宁双飞
- 作品数：9 被引量：44H指数：5
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人CD226(PTA1)分子胞膜外区截短体真核表达载体的构建、表达及其识别结构域的分析被引量：1
- 2003年
- 目的 确定一套CD2 2 6单克隆抗体 (McAb)识别CD2 2 6分子胞膜外区结构域的部位。方法 应用计算机软件分析CD2 2 6分子蛋白质序列疏水性 ,确定其亲水性区域。采用PCR方法扩增CD2 2 6分子基因序列 ,分别缺失相应亲水性区域 ,构建CD2 2 6截短体重组真核细胞表达载体pcDNA3 PTA1T1和pcDNA3 PTA1T2。测序正确后 ,转染COS7细胞 ,抗CD2 2 6分子多克隆抗体间接免疫荧光染色 ,流式细胞术检测CD2 2 6分子截短体的表达。表达成功后 ,采用间接免疫荧光染色和流式细胞术分析 ,用一套CD2 2 6McAb检测与截短突变体的免疫反应性 ,从而确定CD2 2 6McAb识别CD2 2 6分子结构域的部位。结果 PCR扩增出CD2 2 6分子相应目的片段序列 ,定向克隆入pcDNA3真核表达载体 ,DNA序列测定正确。转染COS7细胞后 ,流式细胞术检测CD2 2 6截短体分子有较高水平的表达。CD2 2 6McAbLeoA1、NewE1和FMU1～ 7均可识别CD2 2 6全长分子 ;LeoA1、NewE1、FMU1、FMU2、FMU4和FMU5与截短突变体PTA1T1和PTA1T2均无反应性 ;FMU3可结合PTA1T1分子 ,不结合PTA1T2分子 ;FMU6和FMU7均可结合PTA1T1及PTA1T2分子。结论 CD2 2 6McAbLeoA1、NewE1、FMU1、FMU2、FMU3、FMU4和FMU5识别CD2 2 6分子胞膜外区D1结构域 ,其中FMU3识别的位点位于V1和V2环之间 ;FMU6?
- 贾卫刘雪松张新海朱勇张贇李琦杨琨欧阳为明宁双飞金伯泉
- 关键词：CD226PTA1基因表达
- 检测可溶型CD226双mAb夹心ELISA的建立及初步应用被引量：6
- 2003年
- 目的 :建立一种检测可溶型CD2 2 6 (sCD2 2 6 )的双mAb夹心ELISA ,并用于临床标本的检测。方法 :确定包被mAbLeoA1和HRP mAbFMU3的最佳工作浓度及最佳稀释液后 ,建立双mAb夹心ELISA ,并对方法的特异性、敏感性和稳定性进行鉴定。再以建立的方法检测临床标本。结果 :包被mAbLeoA1的最佳工作浓度为 2 .5mg/L ,HRP mAbFMU3的最佳工作浓度 1∶4 0 0 ,标准品及HRP mAb的最佳稀释液分别为 1g/LBSA 1mL/LTween2 0 PBS和 30 g/LPEG PBS .建立的双mAb夹心ELISA ,其特异性 (与人IgG无交叉反应 ,阻断实验中阻断效应呈剂量依赖性 )、敏感性 (检出下限为 110ng/L标准品CD2 2 6 /Fc融合蛋白 )及稳定性 (CV <10 .2 % )均较良好。对部分临床标本的检测中 ,发现 6例类风湿关节炎(RA)患者血清sCD2 2 6的水平升高 ,与正常人血清sCD2 2 6水平相比差异显著 (P <0 .0 1)。结论 :建立一种特异性高、重复性好、较敏感的检测sCD2 2 6的双mAb夹心ELISA 。
- 宁双飞贾卫张新海杨琨李琦刘雪松金伯泉
- 关键词：单克隆抗体酶联免疫吸附试验类风湿性关节炎
- 夹心ELISA检测可溶型LAIR-1方法的建立及其应用的研究被引量：11
- 2003年
- 为了探讨血清可溶型白细胞相关免疫球蛋白样受体 1 (sLAIR 1 )的水平与疾病的关系 ,用生物传感器鉴定了 3种抗LAIR 1分子胞膜外区mAb识别的表位 ,并应用 2种识别不同LAIR 1表位的mAb首次建立了检测sLAIR 1的夹心ELISA方法 ,其检测灵敏度达到 1 5 μg/L。以此方法检测了活化的人PBMC培养上清以及正常人和肾综合征出血热 (HFRS )患者血清中sLAIR 1的水平。在经PMA、PHA、LPS和抗CD3mAb活化的人PBMC细胞培养上清中检测到sLAIR 1。 2 4例正常人血清sLAIR 1的平均水平为 (6 2± 3 3) μg/L ,6 2例HFRS患者血清sLAIR 1的平均水平为 (4 7 2± 35 9) μg/L。证明体内和体外存在天然sLAIR 1。HFRS患者血清sLAIR 1水平明显升高。为进一步研究LAIR
- 薛江楠欧阳为明贾卫谢鑫刘京梅宁双飞户义宋朝君金伯泉
- 关键词：MAB夹心ELISALAIR-1HFRS
- 银屑病患者血清中可溶性血小板T细胞活化抗原1的检测被引量：9
- 2003年
- 目的检测银屑病患者血清中可溶性血小板T细胞活化抗原1(sCD226/PTA1)的水平,初步探讨该抗原与银屑病的关系。方法银屑病患者包括疗前30例,其中活动期17例、静止期13例,疗后10例,正常人对照15例。应用双抗体夹心ELISA法测定血清中sCD226/PTA1的浓度。结果银屑病组血清中sCD226/PTA1水平(823.88±569.93pg/mL)显著高于正常人(120.45±58.41pg/mL),t= 4.41,P<0.001。活动期(1036.07±598.97pg/mL)更高,依次高于静止期(546.39±399.28pg/mL)和正常人。疗后组(263.16±207.3pg/mL)显著低于相应的疗前组(751.51±648.07pg/mL),t= 3.42,P<0.005。与正常人比较,疗后组值仍偏高,但差异无显著性,t=2.02,P>0.05。结论银屑病患者血清中存在高水平的sCD226/PTA1,并在活动期、静止期及疗后呈现出不同的变化。提示CD226/PTA1可能参与银屑病的病理过程。
- 周武庆宁双飞贾卫金伯泉崔盘根杨雪源
- 关键词：银屑病CD226病理学
- 人CD226(PTA1)分子胞膜外区的原核表达、复性及免疫反应性的鉴定被引量：1
- 2002年
- 目的 构建人CD2 2 6 (PTA1)分子胞膜外区的原核表达载体 ,并进行原核表达和复性 ,为该分子的X线结晶衍射及功能学研究提供充足的蛋白来源。方法 将人CD2 2 6分子的胞膜外区基因克隆入原核表达载体pBV2 2 0 ,测序证实后 ,转化宿主菌MC10 6 1 P3并进行温度诱导表达。产物采用稀释加透析法复性 ,亲和层析柱纯化 ,并通过Westernblot和ELISA对其复性效果进行鉴定。结果 温度诱导 7h ,目的蛋白的表达量达宿主菌总蛋白量的 2 3.8% ,其相对分子质量为 30× 10 3,Westernblot及ELISA证实其重折叠和复性是成功的。结论 成功地获得了人CD2 2 6 (PTA1)分子胞膜外区的原核表达产物 。
- 张新海欧阳为明贾卫杨琨宁双飞陈丽华李琦金伯泉
- 关键词：CD226PTA1原核表达免疫反应性
- 小鼠CD226(PTA1)的基因克隆及其异型被引量：13
- 2002年
- 目的 :克隆小鼠CD2 2 6 (PTA1)分子。方法 :从GenBank中检索出与人CD2 2 6分子在氨基酸水平上有 5 1%同源性的EST序列 ,设计并合成特异性引物 ,采用快速扩增cDNA末端的RACE方法 ,从 4周龄BALB c小鼠的胸腺中扩增小鼠CD2 2 6cDNA序列。结果 :克隆出完整的小鼠CD2 2 6cDNA ,长 2 2 2 3bp ,其中开放读框为 10 0 2bp ,编码含信号肽在内的 333个氨基酸 ,属免疫球蛋白超家族分子 ,较人CD2 2 6分子少了 3个氨基酸 ,在氨基酸水平上有 5 3%的同源性。此外 ,还克隆了小鼠CD2 2 6分子的 3种异型。结论 :成功克隆出小鼠CD2 2 6 (PTA1)cDNA ,并发现 3种异型 ,全面探讨该分子生物学特性 ,进行体内功能实验 ,基因敲除小鼠和转基因小鼠的研究提供了坚实的基础。
- 张新海李德敏欧阳为明贾卫谢鑫陈丽华宁双飞张赟金伯泉
- 关键词：CD226血小板基因克隆PTA1
- 肾综合症出血热患者血清可溶性CD226/PTA1的检测及意义被引量：14
- 2002年
- 宁双飞贾卫刘京梅张新海杨琨李琦刘雪松金伯泉
- 关键词：肾综合症出血热HFRS
- 9.1C3/LAIR-1的真核表达、纯化及单克隆抗体的制备和鉴定被引量：3
- 2002年
- 目的 表达并纯化 9.1C3/LAIR 1胞膜外区与人的IgG1Fc段的融合蛋白 ,制备针对 9.1C3/LAIR 1胞膜外区的单克隆抗体 (mAb)。方法 构建真核表达载体 pIg/ 3C 9.1C3/LAIR 1,表达并纯化 9.1C3/LAIR 1 Fc融合蛋白。以 9.1C3/LAIR 1 Fc融合蛋白免疫BALB/c小鼠 ,制备。以间接免疫荧光染色和流式细胞术鉴定mAb的特异性 ,以竞争结合实验鉴定mAb识别LAIR 1的表位。结果表达并纯化了 9.1C3/LAIR 1 hIgFc融合蛋白 ,以其免疫BALB/c小鼠 ,获得 1株针对 9.1C3/LAIR 1胞膜外区的mAb 4H7。4H7对HL 6 0细胞和经 9.1C3/LAIR 1cDNA转染的COS7细胞上的表位识别 ,与已报道的抗 9.1C3mAb体不同。结论 成功地构建了 9.1C3/LAIR 1胞膜外区基因的真核表达载体 ,并表达纯化了 9.1C3/LAIR 1 hIgFc融合蛋白。获得一株针对 9.1C3/LAIR 1胞膜外区的mAb ,为进一步研究9.1C3/LAIR
- 薛江楠欧阳为明贾卫张新海谢鑫曹云新宁双飞李琦金伯泉
- 关键词：真核表达纯化单克隆抗体
- 抗9.1C3/LAIR—1单克隆抗体的制备和应用
- 9.1C3/LAIR—1分子是通过用人NK细胞免疫小鼠后所获得的能阻断杀伤细胞功能的单克隆抗体(mAb)而发现的。于1997年基因克隆成功并命名为白细胞相关免疫球蛋白样受体(leukocyte—associatedimm...
- 薛江楠欧阳为明贾卫张新海谢鑫曹云新宁双飞李琦金伯泉
- 文献传递
