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脂肪酶及酯酶定点突变研究进展及其应用被引量：4: 2012年; 重点介绍了利用定点突变技术对脂肪酶及酯酶性质的改造,包括酶的稳定性,活性,最适温度,最适作用pH以及对映选择性。综述了理性设计在脂肪酶及酯酶改造中的应用现状、存在问题以及前景。; 祝玲周琼詹冰津池丽影张军玲; 关键词：定点突变技术脂肪酶酯酶对映选择性最适温度酶性质

黑脊倒刺鲃vasa同源基因的克隆及表达分析被引量：7: 2012年; 为了从分子水平上研究鱼类生殖细胞发育的机制,首次从重要的经济养殖鱼类——黑脊倒刺鲃中克隆了斑马鱼vasa的同源基因ScVHG。该cDNA长1962bp,编码654个氨基酸,氨基酸序列中含有DEAD蛋白家族特有的9个保守结构域。经比对发现,其编码的蛋白序列与斑马鱼VASA蛋白等具有高度的同源性,与斑马鱼、罗非鱼、虹鳟、银鲫、黄鳝、金鱼、金枪鱼、草鱼的VASA蛋白相似度分别为77%,77%,79%,90%,74%,89%,79%和86%。RT-PCR结果显示:在成鱼不同的组织中,ScVHG仅在精巢和卵巢中表达。RNA原位杂交结果进一步表明:在精子发生中,ScVHG只在精原细胞中表达,而在后期的精母细胞、精子细胞中均未发现明显的表达;在卵子发生中,ScVHG在卵原细胞和卵母细胞的各个时相中均有表达,在卵原细胞中表达最为强烈,而在随后各时相的卵母细胞中,阳性信号逐渐减弱。研究认为,该基因中含有的保守序列、序列的相似性以及该基因在生殖细胞中的特异性表达等结果均表明,克隆得到的ScVHG是斑马鱼vasa的同源基因,此基因可作为一种有效的分子标记,用于黑脊倒刺鲃以及其他鱼类生殖细胞发育机制的研究。; 唐良华苏敏吕博彦詹冰津池丽影祝玲周琼; 关键词：黑脊倒刺鲃 VASA 原位杂交生殖细胞

Penicillium expansum脂肪酶选择性拆分外消旋萘普生被引量：7: 2011年; 为了实现固定化扩展青霉TS414(Penicillium expansum TS414)脂肪酶在有机相中对外消旋萘普生的高效拆分,实验考察了水分、温度、有机溶剂、酶浓度、醇结构和醇浓度对酶促拆分反应的影响,确立了优化的酯化反应条件为:异辛烷为溶剂,外消旋萘普生2.15mmol/L,正丙醇34.3mmol/L,固定化酶量12g/L,水0.05%(φ),40℃恒温摇床中200r/min反应100h.在此条件下,酯化拆分反应的转化率为48.3%.结果表明,固定化Penicilliumexpansum脂肪酶是一种较为理想的用于外消旋萘普生拆分的工具酶.; 唐良华蔡志雄苏敏祝铃周琼吕博彦; 关键词：脂肪酶萘普生拆分

高通量筛选方法在酶定向进化中的应用被引量：2: 2012年; 在过去的几十年中,酶作为经济、环保的生物催化剂已经越来越受到工业以及医药领域的重视,与此同时,高通量筛选方法(HTS)作为酶定向进化中的一项重要技术也得到长足的发展。近些年来,一系列高通量筛选方法的建立使得酶的筛选更加灵敏、高效、快捷,大量的能够适用于工业以及医药领域的工程酶也相继产生。综述了近期建立的一些高通量筛选方法,简要概述了各种筛选方法的基本原理以及存在的优点和不足,并对高通量筛选方法将来的发展做出了展望。; 周琼祝玲詹冰津池丽影张君玲; 关键词：高通量筛选定向进化

蛇毒P-Ⅲb型金属蛋白酶的自我降解: 2011年; 蛇毒金属蛋白酶是蛇毒诱发病变的重要毒素,在制药和临床上具有潜在的用途。研究发现,蛇毒金属蛋白酶,主要是P-Ⅲb型,存在自我降解的现象。对其自我降解机制及对策的研究有助于我们了解其内部复杂的结构和功能,并为其将来可能的应用奠定坚实的基础。综述了P-Ⅲb型蛇毒金属蛋白酶的自我降解现象、机制及相应抑制降解的策略。; 蔡志雄苏敏吕博彦祝玲周琼詹冰津唐良华; 关键词：金属蛋白酶

扩展青霉TS414脂肪酶的克隆与原核表达: 2014年; 提取了扩展青霉Penicillium expansumTS414菌体的总RNA,并以反转录得到的cDNA为模板,成功扩增得到了脂肪酶基因;在此基础上,构建了重组表达载体pGEX-4T-1-PEL,并在大肠杆菌DH5α中实现了扩展青霉脂肪酶的表达;进一步采用低IPTG诱导浓度、低温、长时间的发酵策略等,使扩展青霉脂肪酶得以有活性的表达;同时,通过反复冻融细胞破碎法使其较好地从菌体细胞中分离出来,提取得到的酶液的活力达到0.49 U/mL。以上结果为后续脂肪酶分子进化等研究奠定了坚实的基础,亦可转化为高校或中学生物学实验教学的项目。; 朱心强周琼唐良华; 关键词：扩展青霉脂肪酶克隆

扩展青霉脂肪酶的定向进化及其比酶活的提高: 本论文以提高扩展青霉TS414脂肪酶催化活性为主线,以建立高通量筛选方法、完善脂肪酶定向进化体系为主要目标,开展了以下几方面研究：首先,对扩展青霉TS414脂肪酶基因进行了克隆与原核表达：成功的从扩展青霉TS414中提...; 周琼; 关键词：高通量筛选定向进化易错PCR 热稳定性; 文献传递

硬骨鱼中vasa基因的研究被引量：1: 2010年; vasa基因编码一个DEAD-box家族的ATP依赖性RNA解旋酶,最早在果蝇中发现。在绝大多数的脊椎动物和非脊椎动物中,vasa基因的杂交信号仅在生殖细胞系中特异性表达,因此它可以作为一种分子标签,广泛用于性腺发生、配子发生、原生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)的起源、迁移、分化等方面的研究。综述了国内外有关硬骨鱼类vasa基因结构,表达与功能等方面的研究报道,并对其应用前景作了展望。; 吕博彦苏敏周琼祝玲蔡志雄唐良华; 关键词：硬骨鱼 VASA基因生殖细胞

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周琼