张珈宁
- 作品数：13 被引量：34H指数：4
- 供职机构：海南大学农学院更多>>
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- 布鲁氏菌外膜蛋白2b基因的克隆、原核表达及蛋白生物信息学分析被引量：7
- 2014年
- 本试验旨在克隆布鲁氏菌外膜蛋白2b(Omp2b)基因并进行原核表达和蛋白的生物信息学分析。根据布鲁氏菌M5-90株外膜蛋白Omp2b基因序列设计引物,以布鲁氏菌基因组为模板,通过PCR技术扩增得到Omp2b基因片段,回收纯化后,将此片段连接入pMD20-T质粒,将该重组质粒转化E.coli DH5α感受态细胞,挑取阳性克隆菌提取质粒后,送公司测序。将该片段亚克隆入pET28a载体,构建pET28a-Omp2b表达载体,转化E.coli BL21(DE3)菌株,IPTG诱导其表达,用SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定此蛋白。运用DNAMAN、BioEdit等各种工具软件对Omp2b基因编码的氨基酸序列进行分析。结果显示,成功克隆了Omp2b基因,其开放阅读框为1041bp,编码347个氨基酸;构建了pET28a-Omp2b原核表达载体,并在E.coli BL21(DE3)中成功表达了Omp2b基因,表达蛋白约38ku;Omp2b蛋白二级结构中α-螺旋、伸展链、β-折叠和无规卷曲分别占20.17%、26.22%、5.76%和47.84%。
- 赵天靖贾晓晓焦寒伟朱华培徐开莲郭莳雨史巧芸荣辉成鹰张珈宁庞峰杜丽王凤阳
- 关键词：布鲁氏菌克隆原核表达生物信息学分析
- 海南原鸡CD14 cDNA的克隆及其生物信息学分析被引量：1
- 2013年
- 从海南原鸡外周血白细胞中提取总RNA,以总RNA为模板,利用RT-PCR技术,成功获得海南原鸡CD14全长cDNA,并对其进行较系统的生物信息学分析,内容包括序列特征分析、同源性分析、编码蛋白质理化性质及结构预测。结果表明:海南原鸡CD14的CDS序列长度为1398 bp,编码465个氨基酸,该基因编码的蛋白质相对分子质量约为4.971 ku,理论等电点为6.41。对编码蛋白的分子结构预测发现,该蛋白为跨膜蛋白,其二级结构中,α-螺旋占47.31%,β-折叠占6.88%,无规则卷曲占45.81%。比对分析表明,海南原鸡CD14基因的核酸序列与人、小鼠、牛、猕猴的同源性均在30%～38%之间。
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- 关键词：原鸡CD14CDNA克隆生物信息学分析
- 基因Ⅳ型戊型肝炎病毒 ORF3对 HEK293细胞 MAPKs磷酸化的影响被引量：2
- 2014年
- 为了分析戊型肝炎病毒ORF3蛋白对于靶细胞MAPK磷酸化的影响,应用人磷酸化MAPK抗体微阵列比较稳定表达EGFP-ORF3的HEK293细胞和稳定表达EGFP的HEK293细胞的磷酸化MAPK表达谱,筛选获得显著上调/下调的磷酸化MAPK。结果表明,在稳定表达EGFP-ORF3的HEK293细胞,p-Akt2、p-Aktpan、p-ERK1、p-ERF2、p-RSK1的表达水平升高,而p-P38б表达水平降低。结果表明,ORF3蛋白影响了HEK293细胞的p-Akt2、p-Aktpan、p-ERK1、p-ERF2、p-RSK1、p-P38б等MAPKs的磷酸化水平,为HEV ORF3对于靶细胞磷酸化MAPK表达影响的分子机制研究提供了重要依据。
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- 关键词：蛋白芯片戊型肝炎病毒MAPK磷酸化
- 海南原鸡CDC42 cDNA的克隆及其生物信息学分析
- 2012年
- 以海南原鸡外周血白细胞总RNA为模板,利用RT-PCR技术,扩增海南原鸡细胞分裂周期蛋白42(Cell division cycle42,CDC42)编码区,将扩增产物与pMDTM20T载体连接,重组质粒鉴定正确后,进行序列特征、同源性、编码蛋白质理化性质及结构预测等生物信息学分析。结果表明,海南原鸡CDC42的CDS序列长度为576bp,编码191个氨基酸;与鸡、人、牛、褐家鼠、斑马鱼的核苷酸序列同源性分别为100%、88.54%、88.19%、86.98%、82.12%;该基因编码的蛋白质相对分子质量约为21259,理论等电点为6.16;编码蛋白为非跨膜蛋白,在其二级结构中,α-螺旋占27.23%,β-折叠占25.65%,无规卷曲占47.12%。
- 张珈宁荣辉杜丽贾晓晓史巧芸郭莳雨吴科榜王学梅王凤阳
- 关键词：CDC42克隆生物信息学分析
- 羊布鲁菌外膜蛋白Bp-26基因的克隆及其原核表达被引量：4
- 2013年
- 应用PCR扩增羊布鲁菌M5-90株基因组DNA,得到大小为753bp的Bp-26基因,将其克隆入pMD20-T载体上,测序正确后,构建重组质粒pET-28a-Bp-26,转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导其表达,用Western blot鉴定蛋白。结果表明,成功构建了pET-28a-Bp-26原核表达载体,并在E.coli BL21中表达Bp-26基因,为开展羊布鲁菌Bp-26目的蛋白的抗原性分析和功能研究奠定了基础。
- 史巧芸荣辉郭莳雨贾晓晓张珈宁朱华培杜丽成鹰焦寒伟王凤阳
- 关键词：克隆原核表达
- 羊种布鲁氏菌Omp10基因的克隆及原核表达被引量：8
- 2014年
- 根据GenBank公布的羊布鲁氏菌(B.melitensis)M5-90株外膜蛋白(outer membrane protein,Omp)基因序列,设计1对引物,以其全基因组为模板,采用PCR技术对其进行扩增,得到381bp的目的片段,连接入pMD20-T载体,转化E.coli DH5α感受态细胞;测序正确后,构建pET-28a-Omp10原核表达质粒,再将该质粒转化入E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白His-Omp10,用SDS-PAGE和Western blotting进行分析。结果表明,成功构建了含Omp10基因的原核表达载体,并在E.coli BL21(DE3)中表达了Omp10基因,诱导得到的融合蛋白经鉴定与目的蛋白大小一致,证明Omp10得到成功表达。该试验为布鲁氏菌病的进一步研究奠定基础。
- 徐开莲朱华培赵天靖贾晓晓郭莳雨庞峰焦寒伟成鹰杜丽史巧芸荣辉张珈宁王凤阳
- 关键词：布鲁氏菌原核表达克隆
- 布鲁氏菌外膜蛋白16基因的克隆及原核表达被引量：6
- 2013年
- 为了成功克隆外膜蛋白16(outer membrane proteins 16,Omp16)基因并对其进行原核表达,试验根据GenBank中羊布鲁氏菌M5-90株外膜蛋白Omp16基因序列(登录号:JF918760.1)设计1对引物,从布鲁氏菌基因组中扩增出大小约为507bp的目的基因片段,凝胶回收纯化目的片段,连接入pMD20-T质粒,转化E.coli DH5α并测序,测序正确后再亚克隆入pET-28a(+)表达载体,构建重组质粒pET-Omp16,转化入E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导其表达,最后用Western blotting分析方法鉴定诱导得到的蛋白。结果表明,成功构建了pET-Omp16原核表达载体,并在E.coli BL21中表达了Omp16基因,诱导得到的蛋白经鉴定与目的蛋白大小一致,证明成功表达了目的基因。
- 贾晓晓焦寒伟郭莳雨史巧芸荣辉张珈宁朱华培杜丽成鹰王凤阳
- 关键词：布鲁氏菌克隆原核表达
- 基因Ⅳ型戊型肝炎病毒ORF3对靶细胞脂肪因子表达的影响被引量：2
- 2013年
- 为了探讨戊型肝炎病毒ORF3影响靶细胞脂肪因子表达的分子机制,应用蛋白芯片技术比较稳定表达EGFP-ORF3的HEK293细胞和稳定表达EGFP的HEK293细胞的脂肪因子表达谱,筛选获得显著上调/下调的脂肪因子。结果表明,在稳定表达EGFP-ORF3的HEK293细胞,Fas和TIMP-2的表达水平升高,而ACE-2表达水平降低。研究结果为HEV ORF3对于靶细胞重要脂肪因子表达影响的分子机制研究提供了重要依据。
- 杜丽成鹰史巧芸焦寒伟焦寒伟荣辉张珈宁贾晓晓郭莳雨王凤阳
- 关键词：蛋白芯片戊型肝炎病毒靶细胞脂肪因子
- 五指山小型猪PDCD10 cDNA的克隆及生物信息学分析
- 2013年
- 为了克隆五指山小型猪程序性死亡因子10(PDCD10)cDNA基因并进行生物信息学分析,试验以构建的五指山小型猪外周血白细胞cDNA文库为材料,采用菌落PCR的方法,克隆得到PDCD10全长cDNA序列,运用生物信息学软件分析其核苷酸序列并预测其编码蛋白的理化性质及二级结构等。结果表明:经比对分析发现,五指山小型猪PDCD10基因的核苷酸序列及其氨基酸序列与人、小鼠、牛、鸡、非洲爪蟾、斑马鱼、黑腹果蝇等具有较高的相似性。生物信息学分析结果表明,该cDNA序列全长1 250 bp,在序列3'末端有终止信号AATAAA。含636 bp(184～819 nt)的开放阅读框,编码212个氨基酸。该蛋白理论等电点(PI)及分子质量分别为7.80和24 701.57 u。
- 杜丽荣辉张珈宁侯冠彧周汉林郭莳雨贾晓哓史巧芸王凤阳
- 关键词：五指山小型猪CDNA文库克隆
- 五指山小型猪DAZAP2cDNA的克隆及其生物信息学分析
- 2013年
- 为了克隆五指山小型猪DAZ相关蛋白2(DAZAP2)cDNA全长并进行生物信息学分析,试验以构建的五指山小型猪外周血白细胞cDNA文库为材料,采用菌落PCR方法克隆得到DAZAP2全长cDNA序列,并运用生物信息学软件对其核苷酸序列进行分析,预测其编码蛋白的理化性质及二级结构等。结果表明:五指山小型猪DAZAP2基因的核苷酸序列及其氨基酸序列与人、苏门达腊猩猩、斑马鱼、非洲爪蟾、牛、褐家鼠等动物具有很高的相似性。DAZAP2 cDNA全长943 bp,5'非翻译区长69 bp,3'非翻译区长367 bp,含有1个完整的开放阅读框,编码168个氨基酸。该蛋白的分子质量为17 311 ku,等电点为7.48。
- 杜丽荣辉张珈宁侯冠彧周汉林郭莳雨贾晓哓史巧芸王凤阳
- 关键词：五指山小型猪CDNA文库克隆
