张红琴
- 作品数：7 被引量：4H指数：2
- 供职机构：南方医科大学生物技术学院更多>>
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- 腺苷酸环化酶激活剂对脆性X智力低下一号基因重启及蛋白表达的影响被引量：2
- 2011年
- 目的在用硝普钠体外封闭脆性X智力低下一号(FMR1)基因建立脆性X综合症细胞模型的基础上,初步研究腺苷酸环化酶激活剂弗司可林(FSK)对FMR1基因的重启及表达的影响。方法利用硝普钠产生的一氧化氮可以诱导FMR1基因启动子区Cp G岛甲基化的原理,将人类慢性髓源性白血病细胞系(K-562)在加入适宜浓度硝普钠(SNP)的完全培养基中培养,诱导FMR1基因启动子区CpG岛甲基化从而使FMR1基因封闭,并失表达;用普通及Taqman荧光定量PCR、Westblot技术验证腺苷酸环化酶激活剂弗司可林(forskolin,FSK)诱导FMR1基因封闭后的重启及表达。结果浓度1000μmol/L的SNP作用24h后,可使K-562细胞的FMR1基因量降至正常组的0.2%并达到封闭效果,且72h后可抑制脆性X智力低下蛋白(FMRP)的表达,蛋白表达量降至正常组的48%;发现浓度50μmol/L的FSK可以在24h时重新开启封闭的FMR1基因,使其表达量上升到13.3%,最高达13.8%并持续至48h,且72h后体现在FMRP的表达上,其量基本上与正常组相当。结论 FSK可有效地诱导启动子区CpG岛甲基化封闭后的FMR1基因重新启动以及满意的FM-RP表达,FSK对Fra(X)的治疗作用还有待于进一步研究。
- 张红琴陈瑶姚英民陈红武杨明
- 腺苷酸环化酶激活剂调控FMR1基因启动子活性及作用位点CRE的鉴定
- 2014年
- 目的本研究试图证明,特异性腺苷酸环化酶激活剂forskolin(FSK)可以通过调控FMR1启动子区内的MSE/CRE位点而再激活封闭的FMR1基因。方法拟以FMR1启动子MSE/CRE位点为研究对象,在不改变MSE的整体结构功能的情况下,运用分子生物学方法诱导CRE位点突变,达到其灭活CRE功能目的,从而建立正常MSE以及两种CRE突变启动子M1、M2双荧光素酶报告基因系统,比较CRE在正常或灭活情况下,FSK药物对FMR1诱导效果的影响。结果成功构建FMR1启动子区MSE/CRE位点双荧光素酶报告基因系统,结果显示当CRE位点正常时,FSK对活性低下的FMR1启动子有显著地激活作用,而当CRE位点突变之后,FSK则无此作用,由此证实CRE位点是FSK重启FMR1基因的关键位点。结论提示腺苷酸环化酶激活剂FSK可能主要是通过FMR1启动子区内的MSE/CRE重叠位点,经c AMP通路实现了对FMR1基因的调控。
- 陈瑶秀芳张红琴姚英民
- 脑组织环磷腺苷水平与新生大鼠缺血缺氧性脑损伤被引量：1
- 2010年
- 目的:观察新生SD大鼠缺血缺氧性脑损伤(HIBD)后脑组织内环磷腺苷水平(cAMP)的变化及初步探讨环磷腺苷葡胺(MCA)对新生SD大鼠缺血缺氧性脑损伤的干预作用。方法:建立新生大鼠HIBD模型,于缺血缺氧后2、24、48、72、168 h(7天)时测定脑组织cAMP的含量;观察用MCA 24、48、72 h后脑组织内cAMP含量以及72 h后脑组织含水量,大脑损伤程度,超氧化物歧化酶活性(SOD)及氧化代谢产物丙二醛(MDA)含量以及脑组织病理学变化。结果:新生大鼠缺血缺氧后脑组织cAMP含量显著下降,缺氧后2 h脑组织内cAMP水平下降最显著(至正常的25%左右),7天后仍低于正常水平(达70%左右);用MCA后,脑组织cAMP水平显著升高,脑组织含水量和脑损伤程度、MDA下降,SOD活性升高,病理变化减轻。结论:缺血缺氧后脑组织内cAMP代谢紊乱,早期给予外源性cAMP类药物对缺血缺氧性脑损伤具有一定的保护作用,提示cAMP代谢紊乱可能参与缺血缺氧脑损伤的病理机制。
- 姚英民张红琴陈红武李宁
- 关键词：缺血缺氧脑损伤新生大鼠环磷腺苷葡胺
- 氨茶碱对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的干预作用
- 2012年
- 目的:观察氨茶碱对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的干预作用。方法:建立新生大鼠HIBD模型,随机分为假手术组,HIBD组和氨茶碱组,于缺氧72 h断头取脑,测定脑组织含水量、大脑损伤程度、超氧化物歧化酶活性(SOD)及氧化代谢产物丙二醛(MDA)含量和脑组织内cAMP含量;HE染色观察各组大脑皮层结构及神经细胞形态。结果:与HIBD组相比,氨茶碱组脑组织含水量下降、大脑损伤程度减轻;MDA下降,SOD活性升高;给药后24 h,可使脑组织内cAMP含量轻度升高;病理变化减轻,凋亡细胞减少。结论:氨茶碱对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤有一定保护作用。
- 杨明杨峰霞姚英民张红琴
- 关键词：缺氧缺血性脑损伤氨茶碱新生大鼠
- 脆性X智力低下一号基因启动子双荧光素酶报告基因的构建及活性测定被引量：1
- 2011年
- 目的构建脆性X智力低下一号基因启动子双荧光素酶报告基因,并检测启动子活性。方法从K562细胞中钓取启动子片段MSE,然后与pGL-4载体连接,鉴定后转染hela细胞,检测其启动子的活性。结果从K562细胞中成功钓取了启动子片段MSE,将MSE与PGL4载体连接成重组质粒pGL-4/MSE位,重组质粒经过PCR、酶切鉴定后测序,测序结果与GeneBank报道序列一致。重组质粒pGL-4/MSE位转染hela细胞的相对荧光素酶值与阴性对照组相比有明显区别(P<0.05)。结论成功构建了脆性X智力低下一号基因启动子双荧光素酶报告基因,并具有满意的活性,为后续研究发病机制及作用位点提供依据。
- 姚英民池秀芳张红琴杨明陈瑶
- 关键词：脆性X综合征FMR1启动子
- 腺苷酸环化酶激活剂诱导脆性X智力低下一号基因重新表达的研究
- 研究背景:
脆性 X综合征[fragile X syndrome,Fra(X)]是最常见的遗传性智力低下性疾病之一。据保守估计,我国至少有20万脆性 X病人,由于病人寿命正常,而智力低下,没有独立生活的能力,因此对...
- 张红琴
- 关键词：致病机制基因转录蛋白表达
- 三种脆性X综合征细胞模型的比较被引量：2
- 2010年
- 目的比较三种细胞在建立脆性X综合征细胞模型中的差异,为脆性X综合征的实验研究提供有效,便利的细胞模型。方法利用硝普钠可通过产生NO诱导脆性X智力低下一号基因(fragile X mental retardation-1 gene,FMR1)启动子区Cp G岛甲基化的原理,建立脆性X综合征细胞模型;采用人类新鲜的外周血单个核细胞(PMBC),大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12),人类慢性髓源性白血病细胞系(K-562),比较三种细胞模型,在硝普钠用药浓度,封闭持续时间及用腺苷酸环化酶激活剂弗司可林(forskolin,FSK)诱导封闭基因重新表达持续时间等方面的特点,通过逆转录PCR检测FMR1基因封闭或开启的效果。结果三种细胞模型在硝普钠用药浓度,封闭持续时间及弗斯可林诱导重新表达持续的时间方面都不完全相同。结论三种脆性X综合征细胞模型各有其优缺点,可根据不同地研究方向选用不同的细胞模型。
- 张红琴陈瑶陈红武姚英民
- 关键词：硝普钠脆性X综合征细胞模型
