方园园 作品数:6 被引量:4 H指数:1 供职机构: 南开大学 更多>> 发文基金: 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 生物学 医药卫生 农业科学 更多>>
一种高产促胰岛素激素的毕赤酵母工程菌及其构建方法 本发明公开了一种高产促胰岛素激素毕赤酵母(Pichia pastoris)工程菌及其构建方法。本发明运用分子生物学技术先构建毕赤酵母(P.pastoris)表达载体pPIC9GLP-1,然后将其线性化后转化进入毕赤酵母G... 李明刚 侯建华 方园园 薄涛 王翠艳 杨少辉 武志强 闫瑞香文献传递 一种高产促胰岛素激素的毕赤酵母工程菌及其构建方法 本发明公开了一种高产促胰岛素激素毕赤酵母(Pichia pastoris)工程菌及其构建方法。本发明运用分子生物学技术先构建毕赤酵母(P.pastoris)表达载体pPIC9GLP-1,然后将其线性化后转化进入毕赤酵母G... 李明刚 侯建华 方园园 薄涛 王翠艳 杨少辉 武志强 闫瑞香文献传递 治疗糖尿病的短肽药物GLP-1在毕赤酵母中的分泌表达 被引量:1 2006年 利用毕赤酵母表达治疗糖尿病的短肽药物GLP-1(胰高血糖素样肽-1)。以pUC18GLP-1 为模板进行PCR,将获得的GLP-1基因片段克隆到pMD18T-vector上,然后将SmaI和NotI双酶切获得的基因小片段插入到表达载体pPIC9上,完成表达载体pPIC9GLP-1的构建,SacI线性化重组质粒,通过醋酸锂转化法转化毕赤酵母GS115感受态细胞,成功构建了能够分泌抗二肽酶Ⅳ降解的长效促胰岛素激素的毕赤酵母工程菌株。结果表明毕赤酵母6号菌株的GLP-1分泌表达产量最高可达 100.00 mg/L.实现了GLP-1在毕赤酵母中的表达,为进一步开发治疗糖尿病新型短肽药物的研究奠定了基础。 侯建华 王翠艳 方园园 杨少辉 薄涛 杨立泉 于雷 李明刚关键词:糖尿病 胰高血糖素样肽-1 毕赤酵母 短肽 分泌表达 产人胰岛素毕赤酵母工程菌的构建 被引量:3 2006年 根据人胰岛素的氨基酸序列和酵母偏爱的密码子,采用基因半合成技术合成人胰岛素基因.将合成的胰岛素基因克隆到pP IK 9质粒,构建了毕赤(P ich ia)酵母重组表达载体pP IN S319,用B g lⅡ线性化后用电转化法导入毕赤酵母G S ll5菌株,经过营养筛选和PCR复筛,得到含人胰岛素基因的毕赤酵母工程菌株.经SDS-PAGR和密度扫描分析表明,合成的人胰岛素基因能够在毕赤酵母中高效分泌性表达,表达量可达0.563 m g/mL,表达产物无需转肽过程,只经过胰蛋白酶和羧肽酶B简单处理即得到优质重组人胰岛素,其体内活力约为30 IU/m g. 王隆飞 方园园 陈功 博涛 侯健华 杨少辉 李桂兰 李欣 李明刚关键词:人胰岛素基因 毕赤酵母 分泌性表达 速效胰岛素原基因的克隆及其在毕赤酵母中的分泌表达 作为最重要的降血糖药物,胰岛素具有巨大的市场需求。近年来,各国学者纷纷研究各种重组胰岛素在医疗上的应用。重组人胰岛素基因曾先后在大肠杆菌和酿酒酵母(S. cerevisiae)中表达,但由于大肠杆菌和酿酒酵母自身的缺陷,... 方园园关键词:降血糖药物 基因克隆 毕赤酵母 肝内原发癌与消化系统转移性腺癌的免疫组化鉴别诊断——CDX2、CK7、CK20的应用 1.实验目的:
研究CK7、CK20、CDX2在低分化肝细胞癌(P-HCC),肝内胆管癌(ICC)、肝内转移性结肠癌(CRLM)、胃癌(GLM)及胰腺导管腺癌(PLM)中的表达,探讨其在肝内原发癌与转移性腺癌之间的... 方园园文献传递