张林杰
- 作品数：90 被引量：319H指数：8
- 供职机构：安徽医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省高校省级自然科学研究项目安徽省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学生物学农业科学更多>>
- 辛伐他汀对oxLDL诱导的巨噬细胞活性氧及IL-1β分泌的影响被引量：2
- 2014年
- 目的探讨辛伐他汀对氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)诱导的巨噬细胞内活性氧(ROS)的水平及IL-1β分泌的影响。方法将oxLDL 0、50、100、200 mg·L-1作用于巨噬细胞J774A.1后,采用油红O染色观察脂滴在巨噬细胞内的聚集情况;用辛伐他汀0.5、1.0μmol·L-1作用于oxLDL处理的巨噬细胞,流式细胞仪检测辛伐他汀作用前后细胞内ROS的水平;Western blot检测pro-caspase-1、cleaved caspase-1和成熟IL-1β的表达情况。结果油红O染色结果表明,oxLDL可导致巨噬细胞内明显的脂质聚集,并于100 mg·L-1作用剂量达到摄取脂质的饱和状态;流式细胞仪结果表明,oxLDL可以诱导脂质聚集巨噬细胞内ROS的水平增加,辛伐他汀作用后,ROS水平由(167±0.47)%下降到(139±0.97)%,并呈明显的剂量依赖;Western blot结果表明,辛伐他汀可抑制oxLDL诱导的caspase-1活化及IL-1β的分泌,辛伐他汀处理组与oxLDL实验组相比,cleaved caspase-1及成熟IL-1β的表达呈下降趋势,灰度值差异有统计学意义(P<0.05)。结论在oxLDL诱导的巨噬细胞脂质聚集模型中,辛伐他汀可以抑制巨噬细胞内ROS的产生及caspase-1的活化,并减少IL-1β的分泌。
- 靳梦醒闫海程艳伟桂丽胡春松张林杰黄保军
- 关键词：辛伐他汀巨噬细胞活性氧IL-1ΒOX-LDL
- 凝集素芯片法分析桥本氏甲状腺炎患者外周血DC细胞膜糖蛋白的表达被引量：2
- 2016年
- 目的通过凝集素芯片法筛选桥本氏甲状腺炎(HT)患者外周血树突状细胞(DC)差异表达的膜表面糖蛋白,了解其在HT中的表达变化。方法通过制备包含有32种凝集素的凝集素芯片对16例HT患者和22例健康者外周血DC细胞膜表面糖蛋白的表达进行分析;凝集素耦联葡聚糖拉下相应差异表达的糖蛋白并进行质谱鉴定;同时应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blot法和流式细胞术对HT患者外周血DC中该糖蛋白的mRNA、蛋白表达及Galectin-9+DC比例进行分析。最后通过ELISA法检测DC与CD8+T细胞孵育上清液中IFN-γ、穿孔素、颗粒酶B浓度。结果凝集素芯片检测结果显示凝集素脱落酸素(ABA)对应的糖蛋白在HT组显著低于健康组(P<0.01)。对凝集素ABA耦联葡聚糖拉下后洗脱的蛋白进行质谱鉴定,结果显示,众多洗脱蛋白中半乳糖结合蛋白-9(Galectin-9)所占比例较为丰富;随后通过qRT-PCR和Western blot进一步验证Galectin-9在HT组DC中的表达低于健康组;流式细胞术结果则显示HT组DC Galectin-9low比例高于健康组,且其均能较健康组诱导CD8+T细胞产生3种高水平杀伤因子。结论HT患者外周血Galectin-9lowDC可能与HT相关。
- 袁媛唐晓磊张林杰
- 关键词：桥本氏甲状腺炎树突状细胞
- SHIP2通过上调Bim表达增强胃癌细胞BGC-823对紫杉醇的敏感性被引量：2
- 2014年
- 目的探讨SHIP2(SH2 domain containing inositol 5-phosphatase 2)基因转染人胃癌细胞BGC-823后对紫杉醇敏感性的影响。方法流式细胞仪PI单染法检测细胞凋亡率。应用免疫蛋白印迹法(Western blot)检测各组细胞蛋白表达情况。实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)分析mRNA的变化水平。将pCMV6-SHIP2质粒在脂质体介导下转染人胃癌BGC-823细胞,同时以转染空载体和未转染细胞作为对照组。将GV112-Puromycin空载体和GV112-Puromycin-Bim(Bcl-2 interacting mediator of cell death)慢病毒颗粒分别感染BGC-823细胞,建立稳定细胞株,再将pCMV6-SHIP2质粒分别转染空载体和稳定干扰Bim表达细胞株。结果与SGC-7901细胞相比,BGC-823细胞对紫杉醇诱导的凋亡相对不敏感,0.3μmol·L-1紫杉醇诱导BGC-823 48 h后细胞凋亡率仅为(25.6±1.6)%,在紫杉醇作用不同时间点Bim蛋白和mRNA表达均无明显变化;与对照组相比,转染SHIP2基因能明显增加Bim的表达,紫杉醇作用48 h后,细胞凋亡率上升到(50.8±0.9)%;GV112-Puromycin-Bim慢病毒颗粒感染的BGC-823细胞,Bim的表达明显被抑制,在GV112-Puromycin-Bim慢病毒颗粒感染的稳定BGC-823细胞中转入pCMV6-SHIP2,紫杉醇作用48 h后,凋亡率为(27.6±1.6)%。结论转染外源性SHIP2基因能有效提高BGC-823细胞内Bim的表达,诱导BGC-823细胞凋亡,明显增加BGC-823细胞对紫杉醇的敏感性。
- 葛燕梅叶艳张林杰
- 关键词：胃癌BIM紫杉醇AKT
- 全球弓形虫人兽分离株基因型及其效应分子相关的致病机制研究
- 虫(Toxoplasma gondii)是一种广泛寄生于人和温血动物体内的顶复门寄生原虫,该虫具有复杂的生活史和致病机制.近年来对弓形虫的种群遗传结构的研究表明,依地区而异存在丰富的遗传多态性.采用PCR-RFLP从全球...
- 沈继龙沈茜王林张林杰
- 关键词：弓形虫基因型效应分子致病机制
- 兔抗人PON2抗体的制备与初步应用被引量：5
- 2008年
- 目的:制备兔抗人PON2(paraoxonase-2)的多克隆抗体并进行初步鉴定。方法:生物信息学方法分析人PON2蛋白序列,选取人兔同源性较低,亲水性及免疫原性较强的片段,通过大肠杆菌原核表达系统进行重组表达,获得GST-PON2融合蛋白用于免疫新西兰大耳白兔获得多克隆抗体,通过XX方法分离纯化得到的抗PON2多克隆抗体,用West-ernblot、间接免疫荧光对其进行特异性及灵敏度鉴定。结果:成功获得了高表达的相对分子质量(Mr)为46000的PON2重组融合蛋白;Westernblot鉴定结果显示此多克隆抗体可特异识别肝脏总蛋白、HeLa细胞及U937细胞中Mr为39000的天然PON2蛋白;间接免疫荧光结果显示此多克隆抗体所识别的蛋白定位于SY5Y细胞胞质中。结论:抗人PON2的多克隆抗体特异识别肝总蛋白、HeLa细胞及U937细胞中的天然蛋白,可用于PON2的研究及临床检测。
- 陈苗杨金菊李淑珍柳晓兰刘莹张林杰高建恩孙启鸿
- 关键词：多克隆抗体重组抗原
- 重组人肿瘤坏死因子α分泌型真核表达载体的构建及表达
- 2009年
- 目的构建人肿瘤坏死因子rhTNF-α分泌型真核表达载体,并检测其在中国仓鼠卵巢细胞中的稳定表达。方法以pGEM-T/sig-tumstatin为模板,扩增与TNF带重叠区的型胶原信号肽sig基因片段,以PBV220-TNF为模板,扩增与sig带重叠区的TNF基因片段,以上述2个扩增产物片段为模板,重叠区扩增拼接法(SOEing)扩增得到sig-TNF。sig-TNF片段经酶切后,插入经同样酶切的pIRE Sneo3质粒,利用克隆PCR、限制性内切酶消化以及序列测定,对获得的sig-TNF基因片段及重组载体进行验证。将重组sig-TNF真核表达载体转染到CHO-K1,并对其表达状况进行检测。结果所获得的sig-TNF片段(558bp)序列与报道的序列完全一致,酶切鉴定结果表明含人肿瘤坏死因子的重组pIRE Sneo3/sig-TNF表达载体构建成功,转染重组pIRE Sneo3/sig-TNF的CHO-K1分泌表达了人肿瘤坏死因子rhTNF-α。转染了pIRE S-neo3/sig-TNF真核表达载体和空载体的CHO-K1和未转染CHO-K1细胞的生长速度没有差别。结论成功构建了重组人肿瘤坏死因子rhTNF-α分泌型真核表达载体,并获得能稳定表达rhTNF-α的CHO-K1,为开展下一步的实验奠定了基础。
- 赵亮罗以勤姚丽娟孔建新濮跃晨孙安源张林杰
- 关键词：肿瘤坏死因子Α真核细胞中国仓鼠卵巢细胞
- RIP1增强顺铂诱导食管癌细胞的凋亡被引量：4
- 2015年
- 目的探讨受体相互作用蛋白1(RIP1)增强顺铂(DDP)诱导食管癌细胞凋亡的敏感性。方法单溶液细胞增殖分析(MTS)法检测不同浓度DDP对食管癌细胞株KYSE510、KYSE410的增殖抑制作用;Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测RIP1、半胱天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)、PARP的蛋白表达。结果 DDP诱导食管癌细胞凋亡具有剂量和时间相关性。凋亡率随剂量增加和时间延长升高,RIP1蛋白的表达升高,DDP联合RIP1特异性抑制剂处理食管癌细胞后,较敏感的KYSE510凋亡率明显减少。结论 RIP1可能参与了DDP诱导食管癌细胞凋亡的作用。
- 章余妹吴萍张林杰吕磊杨守梅
- 关键词：食管癌顺铂凋亡
- Bcl-2家族成员在紫杉醇诱导胃腺癌细胞凋亡中的表达被引量：3
- 2008年
- 目的研究Bcl-2家族成员在紫杉醇诱导胃腺癌细胞凋亡中的表达,探索紫杉醇作用的分子机制。方法流式细胞仪PI单染法检测细胞凋亡率;Western blotting检测紫杉醇诱导胃腺癌细胞凋亡过程中Bcl-2家族成员的表达水平变化。结果紫杉醇诱导胃腺癌细胞凋亡具有剂量和时间依赖性,SGC-7901较BGC-823胃腺癌细胞株对紫杉醇更为敏感。紫杉醇诱导胃腺癌细胞凋亡中,Bcl-2家族成员中促凋亡分子Bim表达水平增高,而抗凋亡分子Bcl-2、Bcl-xL表达降低。结论Bcl-2家族成员在紫杉醇诱导胃腺癌细胞凋亡中发挥重要的调节作用。
- 沈茜苏浩张林杰
- 关键词：胃肿瘤细胞凋亡紫杉醇BCL-2
- BH3-only蛋白在紫杉醇诱导胃腺癌细胞凋亡中的表达被引量：7
- 2006年
- 目的研究BH3only蛋白Bim、Noxa、Puma在紫杉醇诱导胃腺癌细胞凋亡中的表达水平及其意义。方法流式细胞仪AnnexinⅤ/PI双染法检测细胞凋亡率;半定量RTPCR和Westernblot分别检测在紫杉醇诱导前后Bim、Noxa、Puma的mRNA和蛋白的表达水平。结果紫杉醇诱导胃腺癌细胞凋亡具有剂量和时间依赖性,SGC7901胃腺癌细胞比BGC823细胞对紫杉醇更具敏感性。Bim的mRNA和蛋白的表达水平在紫杉醇诱导的SGC7901中有显著升高,而在BGC823中无明显变化。Noxa的mRNA表达水平在紫杉醇诱导的SGC7901及BGC823中有一过性升高,而其蛋白表达水平却检测不到。两种胃腺癌细胞系均未检测到PumamRNA的表达。结论紫杉醇能通过诱导细胞凋亡杀伤胃腺癌细胞,而此凋亡可能与BH3only蛋白Bim、Noxa的表达上调有关,而与PumamRNA的表达无关。
- 叶艳谢奇朋郝延璋张旭东张林杰
- 关键词：胃肿瘤细胞凋亡紫杉酚
- 机采血小板中白细胞碎片定量检测方法的建立及其影响因素被引量：1
- 2009年
- 目的采用实时定量PCR（RQ-PCR）和流式细胞术（FCM）建立机采血小板（AP—PCs）中白细胞碎片（LFs）的定量检测方法，并探讨保存时间、是否过滤和PLT浓度等因素对LFs含量的影响。方法选取合格献血者67名，各采集AP—PCs 1个治疗剂量，并尽快留取标本。然后将每份标本分成6份，其中1份用于血液分析仪检测，另外5份分别于采集后4h内、24、48、72、96h时，分别在过滤前后和离心前后等不同状态下进行4次DNA抽提。然后运用RQ-PCR对所抽提DNA中人类白蛋白基因进行定量测定，并换算成白细胞当量（WBCs／μl）。完整白细胞用FCM进行计数。LFs含量通过从总DNA含量中减去游离DNA含量和完整白细胞含量而算出，比较不同保存时间组和过滤前后组间LFs含量的差别。并按照PLT浓度的不同进行分组，比较不同PLT浓度组间过滤前LFs含量的差别。同时对PLT浓度和LFs含量进行双变量相关分析。结果所有AP—PCs标本中LFs含量均被成功检测。过滤前LFs含量在采集后4h内、24、48、72、96h分别为（31．4±17．6）、（47．5±25．3）、（100．7±53．5）、（89．5±47．2）和（16．1±7．8）WBCs／μl，过滤后分别为（16．9±8．7）、（24．3±12．2）、（83．1±42．6）、（78．2±40．2）和（13．6±6．6）WBCs／μl，不同保存时间组间LFs含量差异有统计学意义（F组内=472．756，P〈0．01）。LFs含量在采集后48h内呈上升趋势，此后逐渐下降，其峰值出现在血小板采集后48～72h之间。过滤前后LFs含量差值在4h内、24、48、72、96h分别为14．5、23．2、17．6、11．3和2．5WBCs／μl，过滤前后差异有统计学意义（F组间=9．216，P〈0．05），其差值在48h内较大，随后逐渐减小。双变量相关分析结果显示，PLT浓度与LFs含量之间不呈相关关系，采集后4h内、24、48、72、96h相关系数rs分别为～0．002、0．015、0．027、0．042和0
- 蒋光明张林杰王保龙叶书来陈家萍周建华王敏廖艳秋
- 关键词：血小板去除法血小板白细胞计数聚合酶链反应流式细胞术
