性。方法:构建GDF15原核表达载体pGEX-4T-2-gdf15,诱导表达并纯化GST-GDF15融合蛋白。以该融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取小鼠的脾细胞与同系小鼠Sp2/0骨髓瘤细胞常规融合,依次进行阳性杂交瘤细胞株的筛选及亚克隆,最终获得稳定分泌抗GDF15 mAb杂交瘤细胞株。以间接ELISA法检测抗体效价;Western blot鉴定抗体特异性;免疫共沉淀法初步检测在肝癌患者血清中GDF15表达水平。结果:获得1株稳定分泌抗人GDF15 mAb杂交瘤细胞株,命名为9G3;抗体免疫球蛋白亚类为IgG1,轻链为κ型;免疫共沉淀及质谱分析证实抗GDF15 mAb9G3能与肝癌患者血清中GDF15蛋白特异性结合并且GDF15水平在肝癌患者血清中较正常人显著升高。结论:成功制备了抗人GDF15mAb,为后期肝癌早期诊断试剂盒的开发奠定了良好的基础。 詹峰 曾晓燕 张晓 周顺 徐言 张建平 焦永军关键词:GDF15 单克隆抗体 HCC 牛磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶单克隆抗体的制备 2015年 目的制备牛磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)单克隆抗体(m Ab),并对其特异性进行初步鉴定。方法构建含PEPCK基因的重组质粒,将其转化大肠杆菌,并进行诱导表达,对表达产物PEPCK重组蛋白进行纯化,以PEPCK重组蛋白为抗原,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合获得杂交瘤细胞,用间接ELISA筛选阳性克隆,获得稳定分泌抗牛PEPCK m Ab的细胞株,并用Western blot法,免疫组织化学染色和免疫沉淀鉴定其特异性。结果成功获得稳定分泌抗牛PEPCK m Ab的杂交瘤细胞株。Western blot法、免疫组织化学和免疫沉淀结果表明,该抗体能与牛PEPCK蛋白特异性结合。结论成功获得抗牛PEPCK m Ab。 盛美蕾 张晓 张纬 张燕飞 王盈 戴一凡关键词:磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶 单克隆抗体 杂交瘤