滕悦秋
- 作品数：5 被引量：4H指数：1
- 供职机构：哈尔滨医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省杰出青年科学基金黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组血红素加氧酶-2在大肠杆菌中的表达及纯化
- 血红素加氧酶(HO)是催化血红素降解的关键酶.至今已发现3种同工酶:HO-1、HO-2、HO-3.HO-2属组织型,分子量为34-36kD,主要分布在脑及睾丸组织中.目的:将重组的血红素加氧酶-2在大肠杆菌中表达并纯化....
- 滕悦秋
- 关键词：纯化
- 文献传递
- 重组血红素加氧酶-2在大肠杆菌中表达与纯化方法的研究
- 2004年
- 目的 确定重组血红素加氧酶 2在大肠杆菌中表达与纯化方法。方法 将已构建的血红素加氧酶 2(HO 2 )的重组质粒pMW1 72a HO 2转入大肠杆菌BL 2 1 ,分析不同温度及摇床转速对HO 2表达的影响 ,确定可溶性表达最佳条件。使用超声波、超速离心、分级盐析、分子筛层析等方法纯化HO 2。检测酶活性。结果 确定了HO 2可溶性表达最佳条件为 37℃ ,(85± 5 )r min ;确定了HO 2具体纯化路线。得到蛋白纯度为 95 .0 % ,纯化倍数为 2 .9倍 ,收得率为 4 0 .9%的活性HO 2蛋白。结论 获得了纯度高、具有活性的HO 2蛋白 ,为进一步进行HO
- 滕悦秋王秀宏赵炜明王志刚刘明周虹
- 关键词：大肠杆菌基因表达纯化
- 重组NADPH-细胞色素P450还原酶在大肠杆菌中的表达和纯化被引量：1
- 2004年
- 目的 在大肠杆菌中表达重组NADPH -细胞色素P4 5 0还原酶 (CPR)并纯化获得有活性的CPR蛋白。方法 将已构建的NADPH -细胞色素P4 5 0还原酶重组质粒pMW1 72a CPR采用温和转化法转入大肠杆菌BL 2 1中 ,依次使用超速离心、DE5 2纤维素阴离子交换层析和 2′ 5′ADP亲和层析的方法纯化CPR ,并检测酶的活性。结果 获得了纯度达 99%以上的可溶性CPR蛋白 ,纯化倍数 5 .2 0倍 ,检测酶的比活性为每分钟 1 0 4 5 .4 9nmol mg。结论 获得了纯度高、有活性的CPR蛋白 ,可作为工具酶用于某些相关酶的研究 。
- 王志刚王秀宏滕悦秋刘明周虹
- 关键词：大肠杆菌基因表达CPR生物医学
- 精氨酸残基和赖氨酸残基对大鼠血红素加氧酶-1催化功能的影响被引量：1
- 2004年
- 目的研究和探讨大鼠血红素加氧酶鄄1(RHO鄄1)中保守的碱性氨基酸精氨酸残基和赖氨酸残基对该酶催化功能的影响。方法应用定点诱变制备20种RHO鄄1的变异型酶质粒,其中RHO鄄1中保守的碱性氨基酸精氨酸和赖氨酸被置换成谷氨酸,将它们在大肠埃希菌中表达并纯化后,用光谱扫描方法在以NADPH-细胞色素P鄄450还原酶提供电子的模拟体内反应体系下测定变异型酶和野生型酶的活性,从而观察变异型酶的活性是否发生改变。结果变异型酶R35E、K39E、R44E、R136E、K148E、K149E、K153E、R185E和K196E对血红素的降解速度低于野生型酶。结论R35等9个精氨酸残基和赖氨酸残基在参与RHO鄄1催化血红素降解的反应中对该酶的催化功能有着重要影响。
- 王秀宏赵炜明滕悦秋王志刚刘明周虹
- 关键词：血红素加氧酶-1氧化应激地方病
- 血红素加氧酶在大肠杆菌中稳定表达的氨基酸范围的研究被引量：2
- 2004年
- 目的 确定在原核细胞中呈可溶性稳定表达但不改变活性的血红素加氧酶氨基酸范围。方法 应用PCR技术构建了鼠血红素加氧酶 1(RHO 1)和人血红素加氧酶 2 (HHO 2 )的N端和C端部分氨基酸缺失的变异型RHO 1和HHO 2 ,将它们在大肠杆菌中表达并纯化后通过光谱扫描法测定变异型酶与野生型酶的催化活性 ,确定RHO 1和HHO 2中的N端和C端缺失不影响其可溶性表达及催化活性的氨基酸范围。结果 △N8RHO 1(N端缺失 8个氨基酸的RHO 1)和△C70RHO 1在大肠杆菌中表达为可溶性蛋白且催化活性与RHO 1野生型相同 ,△N2 0HHO 2和△C77HHO 2在大肠杆菌中也表达为可溶性蛋白且催化活性与HHO 2野生型相同 ,而△N9RHO 1和△C75RHO 1在大肠杆菌中表达为包涵体。结论 RHO 1和HHO 2的N端和C端部分氨基酸缺失的突变型酶对其催化功能没有影响 ,并可在大肠杆菌中稳定可溶性表达。
- 王秀宏滕悦秋王志刚刘明周虹
- 关键词：血红素加氧酶大肠杆菌催化活性
