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重组人组织因子途径抑制因子在毕赤酵母中的表达与纯化: ＜正＞目的组织因子（tissue factor,TF）起始的外源性凝血途径在包括动脉粥样化损伤、败血症、肿瘤、炎症等许多疾病的病理生理过程中起到重要作用,其介导的凝血及血栓形成导致相关疾病恶化甚至患者死亡。组织因子途径抑...; 程旭徐伟杰宋丽萍刘兰霞董霞张海玲朱敦皖冷希岗; 文献传递

人组织因子途径抑制因子在毕赤酵母中高拷贝表达: 2011年; 目的构建高拷贝表达重组人组织因子途径抑制因子的毕赤酵母并对蛋白表达条件进行初步优化，为相关研究奠定基础。方法将PCR扩增得到的TFPIcDNA片段与表达质粒pPIC9K连接构建重组质粒rhTFPI—pPIC9K，采用PCR方法及DNA测序对其进行鉴定。将重组质粒转化酵母细胞GSI15，利用G418抗性实验筛选含有高拷贝TFPIcDNA的毕赤酵母菌株，采用WesternBlot和TFPI检测试剂盒分析重组蛋白表达。通过改变诱导温度、诱导时间及甲醇浓度对重组蛋白表达条件进行初步优化。结果PCR扩增rhTFPI-pPIC9K得到预期的扩增条带（1．2kb），经酶切图谱分析及测序确认成功构建表达质粒rhTFPI—pPIC9K。实时定量PCR结果显示，通过G418筛选获得了含高拷贝基因的酵母细胞，WesternBlot结果显示含基因拷贝数与蛋白表达量呈正相关。通过对表达条件的优化，明显提高了TFPI重组蛋白的表达量，重组TFPI表达量高达（9．95±0．78）mg／L，活性达到（3．91±1．37）U／mL。结论成功构建了高效表达TFPI重组蛋白的毕赤酵母细胞株，为TFPI功能研究及在相关疾病防治中的应用提供了坚实的实验基础。; 程旭徐伟杰宋丽萍刘兰霞董霞张海玲朱敦皖冷希岗; 关键词：组织因子途径抑制因子毕赤酵母

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程旭