李书涛
- 作品数：4 被引量：15H指数：2
- 供职机构：华中科技大学生命科学与技术学院资源生物学与生物技术研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”国家大学生创新性实验计划项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 筛选dbat启动子顺式元件结合蛋白的酵母单杂交文库的构建被引量：6
- 2009年
- 旨在构建酵母单杂交文库用于筛选与dbat基因启动子顺式元件结合的转录因子。首先,分离dbat启动子上的顺式作用元件,并进行3个拷贝的重复后,和报告质粒pHis 2.1连接构建诱饵载体pHis 2.1-dp3。然后,从茉莉酸甲酯诱导的红豆杉细胞中提取总RNA,以纯化出的mRNA为模板,依次完成ss cDNA和ds cDNA的合成,并将纯化的ds cDNA、线性化载体pGADT7-Rec2和诱饵载体pHis 2.1-dp3共转化酵母细胞Y187,各取100μl分别涂布于SD/-leu和SD/-leu/-trp平板,用于计算重组效率和转化效率,剩余转化液涂布于SD/-leu/-trp/-his/20 mM3-AT平板,用于筛选阳性克隆。结果表明,重组效率为1.49×106CFU/μg,共转化效率为1.93×105CFU/μg;对阳性克隆质粒进行酶切、测序分析,得到6个可编码结合蛋白的基因。以上工作为筛选调控紫杉醇合成关键酶基因dbat表达的转录因子奠定了基础。
- 姚瑞枫张蒙张鹏李书涛陈丽付春华余龙江
- 关键词：红豆杉细胞结合蛋白转录调控
- 调控紫杉醇合成转录因子TcMYC和TcWRKY1的克隆及功能研究
- 植物细胞培养是一种最有希望解决紧缺次生代谢物来源的方法，然而植物细胞培养生产次生代谢产物如紫杉醇的产量较低。紫杉醇是来源于红豆杉的具有广谱抗肿瘤作用的二萜类生物碱，当前市场需求大，药物来源紧张。红豆杉细胞培养生产紫杉醇是...
- 李书涛
- 关键词：红豆杉紫杉醇启动子转录因子
- 文献传递
- 过表达Dbtnbt基因提高中国红豆杉细胞的紫杉醇含量被引量：2
- 2014年
- 本文通过克隆3'-N-去苯甲酰紫杉醇N-苯甲酰转移酶(3'-N-debenzoyltaxol Nbenzoyltransferase,DBTNBT)基因Dbtnbt,构建其表达载体p1303-SDbtnbtN,转化中国红豆杉细胞,经潮霉素抗性筛选获得转基因细胞系.转基因细胞分析结果表明,T-DNA及其包含的基因与宿主细胞染色体成功整合;转基因细胞中报告基因GusA-mgfp5正常表达;转基因细胞的Dbtnbt mRNA表达量是未转化细胞的1.33倍;转基因细胞的紫杉醇产量约为27.3μg/g,是未转化细胞的1.37倍.本研究结果表明,过表达Dbtnbt基因将中国红豆杉细胞的紫杉醇产量提高约37%.
- 张鹏张鹏李书涛付春华周蓬蓬宋发军
- 关键词：红豆杉过表达紫杉醇
- ggpps 5'-侧翼序列的克隆及其启动子功能验证被引量：2
- 2010年
- 目的:研究牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶(geranylgeranyl diphosphate synthase,GGPPs)基因启动子的活性;方法:从曼地亚红豆杉细胞中克隆ggpps基因5'-侧翼序列,并将该侧翼序列代替pBI121质粒上的CaMV35S启动子,以Gus基因作为报告基因构建植物表达载体,并进一步导入农杆菌LBA4404中获得阳性转化子,然后用叶盘转化法验证该侧翼序列的启动子活性;结果:本研究从曼地亚红豆杉细胞中成功克隆了ggpps基因的5'-侧翼序列,并且验证了该侧翼序列具有启动子活性;结论:ggpps基因的5'-侧翼序列的测序结果表明本实验成功克隆了该侧翼序列,启动子功能验证结果表明ggpps5'-侧翼序列具有启动子活性,这些结果为进一步的通过缺失法进行ggpps基因启动子功能研究奠定了基础。
- 郭佳玉李佟清李书涛张鹏张鹏付春华
- 关键词：紫杉醇启动子活性
