魏广智
- 作品数：16 被引量：14H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院野战输血研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划全军“十五”指令性课题更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 丙酮酸钠对失血性休克大鼠缺血/再灌注损伤的保护作用被引量：6
- 2007年
- 目的:研究丙酮酸钠对失血性休克后缺血/再灌注损伤的保护作用。方法:制作失血性休克大鼠模型,回输全血,同时分别给予生理盐水、谷胱甘肽和丙酮酸钠适量,于再灌注后3h处死动物。检测血浆乳酸脱氢酶(LDH)和谷草转氨酶(GOT)的活性、组织丙二醛(MDA)的含量和髓过氧化物酶(MPO)的活性,观察心、肝、肺和肾组织的病理变化。结果:丙酮酸钠组与生理盐水组相比,血浆LDH和GOT的活性降低,肝、肺和肾组织MDA的含量下降,心、肺和肾组织MPO活性降低,效果优于谷胱甘肽。心、肝、肺和肾组织形态学观察显示,丙酮酸钠使组织损伤减轻。结论:丙酮酸钠对失血性休克后再灌注损伤具有保护作用。其作用机制可能与清除氧自由基、减少中性粒细胞的浸润、减轻炎性反应有关。
- 管利东王字玲赵莲王波王广义魏广智周虹
- 关键词：失血性休克
- 基于CFSE染色的小鼠淋巴细胞体内示踪方法的建立被引量：3
- 2011年
- 目的确定CFSE标记小鼠淋巴细胞的条件,建立简单快速、稳定可行的淋巴细胞体内示踪方法。方法利用流式细胞术分别检测不同浓度CFSE、不同悬浮溶液(1640培养基、PBS溶液)对小鼠淋巴细胞标记效果的影响,确定合适的标记条件;输注同品系CFSE标记的小鼠淋巴细胞,于不同时间点检测受鼠主要脏器内CFSE+细胞在淋巴细胞中的比例,并确定供鼠细胞的注射剂量;按照合适的注射剂量分别在注射后不同时间点测定供鼠细胞在受鼠体内的分布,考察本方法的稳定性及阳性信号的持续时间。结果 PBS组CFSE+细胞平均荧光强度分别为596、793、1123、1596、1737,明显高于1640培养基组(P<0.05);1640培养基组CFSE+细胞死亡率分别为8.7%、8.4%、8.6%、9.0%(P>0.05),而PBS组CFSE+细胞死亡率随着CFSE终浓度的上升而增加(P<0.05);按照不同剂量输注同品系淋巴细胞24h后,在受鼠各组织中检测到CFSE+细胞;每只小鼠尾静脉注射5×106个CFSE+淋巴细胞后,到d63仍可在组织中检测到阳性信号细胞。结论以PBS作为孵育液、CFSE终浓度选择10μmol/L对小鼠淋巴细胞标记、注射剂量为细胞5×106个/只,可使CFSE+细胞信号在同系小鼠体内持续2个月。
- 汤永永唐颖张玉华段文元赵敬湘魏广智张秀媛李鹏飞穆思媛王字玲
- 关键词：CFSE淋巴细胞流式细胞术细胞标记
- MMP-2-PEX原核表达纯化及其对黑色素瘤细胞与内皮细胞黏附的影响
- 2010年
- 目的探讨原核表达的人源基质金属蛋白酶2的C端结构域(MMP-2-PEX)对黑色素瘤细胞A375与内皮细胞黏附的影响。方法利用RT-PCR方法从人成纤维肉瘤细胞HT1080中克隆MMP-2 C端结构域,构建原核表达载体pET-His-PEX;转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达;盐酸胍裂解包涵体,经镍琼脂糖凝胶柱纯化,透析复性后获得MMP-2-PEX蛋白,随后对其进行Western印迹和质谱鉴定。采用明胶酶谱法检测MMP-2-PEX的活性;采用平行板流动小室系统检测在流动状态下MMP-2-PEX对A375细胞与脐静脉内皮细胞HUVEC黏附的影响,通过小鼠实验性肺转移模型检测MMP-2-PEX对A375细胞在小鼠肺内癌栓形成的影响。结果 Western印迹和质谱鉴定原核表达的MMP-2-PEX蛋白正确,明胶酶谱检测MMP-2-PEX能够明显抑制MMP-2的活性。表达的MMP-2-PEX蛋白能够在流动状态下抑制A375细胞与HUVEC细胞的黏附,其黏附抑制率与MMP-2-PEX蛋白浓度增加成正相关,MMP-2-PEX浓度为12.5,25和50μg/ml时抑制率分别为32.5%,41.4%和53.9%。用MMP-2-PEX处理后,A375细胞在小鼠肺内癌栓的形成与对照组相比降低了26.4%。结论原核表达的人MMP-2-PEX在体外流动状态下可抑制A375细胞与内皮细胞的黏附,并抑制A375细胞在小鼠肺内癌栓的形成。
- 宋直钰赵敬湘魏广智张磊汤永永王字玲
- 关键词：基质金属蛋白酶2黑色素瘤细胞黏附内皮细胞
- 淋巴细胞输注体内示踪方法研究
- 目的确定小鼠淋巴细胞CFSE标记条件、输注剂量及体内分布研究的方法。方法利用流式细胞术分别检测1640培养基与PBS溶液作为孵育液对不同浓度CFSE标记小鼠淋巴细胞的效率、荧光强度、标记后细胞存活的影响,确定合适的孵育液...
- 汤永永段文元赵敬湘魏广智王宇玲
- 淋巴细胞输注体内示踪方法研究
- 2010年
- 汤永永段文元赵敬湘魏广智王字玲
- 关键词：细胞输注示踪CFSE小鼠淋巴细胞荧光强度
- 5-Fu对A549细胞NKG2D配体MICA/B启动子活性的作用
- 2009年
- 目的:克隆A549细胞NKG2D配体MICA/B的启动子,分析其活性,并研究5-Fu对MICA/B启动子活性的调节作用。方法:PCR方法扩增人MICA/B的启动子及其5个截短体基因,用双荧光报告基因系统进行启动子活性分析,并测定不同浓度5-Fu处理对启动子活性的影响。结果与结论:克隆了人MICA启动子(-455/+4)、MICB启动子(-470/+40)及其5个截短体基因,MICA的相对活性分别为:3.61,2.26,1.63,0.313,0.711,0.663;MICB的相对活性分别为:17.49,10.11,7.398,0.822,0.997,0.49。用20,40,80,160,320μg/ml的5-Fu处理A549细胞8h后,MICA启动子活性分别是未处理的1.69,1.48,1.62,1.55,1.78倍,MICB启动子活性分别是未处理的1.44,1.87,1.38,1.19,1.25倍。表明不同浓度5-Fu处理A549细胞后MICA/B启动子相对活性上升。
- 罗丹赵敬湘魏广智张妍王字玲
- 关键词：启动子活性5-FU
- 5-氟尿嘧啶增强HeLa细胞对自然杀伤细胞敏感性研究
- 2009年
- 目的用5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil，5-FU）处理HeLa细胞，检测其NKG2D配体MICA的表达及其对NK92细胞杀伤敏感性的变化。方法不同浓度的5-Fu处理HeLa细胞，在不同时间点用半定量PCR及流式细胞术检测HeLa细胞表面的NKG2D配体MICA在RNA及蛋白水平的表达变化情况，用MTT法检测NKG2D抗体封闭NK92细胞的NKG2D受体前后，NK92细胞对HeLa细胞的杀伤作用。结果不同浓度的5．Fu作用于HeLa细胞后，半定量RT—PCR结果显示MICA表达随5-Fu作用浓度增加逐渐增高。而且40μg／ml5．Fu作用于HeLa细胞后随着作用时间的延长（0、8、16、24h）MICA表达增加，流式细胞术检测结果表明，MICA表达的增加主要依赖于未凋亡细胞的MICA表达。在40μg／ml5-FU作用24h，效靶比为2．5：1，5：1，10：1，20：1时都检测到NK92细胞对HeLa细胞的杀伤增强，杀伤作用可部分被NKG2D抗体抑制。结论5-FU能够上调HeLa细胞表面NKG2D配体MICA的表达，增强HeLa细胞对NK92细胞的敏感性，提示化疗联合NK细胞免疫治疗宫颈癌可产生协同作用，提高治疗效果。
- 张妍魏广智赵敬湘罗丹王字玲
- 关键词：5-氟尿嘧啶NKG2D配体HELA细胞
- 血小板糖蛋白GPIbavWF结合域在酵母中的表达鉴定
- 目的:实现重组糖蛋白GPIbαvWF结合域在毕赤酵母中的表达。方法:PCR从重组质粒pcDNA3.1-GPIbα中扩增GPIbαvWF结合域基因,以pPIC9k为表达载体,构建包含该目的基因的酵母重组质粒,转染毕赤酵母G...
- 王波苏丽张玉华魏广智王广义王字玲
- 关键词：毕赤酵母表达
- 文献传递
- 肿瘤患者血小板计数及聚集能力检测
- 2009年
- 目的研究恶性肿瘤患者化疗前后的血小板计数和聚集性变化特点。方法空腹抽取98名肿瘤患者和48名正常人静脉血,肝素抗凝后,测定Plt;并以ADP为激活剂体外测定ADP诱导的血小板最大聚集率。结果72.4%的肿瘤患者化疗前、56.2%正常人Plt>200×109/L。患者经过化疗后血小板数减少,>200×109/L的比例降为30.6%。化疗后肿瘤患者血小板最大聚集率为(70.87±8.60)%,正常人为(66.06±8.61)%,两者相比差异有统计学意义(t=2.11,P<0.05)。结论肿瘤患者的Plt较正常人高,虽然经过化疗Plt减少,但聚集性仍较正常人高。
- 赵敬湘李方魏广智鞠艳芳刘哲峰王全立王字玲
- 关键词：肿瘤血小板血小板最大聚集率血小板计数
- NK细胞NKG2D配体MICA/B、ULBP1—4的克隆表达和多克隆抗体的制备
- 目的:在大肠杆菌中表达 NKG2D 配体(NKG2D-L)MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3、 ULBP4,并制备多克隆抗体。方法:从 NCBI 数据库中获取6个 NKG2D-L 的基因与蛋白序列,通...
- 赵敬湘魏广智罗丹张妍王字玲
- 文献传递
