陈清霞
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
- 供职机构：福建师范大学更多>>
- 发文基金：福建省教育厅资助项目福建省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 卷枝毛霉孢子原生质体的制备与再生被引量：3
- 2011年
- 为了构建高产γ-亚麻酸的卷枝毛霉稳定遗传转化体系,利用酶解法对卷枝毛霉(Mucor circinelloides sp.)EIM-10的孢子进行原生质体制备。研究酶液组成、渗透压稳定剂、酶解温度、酶解时间等对卷枝毛霉孢子原生质体形成和再生的影响,建立了制备卷枝毛霉孢子原生质体的最适条件:1%纤维素酶和2%溶壁酶为酶解体系,0.5mol/L NaCl作为渗透压稳定剂,酶解温度32℃,酶解时间2.5 h,再生培养基为0.5 mol/L NaCl高渗培养基。用双层平板培养法进行原生质体再生,在此条件下原生质体的形成量为1.2×106个/mL,再生率为70.5%。
- 陈清霞江贤章刘锦清宋芬芬黄建忠
- 关键词：Γ-亚麻酸原生质体孢子
- 卷枝毛霉△6-脂肪酸脱饱和酶基因的敲除及功能研究
- 2017年
- γ-亚麻酸(γ-Linolenic acid,GLA)是人体所必需且具有多种生理功能的一种重要多不饱和脂肪酸。研究表明,卷枝毛霉等GLA生产菌株中△6-脂肪酸脱饱和酶(△6-Fatty acid desaturase,FAD6)是合成γ-亚麻酸的关键和限速酶,然而GLA是否惟一通过△6-脂肪酸脱饱和酶途径合成则目前还没有报道。作者以卷枝毛霉Mucor circinelloides EIM10 sp.为研究对象,以其FAD6基因的5'端启动子和3'端终止子为同源臂,潮霉素B抗性基因为筛选标记,构建了M.circinelloides EIM10 sp.△6-脂肪酸脱饱和酶FAD6的敲除载体p UMCD6-Hm B,转化进入制备好的原生质体中成功地敲除了FAD6基因,发现FAD6基因缺陷菌株GLA质量浓度比野生型对照菌株降低了50%以上,但GLA并没有完全消失,说明卷枝毛霉生物体内还有其他代谢途径可以将碳源转化为GLA。
- 何文胜陈清霞邹丽梅曹晓祁峰
- 关键词：Γ-亚麻酸基因敲除
- 一种快速提取裂殖壶菌基因组DNA的方法
- 2011年
- 研究建立快速有效提取裂殖壶菌基因组DNA的方法。以裂殖壶菌Schizochytrium sp.FJU-512为试验材料,比较了十六烷基三乙基溴化铵(cetyltriethylammnonium bromide,CTAB)法、十二烷基硫酸钠(Sodium dodecyl sulfate,SDS)法、SDS快速法和裂解法4种DNA提取方法在裂殖壶菌中的提取效果。4种方法均能从裂殖壶菌中提取到长度大约为23Kb的DNA片段,不同的提取方法获得的DNA产量存在明显差异。运用真菌18S rDNA通用引物和β-酮脂-酰基ACP合酶(beta-ketoacyl[ACP]synthase,KS)引物分别PCR扩增均能得到目的片段。结论:CTAB法提取DNA的效率更高、操作步骤快速简单,适用于一次微量提取多个样品的基因组DNA。
- 刘锦清陈清霞江贤章
- 关键词：裂殖壶菌基因组DNA
- 毛霉△^6-脂肪酸脱氢酶随机突变文库的构建与分析被引量：1
- 2011年
- 毛霉Mucor sp.EIM-10△6-脂肪酸脱氢酶是γ-亚麻酸合成途径的关键酶。为提高脂肪酸脱氢酶的活性以及研究该酶一级结构对酶活性的影响,利用易错PCR对毛霉△6-脂肪酸脱氢酶基因(mcd6)进行随机突变,将PCR产物与大肠杆菌-酿酒酵母穿梭表达载体PYMD6PMCD6连接,获得随机突变质粒PYTBMCD6,转化酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae,构建了原始库容为4.6×104 CFU的△6-脂肪酸脱氢酶的随机突变表达文库。随机突变表达文库的构建与分析为定点突变等酶蛋白的理性设计奠定基础。
- 宋芬芬江贤章陈清霞黄建忠
- 关键词：易错PCR随机突变毛霉Γ-亚麻酸
