张颖
- 作品数：17 被引量：30H指数：4
- 供职机构：扬州大学动物科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金江苏省农业科技支撑计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鸡piRNAs分子的克隆及表达规律分析
- 本研究首次以鸡作为研究对象,通过构建小RNAs的cDNA文库和TA克隆测序的方法从睾丸组织中获得了23个piRNAs序列,同时采用Q-PCR技术分析了中国地方鸡种如皋鸡的不同生命阶段不同组织中piRNAs时空表达规律.结...
- 张颖常国斌陈蓉戴爱琴
- 关键词：基因表达
- 文献传递
- 鹌鹑Piwi基因的克隆及鉴定
- 鉴于Piwi蛋白在哺乳动物生殖细胞中的重要作用,本研究选择体型小、繁殖周期短的鹌鹑为研究对象来开展禽类Piwi蛋白及其结合小RNA的初步研究,以期填补国内相关研究中的空白。本研究通过RT-PCR和RACE技术首次获得了鹌...
- 陈蓉常国斌张颖戴爱琴马腾徐琪陈国宏
- 关键词：鹌鹑PIWIPIRNA禽类
- 文献传递
- 鹌鹑首例小分子RNA测序图谱
- 非编码小分子RNA(ncRNAs)几乎存在于所有较高等的真核生物细胞中,对生物体具有非常重要的调控作用。各种调控小分子RNA图谱的构建可以促进ncRNAs调控网络的完善及RNA生物学的发展。本研究利用Solexa深度测序...
- 常国斌陈蓉张颖戴爱琴马腾徐琪陈国宏
- 关键词：鹌鹑睾丸小分子RNAMIRNAPIRNA
- 文献传递
- 如皋鸡NLRC5基因外显子8多态性及其与部分免疫指标的关联分析被引量：1
- 2013年
- 采用PCR-SSCP技术对中国地方鸡种如皋鸡NLRC5基因外显子8多态性进行检测,结果检测到AA和AB2种基因型,基因型频率分别为0.867 9和0.132 1,X2适合性检验表明如皋鸡NLRC5基因外显子8等位基因的分布处于Hardy-Weinberg平衡状态。序列分析结果显示,NLRC5基因外显子8存在G43A同义突变。测定部分免疫指标,分析不同周龄如皋鸡个体免疫指标的差异以及12周龄如皋鸡2种基因型与免疫指标间的关联性,结果表明:IgM含量和IgG含量变化比较一致,随周龄不断降低;2周龄IgM含量显著高于4、6、8、10、12周龄(P<0.05);12、10、8周龄IgG含量极显著低于2、4、6周龄(P<0.01);淋巴细胞转化率在12周龄达到最大值为33.742%,极显著高于其他周龄(P<0.01);12周龄AA型个体的IgM和IgG含量、淋巴细胞转化率均高于AB型个体,但差异并不显著(P>0.05)。
- 李芹常国斌陈国宏徐琪窦套存栾德琴陈蓉盛中伟张颖
- 关键词：多态性免疫指标
- 鸡Piwi蛋白的亚细胞定位研究被引量：4
- 2013年
- 通过构建2种真核表达载体比较Piwi蛋白在真核细胞中的表达部位,为进一步研究Piwi蛋白的生物学功能提供依据。采用RT-PCR方法克隆了狼山鸡睾丸组织中Piwi基因CDS,构建含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的融合表达载体pEGFP-C1-Piwi,脂质体PEI介导基因转染NIH-3T3细胞,同时构建pcDNA3.1-Piwi真核表达载体,采用细胞间接免疫荧光方法检测Piwi蛋白在NIH-3T3细胞的表达部位。结果表明,成功克隆出公鸡Piwi基因的全序列CDS,大小为2 604bp,与GenBank中预计的序列基本一致;融合表达载体pEGFP-C1-Piwi在整个细胞中都有表达;而间接免疫荧光方法检测到pcDNA3.1-Piwi载体主要在NIH-3T3细胞质中表达。Piwi蛋白主要在细胞质中表达,采用间接免疫荧光方法比EGFP报告基因法更为可靠,适合目的蛋白的亚细胞定位研究。
- 戴爱琴常国斌陈蓉张颖阴彦辉马腾李建超陈国宏
- 关键词：真核表达亚细胞定位绿色荧光蛋白间接免疫荧光
- 鹌鹑Piwi基因的克隆及鉴定
- 鉴于Piwi蛋白在哺乳动物生殖细胞中的重要作用,本研究选择体型小、繁殖周期短的鹌鹑为研究对象来开展禽类Piwi蛋白及其结合小RNA的初步研究,以期填补国内相关研究中的空白.本研究通过RT-PCR和RACE技术首次获得了鹌...
- 陈蓉常国斌张颖戴爱琴马腾徐琪陈国宏
- 关键词：禽类精子发生
- 文献传递
- 鹌鹑piRNAs和Piwil1基因克隆及表达研究被引量：7
- 2011年
- 【目的】目前,国内外尚无有关禽类piRNAs及其结合蛋白Piwi的研究报道,开展禽类小分子RNA及其结合蛋白的研究将为小分子RNA的遗传特性、发生和消失机理以及转基因鸡等研究提供基础依据。【方法】以鹌鹑为研究对象,通过构建cDNA文库和TA克隆测序的方法从睾丸组织中获得piRNAs序列和Piwil1基因的CDS序列,同时采用Q-PCR技术分析了鹌鹑不同生命阶段不同组织中piRNAs和Piwil1基因的表达规律。【结果】从鹌鹑睾丸组织中克隆了13个piRNAs序列和Piwil1基因的CDS序列;Q-PCR结果表明piRNAs和Piwil1基因在鹌鹑不同生命阶段不同组织中均有不同程度地表达。【结论】鹌鹑piRNAs长度与哺乳动物相似;Piwil1基因与红色原鸡有较高的同源性,包含PAZ和Piwi结构域,无信号肽剪切位点,推测其属于Piwi家族蛋白,可能通过降低结合RNA的能力或者影响其它转录因子与结构基因启动子的亲和性发挥调控作用;在睾丸组织中,piRNAs和Piwil1蛋白的表达量均是随着个体的不断发育而增加,推断在禽类中piRNAs可能与Piwi蛋白相互作用共同调控精子的发生过程。
- 陈蓉常国斌张颖陈国宏胡国顺栾德琴刘艳戴爱琴
- 关键词：鹌鹑睾丸PIWI克隆
- 鸡肌内脂肪性状候选基因的聚合效应及初步验证被引量：5
- 2011年
- 【目的】旨在探讨影响鸡脂肪性状重要候选基因A-FABP、Ex-FABP的聚合效应,并对其进行初步验证,为进一步开发利用脂肪性状的有效分子标记提供依据。【方法】运用PCR-SSCP技术分别检测如皋鸡A-FABP、Ex-FABP基因所有外显子区域的单核苷酸多态性(SNPs),分析单基因型和聚合基因型与12周龄胸肌脂肪含量之间的关系;同时,采用荧光定量PCR技术检测后代分离群体单基因型和聚合基因型的发育性表达规律,进行聚合基因型遗传效应的初步验证。【结果】如皋鸡A-FABP的外显子3、Ex-FABP基因外显子4区域中存在A/G突变,共出现3种基因型;AA型(A-FABP)、BB(Ex-FABP)型个体的肌内脂肪含量显著高于其它基因型(P<0.05),为有利基因型,两者聚合的AABB型个体同样为最佳基因型。经后代分离群体Q-PCR证实,单基因表达和聚合基因型的表达均不存在性别效应,在胸肌组织中,两候选基因在4周龄时表达量最高,8周龄下降,至12周龄缓慢上升。在聚合基因型个体中,均以AABB型表达水平最高,ABAB型表达量较低。【结论】A-FABP、Ex-FABP两个基因存在聚合效应;其中,AABB型与胸肌组织中高肌内脂肪含量具有紧密关联性。A-FABP、EX-FABP两基因及其聚合基因型可作为如皋鸡肌内脂肪性状有效的候选标记。
- 常国斌刘向萍陈蓉栾德琴王克华张颖马腾周伟戴爱琴陈国宏
- 关键词：肌内脂肪基因型
- 鸡pilRNAs分子的克隆及表达规律分析被引量：2
- 2012年
- 旨在为禽类piRNAs的遗传特性及发生和消失机理提供基础依据,也为禽类小分子RNA及其结合蛋白的深入研究和实际应用积累基础资料。本研究以鸡作为研究对象,通过构建小RNAs的cDNA文库和TA克隆测序的方法从睾丸组织中获得了19个大小为23～39nt的pilRNAs序列。根据pilRNAs的大小、同源序列和二级结构特征,选择了3个不同序列并采用Q-PCR技术分析了中国地方鸡种如皋鸡和引进隐性白鸡的不同生长阶段不同组织中pilRNAs时空表达规律。结果表明,编码鸡pilRNAs基因序列在染色体和基因组中的分布同其它物种一样分别具有不均匀性和基因间区偏爱性;二级结构预测,发现pilRNAs具有与miRNAs不同的独特的茎-环结构;鸡pilRNAs不仅大量存在于生殖组织,还大量存在于其他组织,表达规律因pilRNAs种类、品种、性别的变化而不同,gga-piR-1在2个品种的公、母鸡所有组织中的表达量均是相对最低,且到12周龄时均趋向一致的水平;而gga-piR-4表达量相对较高;gga-piR-5在如皋公鸡中所检测的全部组织中表达量最高,且在8周龄达到最高峰,在隐性白公鸡中的表达量相对较高,而在如皋母鸡、隐性白母鸡中均呈现中度表达水平。二级结构的独特特征从不同的角度阐明了pilRNAs和miRNAs 2种成熟小RNAs的剪切方式和加工机制的完全不同;鸡pilRNAs的多组织表达表明它可能不仅局限于生殖系的发育和维持,在其他组织中也扮演了重要的角色,不同种类的pilRNAs可能在生命发育过程中参与不同的调控功能。
- 张颖常国斌陈蓉戴爱琴栾德琴李建超马腾华登科陈国宏
- 关键词：睾丸Q-PCR克隆
- 鸡NLRC5基因克隆及生物信息学分析被引量：3
- 2013年
- 本实验克隆了狼山鸡NLRC5基因CDS及UTR序列,对NLRC5核酸序列以及氨基酸序列特征进行分析,为进一步研究NLRC5在天然免疫系统中的功能奠定基础。采用RT-PCR方法扩增NLRC5的CDS,并通过RACE法扩增3′UTR和5′UTR,拼接成全长转录本,提交至GenBank,获得登录号:JQ044414。结果表明:鸡NLRC5基因序列与哺乳动物同源性较低,转录本全长7047nt,5′UTR 308 bp、3′UTR 1137 bp。基因定位在11号染色体,共49个外显子,转录本可能存在可变剪切体;基因上游2 kb包含C-Rel,AP-1等天然免疫信号通路重要转录因子结合位点和启动子元件;以及1个944 bp的CpG岛;其氨基酸序列包含与哺乳动物相似的NACHT及LRRs结构域,在靠近N端处包含NLS和NES,不包括其他类型信号肽,其蛋白可在胞质与核之间穿梭。表明鸡NLRC5的表达可能受到表观遗传的调控,在天然免疫及适应性免疫中的作用与哺乳动物相似。
- 马腾常国斌陈蓉张颖戴爱琴徐琪陈福斌朱金金陈国宏
- 关键词：基因克隆RACE生物信息学狼山鸡
