侯续伟
- 作品数：10 被引量：33H指数：4
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- hTERT基因片段真核表达质粒载体的构建
- 2010年
- 目的构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)片段的基因表达载体,为人们建立永生化的细胞系提供材料,为临床细胞移植的实验研究和疾病治疗奠定实验基础。方法根据hTERT全长cDNA序列设计引物进行PCR扩增,扩增用的模板是人胎脑cDNA文库,PCR扩增产物与pGEM-T载体连接后进行测序鉴定。结果 PCR扩增及限制性酶切法证实重组真核表达质粒的构建成功。产物测序表明,hTERT基因片段与GenBank公布的相应基因同源性比较,核苷酸序列的同源性为98.87%,氨基酸序列的同源性为99.67%。结论成功构建了hTERT真核表达质粒。
- 王萍侯续伟尹波任甫
- 关键词：人端粒酶逆转录酶基因转染永生化
- 胰岛细胞移植治疗糖尿病的研究进展
- 2007年
- 侯续伟任甫
- 关键词：胰岛素治疗细胞移植治疗胰岛细胞移植胰岛素分泌细胞代谢性疾病
- 利用生物电阻抗法分析西藏藏族成人肌肉特点
- ＜正＞利用生物电阻抗法测量西藏藏族成人身体各部肌肉含量,从而探讨西藏藏族成人肌肉发育特点。在知情同意情况下,整群随机抽取西藏藏族健康成人作为研究对象,共选取893人（男446,女447）,应用身体成分分析仪（MC-180...
- 李文慧席焕久侯续伟黄丽张健华王鹏
- 文献传递
- 烧骨DNA提取与检测技术的实验研究被引量：5
- 2012年
- 目的探索烧骨DNA提取与检测方法。方法常压下以200℃分别对30例成人股骨焚烧1h后,生物冷冻研磨,EDTA脱钙,改良酚-氯仿提取DNA,光度计检测DNA浓度和纯度;5色荧光标记,PCR复合扩增,基因分析仪毛细管电泳,软件收集数据和分析。结果改良酚-氯仿法提取烧骨DNA浓度为(28.5±1.7)ng/μl,16个基因位点基本齐全,相对荧光单位(RFU)>500;传统酚-氯仿法提取烧骨DNA浓度为(4.7±0.8)ng/μl,基因位点检出不全,RFU<500。结论改良酚-氯仿法、PCR复合扩增、基因分析能对烧骨DNA进行有效提取和检测,但操作时要严格规程。
- 徐国昌侯续伟任甫刘海东
- 关键词：DNA检验复合扩增
- 利用生物电阻抗法分析西藏藏族成人脂肪分布特点
- ＜正＞利用生物电阻抗法测量西藏藏族成人身体各部脂肪含量,从而探讨西藏藏族成人脂肪分布的特点。在知情同意情况下,整群随机抽取西藏藏族健康成人作为研究对象,共选取893人（男446,女447）,应用身体成分分析仪（MC-18...
- 李文慧席焕久侯续伟黄丽张健华王鹏
- 文献传递
- SD大鼠胰岛的分离纯化及培养被引量：6
- 2011年
- 目的探讨分离纯化大鼠胰岛素分泌细胞的方法,并评价细胞的生物学特性。方法选用3～4周龄健康成年SD大鼠,常规外科手术显露SD大鼠胰腺和胆总管,在胆总管内插入4.5～5号头皮针后固定,逆行注入预冷的0.5mg/ml的胶原酶V溶液8～10ml,使胰腺膨胀后迅速取出胰腺放入6mlHanks液中38℃消化10min,用含10%胎牛血清的Hanks液终止消化,60目筛网过滤后用Ficoll400非连续梯度离心纯化胰岛。纯化后的细胞用DTZ染色和胰岛素释放试验来分析胰岛素的分泌情况。结果 DTZ染色后β细胞胞浆着色,为均一的猩红色。胰岛细胞分布于Ficoll400浓度为23%～20%和20%～11%的界面之间,纯度高达90%,并且细胞的胰岛素分泌情况良好。结论胶原酶V消化,Ficoll400纯化是一种简单高效的胰岛素分泌细胞分离纯化的方法,可以获取数量多,活性和纯度好的胰岛素分泌细胞。
- 侯续伟尹波任甫
- 关键词：Β细胞胰岛素SD大鼠
- 永生化端粒酶转染大鼠胰岛素分泌细胞的研究
- 原代培养经 V 型胶原酶消化和 Ficoll400纯化液非连续梯度分离纯化的8～10周龄的健康成年 SD 大鼠的胰岛素分泌细胞,通过对该细胞进行 DTZ(双硫腙)染色和高效液相色谱分离(HPLC)的方法,对分离得到的胰岛...
- 任甫侯续伟鲁亚成
- 文献传递
- 端粒酶转染大鼠胰岛素分泌细胞建立的永生化细胞系被引量：3
- 2009年
- 背景:在前期DNA重组技术构建端粒酶反转录酶基因真核表达的质粒、端粒酶反转录酶基因基因转染大鼠胰岛素分泌细胞的基础上,得到永生化的胰岛素分泌细胞系,建立了稳定一致的细胞模型。目的:端粒酶转染健康成年SD大鼠的胰岛素分泌细胞,建立均一稳定的胰岛素分泌细胞系,为临床胰岛素分泌细胞移植治疗糖尿病奠定实验基础。设计、时间及单位:动物实验观察,2007-02/05在辽宁医学院人类学研究所完成。材料:健康成年SD大鼠20只,取其胰岛细胞的分离、纯化、培养及鉴定。方法:原代培养健康成年SD大鼠的胰岛素分泌细胞,采用Ⅴ型胶原酶消化和Ficoll400纯化液纯化。经双硫腙染色和高效液相色谱分离及质谱分析的方法对分离得到的胰岛素分泌细胞进行检测。采用含有端粒酶反转录酶基因的载体转染大鼠胰岛素分泌细胞,经G418筛选后得到阳性细胞克隆,并在体外进行连续的传代培养。应用RT-PCR方法检测hTERT基因在细胞中的整合和表达情况,同时用高效液相色谱分离法对转染后的细胞分泌胰岛素的功能进行检测。主要观察指标:①胰岛细胞在经过端粒酶反转录酶基因转染前后的细胞生长情况。②转染后的细胞在体外的传代培养情况。③细胞的胰岛素分泌情况。结果:端粒酶反转录酶基因转染后细胞与未转染的细胞对比活力良好并且仍有分泌胰岛素的功能,可在体外连续的进行传代培养(目前已传至第15代,仍在进一步传代培养中),同时外源性的hTERT基因在转染后的胰岛素分泌细胞中有稳定的整合并表达。结论:转染后的细胞具有分泌胰岛素的功能并可以在体外连续传代培养,端粒酶反转录酶基因在胰岛素分泌细胞中稳定的整合并表达,胰岛素分泌细胞的永生化细胞系基本建立。
- 任甫侯续伟徐国昌尹波
- 关键词：端粒酶转染胰岛细胞永生化
- 黄芪提取物诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的机制研究被引量：12
- 2014年
- 目的:研究黄芪提取物对人胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:采用不同浓度的黄芪提取物干预人胃癌SGC-7901细胞。MTT比色法观察黄芪提取物对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡率和线粒体膜电位;分光光度法检测细胞Caspase-3和Caspase-9活性;电泳法检测Bax和Bcl-2蛋白表达。结果:黄芪提取物(25、50、100 mg/L)以剂量依赖性地抑制SGC-7901细胞增殖,诱导其凋亡,并且降低线粒体膜电位;增加Caspase-3和Caspase-9活性,上调Bax蛋白表达的同时下调Bcl-2蛋白表达。结论:黄芪提取物可抑制人胃癌SGC-7901细胞体外增殖且通过线粒体途径诱导其凋亡。
- 尹波侯续伟李迪诺王玉彬
- 关键词：黄芪提取物人胃癌SGC-7901细胞增殖凋亡
- 不同温度焚烧对成人股骨16个基因位点的影响被引量：9
- 2008年
- 目的：探讨不同温度焚烧后骨骼DNA浓度的变化以及16个基因位点的存留情况。方法：常压下以100-500℃对30例成人股骨进行焚烧，对其存留DNA进行浓度测定，用Identifiler^TMPCR试剂盒进行荧光标记和复合扩增，ABI3100xl Genetic Analyzer软件对DNA16个基因位点进行检测和分析。结果：骨骼样本提取的DNA浓度在50．6～0．0ng／μl之间。未烧和5个温度焚烧后基因位点存留不同，位点检出率分别为98．5％、82．7％、52．9％、35．0％、8．5％、0．4％。结论：温度对骨骼DNA的保存有很大影响，温度越低，保存越完整；片段越小，存留越多。
- 徐国昌侯续伟任甫席焕久郑坤涂政刘志芳叶健
- 关键词：短串联重复序列DNA检验
