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O^6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶在子宫颈癌中的表达及临床意义被引量：1: 2014年; 目的探讨O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)在子宫颈癌组织中表达情况及其临床意义。方法采用免疫组织化学染色方法检测子宫颈癌组织中MGMT的表达。结果 60例子宫颈癌组织中MGMT的阳性表达率为93.33%,显著高于14例对照正常宫颈组织中阳性率42.8%,(P<0.05);子宫颈癌患者中,Ⅰ期与Ⅱ期的MGMT阳性率分别为100%、95.83%,显著高于Ⅲ-Ⅳ期的阳性率62.5%(P<0.01)。结论 MGMT的表达水平与宫颈组织癌变发展的进程相关,其在宫颈癌组织的高表达可为宫颈癌的诊断提供重要依据。; 张志勇邓荣春周爱群施桥发; 关键词：子宫颈癌免疫组织化学染色

HPV-16E4原核表达系统的建立和表达特性研究被引量：2: 2006年; 目的克隆人乳头瘤病毒-16型(HPV-16)E4基因(E4),构建E4蛋白表达重组工程菌,探索表达条件和鉴定表达产物特性。方法以临床HPV-16阳性宫颈炎患者上皮细胞提取物为模板,PCR扩增E4完整基因,并定向克隆到pET32a(+)原核表达质粒中,经双酶切和测序鉴定后转入大肠杆菌BL-21(DE3),获得工程菌(BL-21/E4)。经IPTG诱导,表达蛋白用SDS-PAGE和Westernblot鉴定。结果克隆到完整E4基因为342bp,与HPV-16东亚型的同源性为99%,与其他HPV16型的同源性高于97%。在28℃和37℃,0.1mmol/L的IPTG诱导18h时,重组蛋白(rE4)表达量分别占菌体总蛋白的12.2%和12.8%;SDS-PAGE和Westernblot证明rE4蛋白与表达载体的标签蛋白形成相对分子质量约34×103的可溶性融合蛋白(rE4/His)。结论成功构建了表达带标签的融合重组蛋白(rE4/His)的重组大肠杆菌BL-21/E4表达系统,这为高纯度HPV-16E4蛋白的制备和相关研究奠定了基础。; 王保宁施桥发李虹张卫东庄永华杨靖蒋忠华李明远; 关键词：HPV-16 原核表达

HPV16 E7蛋白免疫学特性研究及其单克隆抗体制备: 目的 HPV16是引起子宫颈癌等疾病的重要原因。在子宫颈癌患者中，90％以上的患者存在HPV感染，其中60％以上为HPV16感染。在HPV16感染的子宫颈癌细胞中，HPV16 E7蛋白存在持...; 施桥发; 关键词：人乳头瘤病毒16型免疫印迹单克隆抗体反转录PCR; 文献传递

风湿性关节炎的自身抗体免疫学指标检测及应用进展被引量：11: 2013年; 类风湿性关节炎的诊断涉及临床表现、X线改变和实验室自身抗体免疫学相关检测指标等,而自身抗体临床实际中应用的主要有类风湿性因子(RF)、抗核周因子抗体(APF)、抗角蛋白抗体(AKA)、抗RA33抗体、抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP抗体)、抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体(抗MCV抗体)、葡萄糖-6-磷酸异构酶(GPI)抗体、抗核抗体(ANA)等一些自身抗体。笔者就这些指标做一综述。; 何媛施桥发; 关键词：抗RA33抗体

间充质干细胞和单个核细胞异种移植治疗大鼠肝损伤的研究: 2010年; 目的：研究小鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）和单个核细胞（MNCs）在四氯化碳（CCl4）诱导性大鼠肝损伤治疗中的作用。方法：无菌条件下取雄性Balb/c小鼠骨髓分离MNCs,培养纯化及流式细胞仪筛选获得MSCs;采用CCl4制作雌性Wistar大鼠肝损伤模型,随机分为MSCs移植组、MNCs移植组和肝损伤对照组。2个细胞移植组分别在CCl4损伤后立即经尾静脉注入小鼠MSCs或MNCs,各组分别于移植细胞输入前即刻（T0）、输入后第1（T1）、7（T2）、14（T3）、28（T4）、42（T5）天断尾取血检测丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）。6周后处死大鼠,比较肝脏质量指数,肝病理学切片检测肝损伤程度,PCR检测小鼠Sry基因片段植入大鼠肝脏的情况。结果：MSCsCD44、CD90均表达阳性,而CD45表达阴性;2个细胞移植组在T1~4时点ALT和AST浓度差异有统计学意义（P〈0.05）;与肝损伤对照组比较,MSCs移植组ALT和AST浓度在T1~4时点均降低;MSCs移植组肝损伤修复程度明显好于MNCs移植组和肝损伤对照组;仅MSCs移植组肝内有小鼠Y染色体阳性细胞存在。结论：体外分离培养及扩增的小鼠MSCs可植入到CCl4诱导性肝损伤大鼠的肝组织中,并改善CCl4导致的肝损伤。; 王福财刘玉琳傅颖媛施桥发; 关键词：间质干细胞肝疾病

一种用于原代细胞过滤的离心管: 本实用新型一种用于原代细胞过滤的离心管，包括离心管管体、离心管管盖和可调节过滤器，所述离心管管体内壁上等距设有四个限位球，所述限位球位于离心管管体内同一深度，所述可调节过滤器置于离心管管体内，可调节过滤器底端与限位球相接...; 李鑫辰唐森施桥发闵卫平

缺氧诱导因子HIF-1α与HIF-2α在宫颈癌组织中的表达及相关性研究被引量：8: 2012年; 目的:研究缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1alpha,HIF-1α)与缺氧诱导因子-2α(hypoxia inducible factor-2alpha,HIF-2α)在宫颈癌组织中的表达和相关性。方法:免疫组织化学染色方法检测宫颈癌组织中HIF-1α与HIF-2α的表达。用SPSS统计软件分析HIF-1α与HIF-2α在宫颈癌组织中的相关性。结果:原位癌组、浸润癌组HIF-1α蛋白阳性表达率分别为57.7%、78.6%;HIF-2α蛋白阳性表达率分别为65.4%、85.7%,宫颈癌组织中HIF-1α阳性表达得分为1.56±1.60,HIF-2α阳性表达得分为4.51±1.04,HIF-1α和HIF-2α蛋白的表达呈显著正相关(rs=0.855,P<0.05)。结论:宫颈原发癌、浸润癌中,HIF-1α、HIF-2α表达与宫颈癌临床病理特征有密切关系,且两者表达呈显著正相关,两者在宫颈癌的发生发展及浸润转移过程中可能起协同作用。; 江丽霞施少华施桥发李峰刘四君; 关键词：缺氧诱导因子-1Α 缺氧诱导因子-2Α 免疫组织化学染色

鼠β-防御素2(mBD2)真核表达质粒的构建及稳定表达株的鉴定被引量：8: 2007年; 目的:对小鼠β防御素-2(mBD2)基因进行克隆,构建其真核表达载体,筛选出稳定表达细胞株,并研究mBD2的生物学特性及其抗肿瘤机制。方法:通过向BALB/c小鼠腹腔注射内毒素(LPS),建立小鼠急性时相反应,取其肺组织提取总RNA,采用RT-PCR方法扩增小鼠mBD2基因,经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后插入相同酶切的pcDNA3.1(+)真核表达载体,对其进行酶切和测序鉴定。将构建好的真核表达质粒pcDNA3.1(+)/mBD2转染SiHa细胞,采用G418进行稳定表达株的筛选,用免疫荧光染色和RT-PCR鉴定细胞内mBD2蛋白表达情况。结果:提取小鼠肺组织总RNA,采用RT-PCR方法扩增了250bp左右的产物,通过EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切,构建了真核表达质粒pcDNA3.1(+)/mBD2。SiHa被该质粒转染后,在100mg/LG418浓度下筛选20d,得到了稳定表达mBD2的细胞株,用免疫荧光染色显示mBD2蛋白在胞质中有大量表达,RT-PCR反应扩增到了mBD2的mRNA。结论:成功地构建了pcDNA3.1(+)/mBD2真核表达质粒,mBD2蛋白在SiHa细胞中能稳定表达,这些结果为进一步深入研究mBD2的生物学特性及其抗肿瘤的作用奠定了基础。; 魏晓丽施桥发李虹李婉宜蒋忠华李明远; 关键词：真核表达免疫荧光 RT-PCR

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