鱼轲
- 作品数：13 被引量：39H指数：4
- 供职机构：兰州生物制品研究所有限责任公司更多>>
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- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 牛源材料中BVDV检测方法的验证及应用被引量：2
- 2016年
- 目的对生物制品生产过程中使用的牛源材料(牛血清、牛源细胞等)进行牛病毒性腹泻病毒(BVDV)检测以保证制品的生物安全性。方法参照制药质量体系Q10(ICH Q10)对杂质的定性检测要求,采用一步法RT-PCR检测BVDV的5'-UTR保守区,并对其特异性、敏感性和重复性进行验证,然后将其应用于牛源材料中BVDV的检测。结果扩增产物为250 bp的目的片段,测序后经序列比对分析软件BLAST比对,同源性达99%,且与其他5种牛源病毒均无相关性;敏感度达1CCID50/m L。应用该方法对牛血清、牛鼻甲骨细胞(BT)、牛肾原代细胞、MDBK细胞等样品进行检测,15份为阳性,阳性检出率为12%。结论一步法RT-PCR检测BVDV,特异性强、重复性好、敏感性高,可用于牛源材料中BVDV的快速检测。
- 郭敏鱼轲刘军刘艳魏至栋
- 关键词：生物制品牛病毒性腹泻病毒一步法RT-PCR
- 不同代次牛肾原代细胞培养轮状病毒的比较研究被引量：14
- 2007年
- 口服轮状病毒活疫苗(LLR株)生产用细胞基质为新生小牛肾原代细胞.原始的初代细胞(P0)产量小,一对牛肾平均生产7瓶细胞.将原始的初代细胞传代可使细胞产量显著增加,传代后(P2代)细胞产量可由7瓶增加为96～112瓶,细胞核型检查传至P5代的细胞染色体数目与初代细胞一致.细胞培养物均一性提高.P0代与P2代细胞病毒培养物滴度分别在6.2±1.5和6.5±0.51gCCID50/ml,使用P2代细胞培养病毒,产量增加10～15倍.提高了疫苗生产的可控性和质量,生产规模显著放大,经济效益明显.
- 鱼轲魏至栋庞兴刘晓凡刘溯谢澎王玉琳
- 关键词：传代培养轮状病毒疫苗
- 口服轮状病毒活疫苗病毒感染滴度测定的影响因素被引量：1
- 2007年
- [目的]对影响轮状病毒活疫苗病毒滴度测定的因素进行研究。[方法]用细胞微量病变滴定法(CCID50)结合酶联免疫吸附试验(ELISA)[1]检测口服轮状病毒活疫苗病毒感染滴度。[结果]在疫苗滴度检测中处理疫苗所用的胰酶量,胰酶37℃处理疫苗时间,及感染细胞培养收冻时间均对疫苗的感染滴度产生影响。病毒滴度均随着胰酶量、温度和培养时间的增加均有先增高后降低的现象(P﹤0.001),用15￣20μg/ml胰酶、37℃处理疫苗50￣60 min,4￣5 d收冻为较佳试验条件。[结论]胰酶量、温度和培养时间对口服轮状病毒活疫苗病毒感染滴度的测定结果均有不同程度的影响,在检测中要选择合适的条件,使检测结果更具有真实性,实际工作中采用20μg/ml胰酶、37℃处理疫苗50 min、收冻时间为5 d的组合条件进行试验。
- 崔焰孙晓琳鱼轲侯玲高雪军吕雯楣刘晓华
- 关键词：轮状病毒病毒滴度减毒活疫苗病毒感染
- 新生牛血清促牛肾细胞生长试验测定方法的建立被引量：5
- 2010年
- 为了建立一种测定新生牛血清促牛肾细胞生长试验的方法,采用测定新生牛血清对原代牛肾细胞培养增殖的克隆率来评价新生牛血清的质量。结果显示,用克隆率大于25%的新生牛血清培养原代牛肾细胞至7～8d时均能形成良好单层,而克隆率小于25%的新生牛血清培养原代牛肾细胞时形成良好单层的时间将延长。由此可得出:对原代牛肾细胞培养增殖的克隆率大于25%的新生牛血清符合口服轮状病毒活疫苗生产的需要,依此结果可进行新生牛血清的筛选。
- 刘学平魏至栋谢澎马彦强鱼轲
- 轮状病毒LLR株VP7抗原表位的预测与验证被引量：1
- 2011年
- 在GenBank中检索A组轮状病毒不同血清型的VP7基因信息,在氨基酸水平上与G10血清型LLR株的VP7序列进行序列对比,分析其血清型特异的氨基酸保守序列位点。结合蛋白质二级结构预测理论方案,设计合成3条具有轮状病毒G10血清型特异性氨基酸序列的多肽。通过检测合成肽对轮状病毒免疫血清与LLR抗原的结合抑制,证实三条多肽均具备了LLR表位属性。
- 鱼轲魏至栋蒋琳
- 关键词：轮状病毒抗原表位
- 抗轮状病毒LLR株G10血清型特异性单克隆抗体的制备与鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的制备抗轮状病毒(RV)LLR株G10血清型特异性单克隆抗体,并鉴定其特性。方法以纯化的RVLLR株(血清型为G10)为抗原免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤细胞技术筛选分泌G10血清型特异性单抗的杂交瘤细胞株。采用层析法纯化单抗,常规免疫学方法鉴定单抗的特性。结果经筛选获得5G5、1H1和7F6共3株可稳定分泌高效价且具有G10血清型特异性单抗的杂交瘤细胞株。3株细胞分泌的单抗分别为IgG2a/κ、IgG2a/κ和IgG1/κ型;腹水效价均可达1.024×106;分别识别两个抗原位点;相对亲和力依次为1H1﹥7F6﹥5G5;5G5和1H1(细胞上清)均与G1～G4和G6血清型RV抗原无交叉反应;3株杂交瘤细胞分泌的单抗均识别相对分子质量约为34000的VP7蛋白,且均有不同程度的中和活性。结论已成功制备了抗RVLLR株G10血清型特异性单抗,该单抗可用于G10血清型RV的分型检测或LLR毒株的鉴别。
- 鱼轲魏至栋李萍蒋琳
- 关键词：轮状病毒单克隆抗体中和活性
- 抗轮状病毒G10血清型(LLR株)特异性单克隆抗体的制备与鉴定
- 目的：羊轮状病毒LLR株，血清型为G10P[12]，是兰州生物制品研究所研发的单价口服轮状病毒活疫苗。疫苗生产及制造规程中规定疫苗毒种的血清型检测的方法有：核酸探针杂交、中和试验或ELJSA分型法，其中基于型单抗的免疫学...
- 鱼轲魏至栋李萍蒋琳
- 关键词：轮状病毒单克隆抗体中和活性免疫学检测
- 文献传递
- 牛肾细胞基质牛源病毒的控制和检测被引量：4
- 2012年
- 目的:检测和控制牛肾细胞基质中可能存在的外源病毒,提高细胞基质的安全性,保证轮状病毒疫苗的质量。方法:用ELISA法检测牛肾供体新生小牛血清中的病毒抗体。用细胞培养法检测供体血清和牛肾细胞中的外源病毒,免疫荧光抗体法检测供体血清和牛肾细胞中的特殊牛源病毒。结果:81份禁食禁水的新生小牛血样7种病原抗体检测均为阴性;血吸附病毒检测均为阴性,直接免疫荧光检出1例BVDV阳性。65份牛肾细胞特殊牛源病毒检测均为阴性。结论:通过对牛肾供体小牛进行病原筛选可有效降低牛肾细胞携带外源病毒的风险,也是提高疫苗安全性行之有效的策略。
- 魏至栋鱼轲刘艳郭敏谢澎庞兴
- 关键词：外源病毒
- 鼠抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体的制备及鉴定被引量：5
- 2008年
- 目的制备高中和活性的鼠抗肿瘤坏死因子-α(TNF-α)单克隆抗体,并进行鉴定。方法用重组TNF-α免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗TNF-α单抗,纯化后,用间接ELISA法和微量细胞病变MTT法检测抗体效价,ELISA相加试验测定抗原表位,硫氰酸铵洗脱法测定单抗的相对亲和力指数,并进行类及亚类、细胞染色体核型、特异性及稳定性检测。结果筛选出7株分泌抗TNF单克隆抗体的细胞株,其中6株具有较高的中和活性和良好的稳定性,其细胞上清及腹水的中和效价分别为1∶40～1∶160和(1～3)×10-4,7株单抗均为IgG类IgG1亚类,轻链类型均为κ,细胞核型分析符合杂交瘤细胞特征,特异性良好,5H10株与其余6株有不同的抗原表位,相对亲和力指数为0.4～1.5mol/L。结论已成功制备具有高中和活性的鼠抗TNF-α单克隆抗体,为抗人TNF-α嵌合抗体的构建奠定了基础。
- 李萍蒋琳马亚茹鱼轲郭敏陆俭
- 关键词：肿瘤坏死因子-Α单克隆抗体中和活性
- 牛肾细胞传代稳定性研究被引量：2
- 2010年
- 为了掌握牛肾细胞在体外连续传代过程中的增殖特点,将原代牛肾细胞培养形成良好单层后,按4×104个细胞/cm2连续进行传代,测定毎代次收获的细胞数,并记录每代细胞培养时形成良好单层的时间。结果显示,原代牛肾细胞传代至24代时,培养96h仍能形成良好单层,且细胞形态基本保持一致,遗传物质稳定,为建立牛肾细胞库奠定了基础。
- 刘学平魏至栋鱼轲谢澎
- 关键词：传代稳定性
