李秀珍
- 作品数：17 被引量：32H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 低分子量尿激酶与血纤蛋白粘附肽(12肽)融合表达及特性分析
- 1997年
- 人工合成血纤蛋白粘附肽（１２肽）ｃＤＮＡ，与低分子量单链尿激酶基因重组，获得血纤蛋白粘附肽与低分子量单链尿激酶的融合基因。将此融合基因重组入ｐＢＶ２２０表达载体并在大肠杆菌中表达，表达产物具有与天然尿激酶相同的抗原性和溶纤活性。
- 李秀珍张用书程度胜刘凤云
- 关键词：抗凝活性
- 人尿激酶原在CHO细胞中的基因扩增与高效表达被引量：1
- 1993年
- 本文通过基因共转染和基因共扩增方法,在SV40病毒晚期启动子控制下成功地在中国仓鼠卵巢细胞二氢叶酸还原酶缺陷株(CHO-DHFR^-)中高效表达了人尿激酶原,其表达水平在5×10^(-6) mol/L氨甲喋呤存在下可达2—3μg/10~6细胞/24 h。采用PMA诱导可将表达水平提高至3.5—4μg/10~6细胞/24 h。相应的Pro-UKcDNA在细胞基因组上整合的拷贝数为200—300拷贝/细胞。Western blot分析表明,表达出来的重组Pro-UK与天然Pro-UK具有相似的分子量:S_(2444)测活法证明重组Pro-UK具有体外酰胺水解活性。
- 张宏权李风知俞炜源李秀珍方继明费恩阁黄翠芬
- 关键词：尿激酶原CHO细胞基因扩增
- 人尿激酶原cDNA在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中高效表达研究被引量：3
- 1993年
- 通过构建高效表达载体,改进转染方法,与二氢叶酸还原酶(dhfr)基因共扩增等手段在CHO细胞内高效表达了人尿激酶原(Pro-UK)cDNA。首先将pro-UK cDNA插入到SRα启动子的下游,构建成表达质粒pMG10102,在COS-7细胞内进行暂时性表达,结果表明此启动子的表达水平比SV40早期启动子高约5倍。然后将质粒pMG10102和pSV2-dhfr线性化后用磷酸钙共沉淀法转染CHO-dhfr^-细胞,经一系列筛选后获得20个能表达pro-UK的细胞克隆,纤维蛋白溶解平板法(FAPA)测定表达水平为12.5—100IU/10~6 cells/d.再经MTX加压共扩增,得到9株高表达细胞系,其中最高的表达水平达到400—500IU/10~6 cells/d。经2—3个月连续传代,表达水平未下降,表明细胞株是稳定的。Western Blot分析证明细胞分泌的重组pro-UK具有与天然pro-UK相同的分子量,而且培养液中不加蛋白酶抑制剂时,分泌的重组UK大部分为单链(60%以上)。
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- 关键词：尿激酶原CDNA基因工程
- 人尿激酶原cDNA片段克隆及鉴定
- 1990年
- 尿激酶(UK)是一种在人肾合成并由人尿释放的一种纤溶酶原激活剂,可用于治疗血拴病。现已发现有四种不同分子形式的尿激酶。有关尿激酶原cDNA的克隆及表达已有文献报道。本文报道经反转录途径获得一个含人尿激酶原cDNA片段的克隆,并进行了酶切及核苷酸序列分析鉴定。
- 李秀珍唐红娣关雪妮李凤知胡宝成方继明
- 关键词：尿激酶克隆
- 水蛭素12肽和尿激酶B链融合基因的构建与表达
- 1994年
- 尿激酶原是一种溶栓效果好、副作用小的溶栓药物。经研究证明尿激酶B链(即pro-UK的144-411aa)具有与尿激酶原相似的溶栓性,即对血栓溶解具有特异性,引起系统性出血副作用小。水蛭素是一种分离自医用水蛭、由65个氨基酸残基组成的单链多肽,能特异、高亲和性地抑制凝血酶的活性,研究证明它各方面的性能都优于肝素。近年来,通过多肽合成方式对水蛭素结构与功能进行了大量研究,确定水蛭素C端12肽是一个具有抗栓功能的结构片段。由于它对凝血酶的高度亲和性。
- 刘凤云李秀珍李凤知程度胜
- 关键词：尿激酶原水蛭素融合基因B链溶栓效果血栓溶解
- 开发中的抗栓剂——水蛭素及其12肽被引量：1
- 1995年
- 血栓病是严重危害人类生命与健康的疾病,多年来人们一直在致力于寻找和研制治疗血栓病的有效药物。至今,已有尿激酶、链激酶,组织型纤溶酶原激活剂以及尿激酶原等溶栓药物。与此同时人们也一直在寻找效果更好的抗栓药物。水蛭素就是一种正在开发的抗栓药物。早在1884年就发现了水蛭素。
- 李秀珍
- 关键词：水蛭素抗栓剂抗凝活性硫酸化抗凝血酶纤维蛋白原
- 一种高比放 DNA 探针的制备方法及其应用被引量：1
- 1990年
- 随机引物法标记 DNA 探针是一种高比放、高灵敏度的 DNA 探针标记法。DNA 标记比放可达9.0×10~8cpm/μg DNA,比缺口平移法标记的比放高约9倍。因此法标记的 DNA 探针在分子杂交试验中均获得良好的结果。
- 关雪妮李秀珍唐红娣方继明
- 关键词：DNA探针
- 新型溶血栓剂——低分子量单链尿激酶被引量：2
- 1991年
- 尿激酶是由人肾合成人尿释放的一种血纤溶酶原激活剂(Plasminogen Activator)。尿激酶以多种分子形式存在,主要有三种,一种是高分子量双链尿激酶,它的分子量为54000道尔顿,由A、B两条肽链组成,A、B二链由二硫键相连。第二种是低分子量双链尿激酶,分子量为33000道尔顿。
- 李秀珍方继明
- 关键词：尿激酶
- 尿激酶B链cDNA及其与水蛭素12肽cDNA融合基因的构建
- 1994年
- 尿激酶原是一种溶栓效果好、副作用小的溶栓药物。研究证明尿激酶B链,即低分子量单链尿激酶,具有与尿激酶原相同的溶栓特性,对血栓溶解具有特异性,引起系统性出血的副作用较小,有可能成为一种较为理想的溶栓药物。它的氨基酸序列相当于尿激酶原的144～411aa,国外已通过缺失突变获得了它的结构基因,并在中国仓鼠卵巢细胞中表达成功。由于尿激酶B链分子量较小,且含尿激酶原的酶活功能区,
- 李秀珍刘凤云李风知程度胜
- 关键词：尿激酶原融合基因水蛭素溶栓效果
- 尿激酶分子系统与肿瘤被引量：6
- 1996年
- 介绍了尿激酶分子系统与肿瘤关系方面的研究进展，包括尿激酶分子系统介导的肿瘤浸润与转移，尿激酶分子系统与肿瘤发生、发展的关系，尿激酶分子系统作为肿瘤的预后标志以及与尿激酶分子系统相关的抗肿瘤转移治疗研究。
- 张用书李秀珍
- 关键词：尿激酶肿瘤分子系统
