牛永东
- 作品数：31 被引量：106H指数：7
- 供职机构：汕头大学医学院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>
- 大鼠法尼酯X受体慢病毒构建及鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的:构建大鼠法尼酯X受体(rFXR)慢病毒,为研究FXR在原发性肝细胞癌中的分子机制奠定基础。方法:以pCMX-rFXR(NM_021745.1)为模板,将rFXR克隆到pWPXL表达载体中,酶切及DNA测序鉴定后转染HEK293T细胞,包装重组慢病毒rFXR sh-RNA。Western blot鉴定后,感染Huh7细胞进行功能检测。结果:证实pWPXL-rFXR sh-RNA构建及病毒包装成功;感染Huh7后,rFXR表达明显提高:FXR靶基因SHP和BSEP的表达增加。结论:pWPXL-rFXR sh-RNA慢病毒构建及包装成功,为研究FXR的生物学功能奠定基础。
- 牛永东陈理明吴曼鹏程訸张艳美黄展勤石刚刚
- 关键词：法尼酯X受体慢病毒原发性肝细胞癌
- 新生仔鼠黄曲霉毒素的肾毒性研究被引量：1
- 2014年
- 目的:探讨黄曲霉毒素(AF)B1暴露对新生仔鼠肾脏的影响。方法:CCK-8细胞毒性和动物染毒实验观察AFB1对肾细胞的影响。结果:与对照组比,实验组对HEK293细胞株的细胞毒性不明显,肾组织切片镜下表现为肾小管管腔形状不规则,管壁细胞形态明显异常;被膜下细胞空泡明显,且体质量显著低于对照组(P<0.05)。结论:未经肝脏代谢的AFB1对HEK293的细胞毒性不明显;7μg/kg的AFB1足以引起5日龄新生仔鼠肾脏损伤;并可能会引起小鼠机能代谢失衡,导致体质量减轻。
- 牛永东程訸陈理明荣举吴曼鹏徐涵张艳美石刚刚
- 关键词：黄曲霉毒素肾毒性
- 白桦酯醇对食管癌细胞EC109的抑制作用被引量：12
- 2006年
- 背景与目的白桦酯醇是一种重要的三萜类生物活性分子,本文从白桦树皮中提取获得白桦酯醇纯品,然后研究该生物活性分子抑制食管癌细胞的活性。材料与方法取一定量的白桦树皮干粉,通过乙醇回流,减压浓缩和甲醇-氯仿重结晶等步骤获得白桦酯醇纯品。用不同剂量的白桦酯醇作用于EC109食管癌细胞48h,噻唑蓝(Methylthiazoletetrazolium,MTT)法检测细胞抑制率。结果白桦酯醇作用于食管癌细胞EC109后,EC109细胞形态发生明显改变,细胞抑制率随白桦酯醇浓度的增高而增高,呈现剂量依赖关系。结论白桦酯醇对食管癌细胞EC109有明显抑制活性。
- 蔡唯佳马云青祁逸梅牛永东许丽艳李建新李恩民
- 关键词：白桦酯醇食管癌细胞抗肿瘤活性
- 反义封闭NGAL基因表达对SHEEC食管癌细胞微丝骨架的影响被引量：14
- 2004年
- 为了研究反义封闭NGAL基因表达对SHEEC食管癌细胞微丝骨架以及肿瘤细胞生物学行为的影响 ,以不同长度NGAL基因片段反义表达载体和硫代修饰反义寡核苷酸单链片段转染SHEEC食管癌细胞 ,通过G4 18筛选 ,建立一系列旨在封闭SHEEC食管癌细胞NGAL基因表达的亚细胞克隆 .在细胞内F 肌动蛋白 (F actin)及DNA荧光双标记基础上 ,通过流式细胞术、激光共聚焦显微镜扫描术等技术手段检测封闭反义NGAL基因表达后 ,SHEEC食管癌细胞中F actin和DNA含量、F actin形态结构以及肿瘤细胞生物学行为的变化特征 .结果显示 ,反义封闭NGAL基因表达后 ,SHEEC食管癌细胞F actin的含量明显降低 ,与永生化食管上皮细胞SHEE相近 ,但细胞分裂增殖指数未见明显变化 .表明反义封闭NGAL基因表达对SHEEC食管癌细胞的微丝骨架有明显影响 ,而对SHEEC食管癌细胞的分裂增殖影响不明显 .激光共聚焦显微镜扫描观测显示 ,反义封闭NGAL基因表达可使SHEEC食管癌细胞F actin分布均匀 ,F actin小体减少 ,细胞间连接重新建立 ,结构较紧密 ,主要形态结构特征与SHEE细胞趋于一致 .提示反义封闭NGAL基因表达可对SHEEC食管癌细胞的微丝骨架F actin产生明显影响 ,推测癌细胞的微丝骨架F
- 林珏龙许丽艳李恩民蔡唯佳牛永东方昆阳熊华淇沈忠英曾毅
- 关键词：微丝骨架F-肌动蛋白NGAL基因细胞周期
- 核受体PXR在宫颈鳞癌组织及SiHa细胞中的表达及临床意义
- 2014年
- 目的:探讨核受体孕烷X受体(PXR)在宫颈鳞癌组织的表达及与宫颈鳞癌发生的关系。方法:采用免疫组织化学及细胞免疫化学检测核受体PXR在41例宫颈癌组织及宫颈鳞癌细胞株SiHa中的表达。结果:PXR在宫颈鳞癌细胞株SiHa中有表达;正常宫颈组织有PXR表达,41例宫颈鳞癌组织中PXR的阳性率为59.5%,且宫颈癌组织中明显低表达。结论:PXR的表达水平与宫颈癌的发生有一定的相关性,可能成为今后判断宫颈癌预后有价值的标志物。
- 郑燕珊吴曼鹏倪仰鹏陈理明程訸徐涵牛永东
- 关键词：PXR宫颈鳞癌肿瘤发生
- 从食管癌细胞系SHEEC中克隆调控NGAL基因的NF-κB因子的初步研究
- 近年来,有研究发现NGAL(neutrophil gelatinase—associated lipocalin)可能是人类的一新的癌基因,在食管上皮细胞癌变等过程中显著过表达,但表达调控机制不清。序列分析发现,在NGA...
- 牛永东
- 关键词：酵母单杂交系统核因子NF-ΚBNGAL基因食管癌
- 文献传递
- NGAL基因5’侧翼区启动子区的克隆与鉴定被引量：1
- 2005年
- 目的对NGAL(neutrophilgelatinase-associatedlipocalin)基因5′侧翼区的转录调控启动子区进行分段定位鉴定。方法将NGAL基因5’侧翼区-416^+84和-152^+84两个区段分别克隆至专门用于研究启动子的报告基因表达载体pGL3-Enhancer(pGLE)中,构建表达载体pGLE-416和pGLE-152;然后将pGLE-152和pGLE-416分别与pRL-TK载体共转染HeLa细胞、EC109细胞和Vero细胞,通过检测相对荧光素酶活力,确认这些NGAL基因片段中是否含有启动子元件。结果与pGLE相比,pGLE-152在上述三种细胞中的相对荧光强度均明显增强(P<0.05),且在不同的细胞中增强的幅度明显不同。结论NGAL基因的启动子位于-152^+84区段内,启动子的强弱具有细胞特异性,这可能与增强子的协同作用相关联。
- 黄瑞燕许丽艳许晓玲方栩佳陈波牛永东李恩民
- 关键词：启动子NGAL肿瘤细胞基因表达调控荧光素酶
- 食管癌细胞NGAL基因-152～-60区段存在TPA反应元件被引量：6
- 2006年
- 以往研究发现,在TPA诱导永生化食管上皮细胞癌变中中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(neutrophilgelatinase-associatedlipocalin,NGAL)基因过表达,但过表达机制不明.最近研究提示,食管癌细胞NGAL启动子及其邻近区域可能存在着TPA反应元件.为了对NGAL的这一TPA反应元件进行更准确定位,采用PCR法结合嵌套缺失实验从食管癌细胞中克隆了NGAL5′侧翼区-152～+84、-140～+84、-78～+84、-59～+84、-50～+84、-41～+84、-37～+84、-29～+84和-10～+84等片段,并定向插入pGLB、pGLP或pGLE等萤火虫荧光素酶报告基因表达载体中,构建了pGLB-152、pGLP-152、pGLE-152、pGLB-140、pGLB-78、pGLB-59、pGLB-50、pGLB-41、pGLB-37、pGLB-29和pGLB-10等系列报告基因表达载体.将上述报告基因表达载体分别同pRL-TK共转染食管癌细胞EC109,并用TPA刺激,检测TPA刺激转染EC109的相对荧光素酶活力,综合判定NGAL-152～+84区不同长度片段的TPA反应性,对NGAL启动子区的TPA反应元件给予进一步分段定位.结果表明,NGAL启动子区的TPA反应元件位于-152～-60区段,而且应答TPA刺激的反应能力很强.生物信息学分析结果显示,NGAL启动子区所存在的TPA反应元件很可能是一种新结构类型.研究说明,NGAL在DNA序列上有应答TPA刺激的结构基础,将有助于深入到分子水平揭示TPA诱导永生化食管上皮细胞癌变中NGAL过表达机制,也有助于进一步认识TPA信号细胞内传递途径网络在肿瘤发生发展中的作用.
- 许丽艳李恩民牛永东蔡唯佳袁华敏常静霞沈忠英曾毅
- 关键词：食管癌细胞基因表达调控
- 食管鳞癌中HPV-16/18感染与c-erbB-2、p53和Rb表达及其意义被引量：11
- 2002年
- 目的 :探讨食管鳞癌组织中人乳头瘤病毒HPV 16 / 18感染与c erbB 2、p5 3和Rb表达及其意义。方法 :采用聚合酶链反应 (PCR)法检测 90例活检存档的食管鳞癌蜡块中HPV 16 / 18的感染情况 ,从中随机选择 2 0例 ,采用免疫组化法检测单独的HPV 16感染及c erbB 2、p5 3和Rb表达。结果 :PCR检测食管癌组织HPV 16 / 18的感染率为 31 1% (2 8/ 90 ) ;免疫组化法检测食管癌组织中单独的HPV 16的感染率为 5 5 % (11/ 2 0 )。食管癌组织表达c erbB 2、Rb和p5 3和Rb的阳性率分别为 75 % (15 / 2 0 )、6 5 % (13/ 2 0 )和 80 % (16 / 2 0 )。HPV 16感染与c erbB 2、Rb和p5 3表达之间未见相关性。HPV 16感染以及c erbB 2、p5 3和Rb表达与淋巴结转移之间差异无显著性 (P >0 0 5 )。p5 3表达与食管癌组织学分级之间差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,而HPV 16感染以及Rb和c erbB 2表达与食管癌组织学分级之间差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论 :食管癌组织中HPV 16 / 18感染与c erbB 2、p5 3和Rb表达之间的关系是复杂的 ,尚有待于进一步研究。
- 牛永东李恩民吴贤英郑瑞明沈忠英许丽艳
- 关键词：食管鳞癌C-ERBB-2P53RB
- 流体动力学基因转染技术构建乙肝病毒HBx蛋白瞬时表达小鼠模型
- 2017年
- 目的:构建乙肝病毒HBx蛋白瞬时表达小鼠模型,为研究HBx在HBV感染相关原发性肝细胞癌发生中的分子机制奠定基础。方法:8只6~8周龄雄性CD-1小鼠,尾静脉注射真核表达质粒pc DNA-HBx及空载体pc DNA3.0,6~8 h处死小鼠并收集肝组织,抽提RNA及蛋白。RT-PCR和Western blot检测HBx表达情况;实时荧光定量PCR检测FXR靶基因SHP和Cyp7a1的m RNA表达。结果:核酸和蛋白水平上,pc DNA-HBx注射组小鼠肝脏内均可检测到HBx的表达;空载体对照组肝组织中未检测到HBx的表达;肝组织中瞬时过表达的HBx可以有效调控FXR通路下游靶基因SHP和Cyp7a1的m RNA表达。结论:成功实现了HBx在小鼠肝脏中的瞬时高表达,为今后整体水平上研究HBx提供了有效的动物模型。
- 黄丹梅吴曼鹏黄晓华张莹倪仰鹏牛永东
- 关键词：流体动力学尾静脉注射HBX
