穆亚芳
- 作品数：6 被引量：14H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：黑龙江省科技攻关计划国家自然科学基金国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 兔出血症病毒衣壳蛋白VP60与兔肝脏细胞中相互作用蛋白的初步筛选被引量：2
- 2011年
- 为鉴定兔出血症病毒(RHDV)在感染兔肝脏过程中与肝细胞膜表面相互作用的靶蛋白,本研究利用SMART文库构建技术构建了兔肝脏细胞的真核表达cDNA重组质粒文库,将其转染SP2/0细胞,经嘌呤霉素筛选表达兔肝细胞蛋白的阳性SP2/0细胞。以RHDV-VP60蛋白作为固相包被抗原,经筛选,获得能够与VP60蛋白相互结合的表达性阳性SP2/0细胞克隆。测序表明26个克隆与兔的一些功能性蛋白有较高的同源性,其中包括代谢酶类13个、免疫信号通路受体蛋白5个以及其他细胞膜蛋白等。本研究鉴定的与RHDVVP60具有结合性的细胞蛋白为RHDV感染机制的研究奠定了基础。
- 穆亚芳刘家森郭东春李茂中原冬伟姜骞林欢曲连东
- 关键词：兔出血症病毒文库构建
- 与兔出血症病毒VP60蛋白相互作用蛋白的初步鉴定被引量：2
- 2010年
- 为获得与兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白(VP60)相互作用的细胞蛋白,本研究以pMD-VP60重组质粒为模板扩增RHDV的VP60基因,克隆于表达载体pGEX-6p-1中,构建了重组表达质粒pGEX-VP60,并转化大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达GST重组蛋白(rVP60),western blot分析表明该蛋白具有与VP60单克隆抗体(MAb)良好的反应原性。以亲和层析纯化的rVP60进行pull-down实验,从兔的肝脏细胞膜蛋白中获得与VP60相互作用的蛋白,多肽质量指纹图谱分析表明,其相互作用的蛋白为ATP合成酶β亚基,提示该蛋白可能与RHDV的感染相关。
- 熊梅穆亚芳刘家森郭东春原冬伟姜骞林欢曲连东
- 关键词：兔出血症病毒VP60蛋白ATP合成酶
- 兔肝cDNA文库的构建
- 本研究分离纯化3月龄新西兰白兔肝组织总RNA,构建以真核表达载体pGADT7-Rec为载体的酵母cDNA文库,文库容量为2.55×10个转化子/μg质粒,文库滴度为2.7×10cfu/mL,文库插入片段大小约为0.5 k...
- 熊梅穆亚芳刘家森原东伟郭东春姜骞林欢曲连东
- 关键词：肝脏CDNA文库EST
- 兔出血症病毒TP株VP60基因DNA免疫小鼠的实验研究被引量：3
- 2011年
- 为评价兔出血症病毒(RHDV)VP60基因在小鼠体内诱导产生体液免疫和细胞免疫情况,本研究构建了RHDV VP60基因的真核表达质粒pcDNA-VP60,并将其免疫小鼠。利用ELISA方法检测特异性抗体和小鼠外周血细胞因子水平,MTT法和流式细胞术(FACS)检测小鼠外周血T淋巴细胞增殖情况和T淋巴细胞亚群的动态变化。抗体检测结果显示,重组质粒免疫组抗体水平在免疫后5周～6周达到峰值,而且与对照组比较差异显著(p<0.05);细胞因子检测结果显示,重组质粒免疫组血清中IFN-γ、IL-2、IL-4因子水平随免疫时间延长而升高,并且能够维持较高水平,与对照组比较差异显著(p<0.05);T淋巴细胞检测结果显示,重组质粒免疫组T淋巴细胞明显增殖,CD4+T淋巴细胞数量免疫后明显增高,与对照组比较差异显著(p<0.05);所有检测指标显示重组质粒免疫组和灭活苗免疫组比较均无显著差异(p>0.05)。以上结果表明pcDNA-VP60重组质粒可以诱导小鼠产生特异性体液免疫和细胞免疫,为研制预防兔病毒性出血症的候选DNA疫苗提供了实验依据。
- 原冬伟刘家森郭东春司昌德姜骞林欢穆亚芳刘行波曲连东
- 关键词：兔出血症病毒T淋巴细胞DNA疫苗ELISA
- 兔肝组织cDNA文库的构建及表达序列标签分析
- 2010年
- 分离纯化了3月龄新西兰白兔肝组织总RNA,构建了以真核表达质粒pGADT7-Rec为载体的酵母cDNA文库,该文库的库容量为2.55×106转化子/μg质粒,文库的效价为2.7×109CFU/mL,PCR分析结果表明文库插入片段大小为0.5～2.0kb,重组率约为100%。对随机挑选的50个克隆进行的测序结果表明,37个EST片段与日本大耳白兔基因有较高的同源性,11个EST片段与其他种属哺乳动物功能基因有较高的同源性,另有2个EST片段为未知基因。所构建的兔肝组织cDNA文库符合要求,为进一步研究兔肝组织的功能基因奠定了基础。
- 熊梅穆亚芳刘家森原冬伟郭东春姜骞林欢曲连东
- 关键词：CDNA文库表达序列标签
- 兔出血症病毒VP60基因真核表达质粒的构建及初步评价被引量：8
- 2011年
- 利用pMD18-T-VP60质粒(包含RHDV-TP株VP60基因)PCR扩增并酶切回收VP60基因片段,插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建真核表达质粒pcDNA-VP60,对重组质粒进行酶切和PCR鉴定;将重组质粒转染RK13细胞,进行间接免疫荧光和Western-blot检测;将构建好的重组质粒作为核酸疫苗,腿部肌肉注射免疫小鼠,采用间接ELISA法检测抗体水平;采用淋巴细胞增殖试验(MTT法)和流式细胞术(FACS)检测细胞免疫情况;采用PCR方法检测重组质粒在小鼠体内的生物安全性。结果显示,成功构建pcDNA-VP60真核表达质粒,并在RK13细胞中获得表达。重组质粒作为核酸疫苗能够诱导小鼠体内产生特异性抗体而且抗体水平随免疫次数增加而逐渐增高,在免疫后49d时达到峰值;脾淋巴细胞刺激指数和CD4+、CD8+淋巴细胞亚群数量百分率明显增高,且与对照组存在明显差异。经PCR鉴定VP60基因未整合到小鼠主要脏器染色体上。结果表明,构建的pcDNA-VP60真核表达质粒能够诱导小鼠产生较强的体液免疫和细胞免疫应答,重组质粒对小鼠是安全的。
- 原冬伟刘家森郭东春司昌德姜骞林欢穆亚芳刘行波曲连东
- 关键词：核酸疫苗真核表达VP60PCR检测
