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田甜
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1
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供职机构:
首都师范大学生命科学学院
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相关领域:
生物学
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合作作者
刘晓晴
首都师范大学生命科学学院
张宗棋
首都师范大学生命科学学院
王妮莎
首都师范大学生命科学学院
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中国生物化学...
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2014
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嗜热菌HB8 Fe-S簇生物合成相关酶SufS与SufE重组酶的体外复合体功能
2014年
Fe-S簇在细胞的生物学过程中发挥重要作用,参与电子传递和基因调节等过程.以嗜热菌HB8基因组为模板,通过PCR扩增获得Fe—S簇SUF系统生物合成途径中的sufS与sufE两个基因.将目的基因分别连接到表达载体pET28a和pGEX-6P-1上,构建重组质粒,CS-pET28a和sufE-pGEX-6P-1.重组质粒转化E.coli BL21(DE3)菌株进行蛋白质表达及亲和层析纯化.研究证明,sufS具有脱硫酶活性,而SufE的存在可增强其活性.体外重组实验表明,在60℃孵育SufS和SufE1.0~2.5h,其复合体脱硫酶活性约是单体sufS的2倍,但两者相互作用时间短暂.若通过交联剂Mts—Aft-Biotin使SufS与sufE共价连接,此时SufsE酶活性是SufS的6倍左右,并可持续72h.
张宗棋
田甜
王妮莎
刘晓晴
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FE
交联剂
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