公共文化服务平台

鼠胚胎干细胞早期分化来源的心肌细胞同种异体移植后的电生理特性: 2008年; 目的探讨小鼠胚胎干细胞早期分化来源的心肌细胞进行同种异体移植后的电生理特性。方法首先通过电转染构建α-MHC—EGFP—ESc系[将心肌细胞特异的α-MHC启动子与表达基因——绿色荧光蛋白（EGFP）基因融合，构建成真核表达载体]，悬滴法诱导胚胎干细胞分化，在分化早期（7＋4）d利用流式细胞仪筛选带绿色荧光的心肌细胞，将纯化的心肌细胞（5×10^6个／ml）移植到小鼠心室壁，对照组注入等体积培养基，移植前3d开始应用环孢素A（静脉注射，5mg·kg·d^-1）和泼尼松龙（静脉注射，2．5mg·kg^-1·d^-1）抑制免疫排斥反应。移植后2周分离两侧颈迷走神经行电刺激抑制窦房结与房室结，记录刺激前后的体表心电图，然后分别行免疫荧光显像和膜片钳研究。结果刺激迷走神经前，移植组和对照组均呈正常的窦性心律，两组无室性心律失常的发生；刺激迷走神经后，两组动物均出现异位的心室起搏心律，细胞移植组与对照组心室频率无差异。移植区冰冻切片免疫荧光分析可见EGFP标记的移植细胞具有肌钙蛋白I（cTnI）表达，说明分化细胞移植后仍具有心肌特性，且移植细胞与宿主心肌细胞间有连接蛋白43的表达，表明移植细胞与宿主心肌细胞间形成电偶联通道。膜片钳分析，绿色荧光细胞移植前后其具有起搏细胞动作电位的比例分别为（85．1％ VS 11．4％，P〈0．05），该类细胞在移植前后的起搏电流强度有所增强[（11．2±2．4）pA／pFVS（15．5±1．9）pA／pF，P〈0．05]。移植区分离的绿色荧光细胞中48％具有心室肌动作电位。结论胚胎干细胞早期分化来源的心肌细胞在体移植后能进一步分化为成熟的心室肌细胞及起搏细胞。; 易方方杨新春杨龙曹媛媛刘秀兰; 关键词：心肌细胞干细胞分化

小鼠胚胎干细胞早期分化的心肌细胞移植后的电生理特性的实验研究: 易方方

骨髓基质细胞移植治疗缺血性心脏病:影像学及间接免疫荧光法评估: 2006年; 目的:观察超声成像及间接免疫荧光技术在骨髓基质细胞移植治疗缺血心肌病方面的评估价值。方法:试验于2004-10/2005-10在武汉大学医学院心血管病研究所完成。选取20只大耳白兔开胸结扎左冠状动脉前降支建立心肌梗死模型后,存活18只,将其随机分为对照组和移植组两组。分别在造模前1天、造模后1周、骨髓基质细胞移植后4周行超声检查,测量左室前壁厚度、左室舒张末期内径、射血分数,左室前壁收缩期峰值速度、舒张早期峰值速度、舒张晚期峰值速度。对BrdU标记的移植细胞行抗肌钙蛋白T和Ⅷ因子免疫荧光检测,探讨其分化和转归。结果:20只大耳兔于造模后死亡2只,进入结果分析18只。①超声检查:移植组移植4周后左室舒张末期内径较对照组明显缩小[(12.2±1.9,14.9±2.3)mm,t=2.641,P<0.05]。移植组移植4周后射血分数、左室前壁收缩期峰值、舒张早期峰值速度明显高于对照组[(67.3±10.2,54.6±9.6)%,(10.2±1.9,7.0±2.1)cm/s,(10.9±2.7,7.9±2.6)cm/s]。②免疫荧光检测:部分移植细胞抗心肌特异肌钙蛋白T染色阳性,显示清晰的心肌横纹表明向心肌细胞分化;另有部分细胞Ⅷ因子为阳性,证实成功分化成为内皮细胞。结论:超声能够检测到兔梗死心肌MSCs移植后心肌局部运动与心脏功能的改善,其机制与其向心肌细胞及内皮细胞分化有关。; 李心怡蔡军易方方冯斯婷; 关键词：骨髓细胞缺血心肌

腺病毒介导HCN4通道基因过度表达构建生物起搏器的实验研究被引量：1: 2007年; 电子起搏器是窦房结功能障碍和重度房室传导阻滞的首选治疗。但是，目前使用的电子起搏器存在很多缺陷。最近的研究表明，介导起搏电流（If）的超极化激活环核苷酸门控通道基因（HCN4）在生理性起搏机制中扮演重要角色。在人类遗传性窦房结功能障碍家系中存在HCN4基因突变。而且，在HCN4基因敲除小鼠胚胎心脏记录不到具有4期自动除极特征的起搏细胞动作电位。最近，国外用HCN4腺病毒载体转染体外培养的心室肌细胞使其过度表达If电流，成功将其转变为“起搏”细胞并显著增加了搏动频率。; 杨新春易方方蔡军江洪林国生蒋学俊杨波胡莉华; 关键词：基因过度表达生物起搏器窦房结功能障碍重度房室传导阻滞细胞动作电位

白藜芦醇对大鼠心肌梗死后室性心律失常及长期存活率的影响被引量：4: 2009年; 目的研究白藜芦醇埘大鼠心肌梗死后室性心律失常、心室重构和长期存活率的影响。方法将SD大鼠随机分成假手术组、心肌梗死组、白藜芦醇治疗组（治疗组）。心肌梗死组和治疗组开胸结扎冠状动脉左前降支，假手术组不结扎。植入性射频发射器记录24h心电图，并分析心肌梗死后24h内室性心律失常发病率；侵入性在体电生理检测评价室性心律失常的诱发率；全细胞膜片钳技术检测白藜芦醇对单个心室肌细胞的电生理作用；免疫荧光染色观察心肌细胞的结构改变。结果与心肌梗死组相比，治疗组明显抑制了心肌梗死导致的室性心动过速和心室颤动发病率，治疗组室性心动过速的诱发率低于心肌梗死组，差异有统计学意义（46％VS81％，P〈0．01）。14周后，治疗组心肌梗死面积和死亡率较心肌梗死组分别下降了20％和33％。膜片钳记录显示白藜芦醇抑制了L型钙电流。免疫荧光染色发现治疗组心肌细胞横断面积小于心肌梗死组。结论白藜芦醇可以通过抑制大鼠心肌L型钙电流发挥抗心律失常作用，并抑制了左心室重构，提高了大鼠心肌梗死后的存活率。; 卞洲艳唐其柱易方方杨新春王腾唐艳红王晞蔡军; 关键词：白藜芦醇心肌梗死室性心律失常存活率

异甘草素对豚鼠心室肌细胞L型钙通道的影响被引量：10: 2006年; 目的:研究异甘草素对豚鼠单个心室肌细胞膜ICa-L通道的影响,旨在探讨其抗心律失常的机制。方法:采用全细胞膜片钳技术,观察不同浓度的异甘草素对ICa-L的作用。结果:①异甘草素能使I-V曲线明显上移。②异甘草素0.1-100μmol/L对ICa-L呈浓度依赖性的抑制作用。③3μmol/L异甘草素具有频率依赖性的抑制作用,它能使ICa-L稳态激活曲线右移、失活曲线左移,还能增加失活后恢复的τ值。结论:提示异甘草素对ICa-L通道的激活态和失活态有较高亲和力,这些可能成为其抗心律失常作用的机制。; 冯斯婷唐其柱易方方罗浩王腾; 关键词：异甘草素 L型钙电流全细胞膜片钳心室

HCN4通道基因过度表达的电生理实验研究被引量：1: 2007年; 目的探讨腺病毒介导超极化激活环核苷酸门控通道（HCN4）在猪左心室过度表达的电生理效应。方法应用细菌内同源重组法构建携带人HCN4基因的重组腺病毒载体（Ad-HCN4）和绿色荧光蛋白的重组腺病毒载体（Ad-GFP）。实验动物随机分成3组：Ad-HCN4组（n=6），Ad-GFP组（n=5）和PBS组（n=3）。腺病毒或PBS注入到Yorkshire猪左心室游离壁，3-4d后行房室结消融造成完全性房室阻滞，记录体表心电图并进行心内起搏标测。注射部位心肌组织用酶分离后获得单个心肌细胞，膜片钳记录起搏电流（If）和内向整流钾电流（Ik1）。结果Ad-HCN4组室性心律频率显著快于Ad-GFP组和PBS组，心腔内起搏标测证实该心律起源于Ad-HCN4注射区且可被异丙肾上腺素所调节，无水乙醇消融Ad-HCN4注射区后该心律消失。Ad-HCN4转染心肌细胞表达较大的If;Ik1在3组间差异无统计学意义。结论腺病毒介导HCN4通道基因心室局部高表达发挥了生物起搏器的作用。; 易方方杨新春蔡军李延辉刘秀兰; 关键词：生物起搏器基因治疗腺病毒

环孢素A对抑制外周血内皮祖细胞增殖活性的作用被引量：3: 2008年; 目的观察环孢素A（CsA）对培养的人外周血内皮祖细胞（EPCs）增殖和凋亡的影响。方法采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞，贴壁培养获得EPCs。比色法测定EPCs增殖能力；TUNEL染色检测EPCs凋亡情况；逆转录聚合酶链法检测EPCs凋亡相关基因的表达。观察不同浓度的CsA对EPCs增殖能力的作用；用10mg／L的CsA干预24h和48h对EPCs增殖能力的影响，以及干预48h对EPCs凋亡以及凋亡蛋白酶-3（caspase-3）、凋亡调控基因bcl2和bax表达的影响。结果100μg／L的CsA能明显抑制EPCs的增殖，CsA在10～10000μg／L浓度范围内，抑制作用成浓度依赖性。10mg／L的CsA明显增加EPCs的凋亡和caspase-3基因表达，抑制bcl2基因表达而减小bcl2／bax比值。结论CsA能明显抑制培养的人外周血EPCs增殖、增加其凋亡；抑制bcl2基因表达是其诱导EPCs凋亡的机制之一。; 杨龙杨军珂杨新春葛永贵易方方范谦刘秀兰; 关键词：免疫抑制剂干细胞环孢菌素

由胚胎干细胞分化的心肌细胞移植对心肌梗死大鼠左心室重构及心功能的影响被引量：3: 2007年; 目的探讨小鼠胚胎干细胞（ES）分化的心肌细胞移植对SD大鼠心肌梗死后左心室重构及心功能的影响。方法采用悬滴-悬浮培养法诱导ES分化形成拟胚体。其中包含有大量心肌细胞。将雄性SD大鼠冠状动脉左前降支结扎。制成急性心肌梗死模型。1周后再次开胸。实验组于梗死区域注入心肌细胞悬液150μl（含细胞5×10^5个），梗死对照组于梗死区域注入等体积细胞培养液，另设假手术组，不结扎冠状动脉。心肌梗死后1周和细胞移植后4周，采用超声心动图评价大鼠左心室形态和功能，用免疫荧光技术检测移植细胞的存活及其表型。结果免疫荧光技术检测到分化的心肌细胞表达特异性转录因子α辅肌动蛋白、α肌球蛋白重链和肌钙蛋白1；逆转录聚合酶链反应检测到有心肌特异性转录因子Nkx-2．5、GATA-4及α肌球蛋白重链基因的表达；膜片钳记录显示所得到的分化的心肌细胞包括窦房结样起搏细胞、心房样细胞和心室样细胞。细胞移植后4周。与梗死对照组相比，实验组左心室收缩末期容积和舒张末期容积均显著缩小，左心室前壁舒张末期厚度明显增加（P〈0．01）。左室长轴缩短率显著升高（P〈0．01）。心脏组织冰冻切片可见4,6-联脒-2-苯基吲哚标记的呈蓝色荧光的移植细胞核。移植细胞表达肌钙蛋白I，移植细胞与受者的心肌细胞间有连接蛋白-43的表达。实验组中有2只（12．5％。2／16）出现了心脏畸胎瘤。结论由胚胎干细胞分化的心肌细胞移植可逆转心肌梗死大鼠左心室重构。改善左心室功能。; 杨新春易方方蔡军曾彬罗浩; 关键词：细胞移植干细胞心室重构心室功能

白藜芦醇对豚鼠心室肌细胞L-型钙通道的影响被引量：10: 2006年; 目的:研究白藜芦醇对正常豚鼠心室肌细胞L-型钙电流(ICa-L)的影响.方法:采用全细胞膜片钳技术,记录不同浓度白藜芦醇作用前后对ICa-L的影响.结果:①白藜芦醇呈浓度依赖性阻断ICa-L,但对激活电位、峰电位、反转电位均没有影响;②白藜芦醇使ICa-L稳态激活曲线右移,V1/2由对照的(-18.97±4.08)mV变为(-15.97±4.13)mV(n=7,P=0.02),κ由(3.64±0.56)变为(3.82±0.60)(n=7,P=0.67);③对失活曲线无影响,不改变ICa-L失活特性;④白藜芦醇使ICa-L失活后再恢复时间常数τ缩短,从(98.50±9.00)m s变为(54.53±4.27)ms(n=6,P=0.000).结论:白藜芦醇对ICa-L有阻断作用,主要作用于钙通道激活和恢复过程.; 易方方唐其柱冯斯婷王腾; 关键词：白藜芦醇全细胞膜片钳钙电流

渝B2-20050021-1　渝公网安备 50019002500403号　违法和不良信息举报中心　互联网出版许可证　新出网证(渝)字10号

易方方

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

易方方

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈