【目的】探明地方鸡种与引进鸡种遗传多态性特点,探讨COⅠ这一特定基因的特定区段作为DNA条形码在识别鸡种方面的可行性和有效性。【方法】以13个中国地方鸡种和2个国外引进品种为研究对象,利用DNA测序技术测定了线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(cytochrome c oxidaseⅠ,COⅠ)基因部分序列。【结果】选择的这段COⅠ基因序列有38个突变位点,15个鸡种单倍型多样度平均为0.963,核苷酸多样度平均为0.00518,其中引进鸡种明显低于地方鸡种(除藏鸡外);15个鸡种品种间Kimura双参数遗传距离为0.056%—0.917%,种内遗传距离为0—0.346%,15个鸡种的DNA分类和形态学分类基本一致,引进鸡种与地方鸡种分歧较远。【结论】利用线粒体细胞色素C氧化酶Ⅰ(COⅠ)这一特定基因的特定区段来做DNA条形编码的基础,进行不同鸡品种鉴定,具有可行性和有效性。
建立高分辨熔解曲线技术同时快速检测鸡肉中沙门氏菌、单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌和空肠弯曲菌。本研究分别以上述4种菌的fimY、hly、nuc和orfC特异性基因为靶基因,建立能同时检测多种食源性致病菌的多重HRM-real time PCR检测体系,并对反应的特异性、灵敏度、重复性以及在人工染菌样品进行了评价。所建立的HRM-real time PCR检测体系对沙门氏菌、单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌和空肠弯曲菌均产生特异性熔解曲线,Tm值分别为82.2℃、78.2℃、75.5℃和73.5℃;多重HRM-real time PCR反应体系检测单一致病菌菌液的灵敏度均为102拷贝数/mL,检测多种致病菌菌液的灵敏度为102拷贝数/mL;该反应体系重复性的试验内CV值在0.03%~0.32%之间,试验间CV值在0.45%~2.12%;人工染菌样本对4种菌的检测限均能达到5 CFU/25 g。结果表明该多重HRM-real time PCR检测体系可对上述4种禽肉中常见致病菌进行有效的检测与区分,特异性强,灵敏度高,反应重复性好,有望在食源性致病菌检测分析中发挥作用。
