赫明雷
- 作品数：20 被引量：53H指数：4
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项公益性行业(农业)科研专项国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 利用Red重组系统敲除大肠杆菌菌株ClpP基因方法的研究被引量：1
- 2011年
- 为了研究ClpP基因的功能,试验利用Red系统的重组功能,通过PCR扩增出两端与大肠杆菌菌株ClpP基因上、下游序列同源,中间为氯霉素抗性基因cat的DNA片段,电击转化含质粒pKD46的大肠杆菌菌株DH091,筛选替换ClpP基因的阳性转化子,再导入质粒pCP20去除氯霉素抗性基因。结果表明:成功敲除大肠杆菌菌株ClpP基因。
- 司微刘慧芳王春来彭玮赫明雷杜艳芬赵海玲王聃杨金国林靖凯倪洪波刘思国
- 关键词：RED重组系统基因敲除
- 胸膜肺炎放线杆菌体内表达基因的筛选被引量：8
- 2008年
- 利用体内诱导抗原技术对胸膜肺炎放线杆菌（APP）体内表达的基因进行了初步筛选。将收集到的5份感染了APP1型的猪血清混合．分别用体外培养的APP1和大肠杆菌BL21（DE3）的全菌及全菌裂解物进行吸附。用ELISA方法检测吸附效果，经吸附后血清D150nm分别由原来的0．927和0．239降低为0．196和0．078。同时,将APP1基因组DNA以Bsp143I进行酶切，回收500～2000bp的片段，与pET30a／b／c载体连接，构建了APP1基因组质粒表达文库，库容量（CFU）为2．0×10^5。用吸附后的血清通过菌落原位免疫杂交筛选该基因组表达文库，从3000个菌落中获得了12个阳性克隆。
- 刘慧芳刘思国王春来司微王聃杜艳芬赵海玲赫明雷
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌
- 大肠杆菌“菌影”的制备被引量：4
- 2009年
- 通过PCR扩增噬菌体PhiX174的裂解基因E,将该基因连接到含有PR/cI启动阻遏系统的pBV220载体中,从而使裂解基因E和启动阻遏系统λPL/PR-cI857串联成为温度敏感的裂解盒,构建溶菌质粒pBV-E。采用CaCl2法将其转入大肠杆菌BL21(DE3),含有裂解质粒的大肠杆菌在28℃条件下生长到对数生长期,然后升温到42℃诱导其溶解,制成了大肠杆菌菌影。电镜观察发现菌影形态完整,内容物全部被释放到胞外。
- 彭玮王聃刘思国常月红王春来刘慧芳司薇赫明雷杜艳芬
- 关键词：大肠杆菌
- 牛分枝杆菌细胞壁相关蛋白表达及免疫原性分析
- 牛结核病是由牛分枝杆菌引起的严重危害奶牛业的人畜共患病,可以通过吸入含菌气溶胶或食用受污染的乳制品而从牛传染到人,对人类的健康也造成了威胁.传统的BCG苗保护力低,因此研究更加特异准确的结核病新型诊断方法并加快新型疫苗的...
- 亓英芳杜艳芬刘慧芳赫明雷司微倪洪波王春来刘思国
- 关键词：牛分枝杆菌OMPAWESTERN-BLOT免疫原性
- 文献传递
- 哈尔滨市鲜肉中单核细胞增生性李斯特菌的分离鉴定及耐药性分析被引量：4
- 2009年
- 为了解哈尔滨市单核细胞增生性李斯特菌(Lm)的污染状况及耐药状况。在哈尔滨市市场随机采集158份鲜肉样品,采用显色培养基分离,API试剂条和PCR鉴定等方法对样品中的Lm进行分离鉴定,并通过Kirby-Barer法测定分离菌株对24种抗生素的耐药性。结果从鲜肉中共分离到Lm23株,检出率为14.56%,其中鲜猪肉检出率最高,达20.00%(14/70);23株分离菌株中耐药菌株为22株,耐药率高达95.65%。这表明哈尔滨市鲜肉中存在一定程度的Lm污染,并且分离菌株存在较严重的耐药现象。应加强控制动物饲料亚治疗抗生素的使用并严格遵守休药期,防止耐药菌株产生进而控制食源性疾病的发生。
- 尹录杜艳芬赫明雷司微刘慧芳王春来彭玮王聃李继昌邵美丽刘思国
- 关键词：鲜肉单核细胞增生性李斯特菌耐药性
- 禽致病性大肠杆菌生物被膜的形成及其影响因素被引量：17
- 2010年
- 为确定影响细菌生物被膜(BF)的形成条件,本研究采用BF体外定性观察和定量粘附性检测两种方法对1株野生禽致病性大肠杆菌(E.coli)在不同环境(培养时间、培养基类型、引导载体类型、营养条件)下产生BF的差异进行了研究。结果显示野生禽致病性E.coli其宿主体外BF最适形成条件是培养时间为48h,培养基为5%TSB、引导载体为平底96孔聚苯乙烯微孔板(美国Corning Costar)。其生长周期为8h时开始起始粘附、24h形成若干微菌落、36h微菌落粘连、48h形成完整的BF、72h细菌脱落开始下一轮的BF生长。糖分和适量的无机盐都可以在一定程度上促进BF的形成和被膜内细菌的粘附性提高。该研究表明禽致病性E.coliBF的形成周期,并为抑制其形成提供了实验依据。
- 欧阳凤菊李兆利赫明雷刘慧芳司微刘思国王春来倪洪波王宇曲娟娟
- 关键词：禽致病性大肠杆菌生物被膜
- 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌“菌影”的制备被引量：11
- 2008年
- 本试验通过PCR扩增噬菌体PhiX174的裂解基因E,将该基因连接到含有λPL/PR-cI857启动阻遏系统的pBV220载体中,从而使裂解基因E和启动阻遏系统λPL/PR-cI857串联成为温度敏感的裂解盒,构建重组质粒pBV-E。再将含有E基因的裂解盒插入到App-E.coli穿梭载体pGZRS-18中,构建胸膜肺炎放线杆菌打孔质粒。采用电击穿孔法将其转入胸膜肺炎放线杆菌中,含有打孔质粒的胸膜肺炎放线杆菌在28℃条件下生长到对数生长期,升温42℃诱导E基因的表达,制备了胸膜肺炎放线杆菌菌影。电镜观察菌影形态完整,内容物全部被释放到胞外。本试验为进一步研究菌影这一新型菌苗及佐剂奠定了基础。
- 常月红刘思国王春来刘慧芳司薇彭玮王聃赫明雷杜艳芬
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌
- 信号标签诱导技术的研究进展被引量：4
- 2008年
- Signature-tagged mutagenesis(STM)信号标签突变技术是一种有效的负向选择方法,主要用来鉴定能使病原体在宿主体内成功存活和复制的决定性基因。问世十几年以来,STM技术已经应用于31种细菌中,筛选了大量的转座插入突变体,有大约1700多种细菌的基因得到认识和鉴定,包括毒力因子。由于在信号标签和鉴定方法的改进,使得STM技术有了很大发展,增加其多样性和灵活性,扩大了其应用范围。本文就STM技术中关键步骤的改进进行综述。
- 赫明雷刘思国
- 利用体内诱导抗原技术检测胸膜肺炎放线杆菌体内表达基因
- 本研究利用体内诱导抗原技术(IVIAT)对胸膜肺炎放线杆菌(APP)体内表达的基因进行了研究。.将收集到的5份感染了APP1的猪血清混合,分别吸附体外培养的APP1和大肠杆菌DE3的全菌及全菌
- 刘慧芳刘思国王春来司微王聃杜艳芬赫明雷常月红
- 文献传递
- 牛分枝杆菌外膜蛋白基因ompA的原核表达及免疫活性分析被引量：1
- 2009年
- 为验证牛分枝杆菌外膜蛋白A是否具有免疫活性,以牛分枝杆菌ValleeⅢ株基因组DNA为模板扩增牛分枝杆菌外膜蛋白基因ompA,采用DNA重组技术将此基因片段连于表达载体pGEX6p-1,构建重组质粒pGEX6p-1-ompA,并将其转化到大肠杆菌中BL21(DE3)中,IPTG诱导(终浓度为0.1mmol/L),表达产物进行SDS-PAGE分析。用glutathione sepharose4B纯化蛋白和Western blot分析该蛋白的免疫学活性。结果表明:pGEX6p-1-ompA以可溶形式表达,蛋白分子量大小为60kDa,与预计大小相符,纯化的蛋白具有良好的免疫学活性。
- 亓英芳黄瑛杜艳芬刘慧芳赫明雷司微倪洪波王春来刘思国
- 关键词：牛分枝杆菌原核表达纯化WESTERNBLOT
