赵海玲
- 作品数：17 被引量：24H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家重点基础研究发展计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 胸膜肺炎放线杆菌体内表达基因的筛选被引量：8
- 2008年
- 利用体内诱导抗原技术对胸膜肺炎放线杆菌（APP）体内表达的基因进行了初步筛选。将收集到的5份感染了APP1型的猪血清混合．分别用体外培养的APP1和大肠杆菌BL21（DE3）的全菌及全菌裂解物进行吸附。用ELISA方法检测吸附效果，经吸附后血清D150nm分别由原来的0．927和0．239降低为0．196和0．078。同时,将APP1基因组DNA以Bsp143I进行酶切，回收500～2000bp的片段，与pET30a／b／c载体连接，构建了APP1基因组质粒表达文库，库容量（CFU）为2．0×10^5。用吸附后的血清通过菌落原位免疫杂交筛选该基因组表达文库，从3000个菌落中获得了12个阳性克隆。
- 刘慧芳刘思国王春来司微王聃杜艳芬赵海玲赫明雷
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌
- 胎儿弯杆菌表面蛋白(SapA)基因的分段表达及其免疫原性分析被引量：7
- 2008年
- 应用PCR方法扩增出胎儿弯杆菌表面蛋白基因(SapA)的2个基因片段SapA-N(1398bp)和SapA-C(1422bp),采用DNA重组技术,将2个基因片段分别连接于表达载体pET32a(+),并在大肠杆菌中诱导表达(rSapA-N和rSapA-C),用金属鳌合层析的方法纯化蛋白。以Western blot检测重组蛋白的免疫学活性,ELISA试验分析2种蛋白用于胎儿弯杆菌病血清学诊断的可能性。结果表明,以可溶形式表达的2部分蛋白分子量大小约66ku,与预期大小相符。纯化的蛋白均具有良好的免疫学活性,但蛋白rSapA-N比蛋白rSapA-C的免疫学活性高,rSapA-N具有良好的胎儿弯杆菌病血清学诊断的应用价值。
- 赵海玲刘思国刘慧芳王春来司微杜艳芬杨金国林靖凯
- 关键词：原核表达纯化ELISA
- 利用Red重组系统敲除大肠杆菌菌株ClpP基因方法的研究被引量：1
- 2011年
- 为了研究ClpP基因的功能,试验利用Red系统的重组功能,通过PCR扩增出两端与大肠杆菌菌株ClpP基因上、下游序列同源,中间为氯霉素抗性基因cat的DNA片段,电击转化含质粒pKD46的大肠杆菌菌株DH091,筛选替换ClpP基因的阳性转化子,再导入质粒pCP20去除氯霉素抗性基因。结果表明:成功敲除大肠杆菌菌株ClpP基因。
- 司微刘慧芳王春来彭玮赫明雷杜艳芬赵海玲王聃杨金国林靖凯倪洪波刘思国
- 关键词：RED重组系统基因敲除
- 胎儿弯杆菌表面蛋白(SapA)基因的分段表达及其免疫原性分析
- 应用PCR方法扩增出胎儿弯杆菌表面蛋白基因(SapA)的2个基因片段SapA-N(1398 bp)和SapA-C(1422bp),采用DNA重组技术,将2个基因片段分别连于表达载体pET32a(+),并在大肠杆菌中诱导表...
- 赵海玲刘思国刘慧芳王春来司微杜艳芬杨金国林靖凯
- 关键词：原核表达纯化ELISA
- 文献传递
- 胎儿弯杆菌表面蛋白SapA间接ELISA检测方法的建立及其单克隆抗体的制备
- 本研究应用PCR方法扩增出胎儿弯杆菌表面蛋白基因（SapA）的2个基因片段SapA—N（1398bp）和SapA—C（1422bp），将2个基因片段分别连于表达载体pET32a（+），在大肠杆菌BL21中诱导表达，用Ni...
- 赵海玲
- 关键词：弯杆菌表面蛋白蛋白质细胞融合
- 文献传递
- 牛分枝杆菌Spoligotyping和VNTR-MIRU的基因分型研究
- 为了探讨间隔区寡核苷酸分型(Spacer oligotyping,Spoligotyping)和数目可变串联重复序列-结核分枝杆菌散在分布重复单元(variable number tandem repeats-mycob...
- 杜艳芬林靖凯刘思国王春来刘慧芳司微王聃赵海玲
- 关键词：牛分枝杆菌SPOLIGOTYPINGVNTR基因分型
- 文献传递
- 胎儿弯杆菌病TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立
- 本文根据胎儿弯杆菌毒力因子表面蛋白(SapA)的基因序列设计引物和一条特异的TaqMan水解探针，建立了一种敏感、特异、重复性好的快速检测胎儿弯杆菌的TaqMan荧光定量PCR方法。对该方法的特异性与敏感性研究结果显示，...
- 赵海玲刘慧芳杜艳芬司微王春来刘思国
- 关键词：免疫学检验蛋白基因荧光PCR检测
- 文献传递
- 牛分枝杆菌Spoligotyping和VNTR-MIRU的基因分型研究
- 为了探讨间隔区寡核苷酸分型(Spacer oligo-typing,Spiligotyping)和数目可变串联重复序列-结核分枝杆菌散在分布重复单元(Variable number tan-dem repeats-myc...
- 杜艳芬林靖凯刘思国王春来刘慧芳司微王聃赵海玲
- 文献传递
- 胎儿弯杆菌病TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：3
- 2009年
- 为建立胎儿弯杆菌(C.fetus)定量检测方法,本研究根据C.fetus毒力因子表面蛋白(SapA)的基因序列设计引物和一条特异的TaqMan水解探针,建立了一种敏感、特异、重复性好的快速检测C.fetus的TaqMan荧光定量PCR方法。对该方法的特异性与敏感性研究,结果显示,该方法检测C.fetus结果均为阳性,而非C.fetus均为阴性;对带有SapA基因的阳性质粒的检测敏感性为108拷贝～102拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,可敏感地检测到模板中13个拷贝的细菌DNA,其灵敏度是常规PCR方法的100倍。该方法具有简便、快速、特异性强、敏感性高等特点。该方法为C.fetus快速检测试剂盒的研制打下了良好的基础。
- 赵海玲刘慧芳杜艳芬司微王春来刘思国
- 关键词：实时荧光PCR
- 牛分枝杆菌Spoligotyping和VNTR-MIRU的基因分型研究被引量：1
- 2009年
- 为了探讨间隔区寡核苷酸分型(Spoligotyping)和数目可变串联重复序列-结核分枝杆菌散在分布重复单元(VNTR-MIRU)基因分型法用于国内牛分枝杆菌的基因分型研究,初步了解我国牛分枝杆菌基因型种类、分布以及2种方法在我国应用的可行性。本研究收集东北、西北、华北、华南4个地区分离的10株牛分枝杆菌分离株,分别采用Spoligotyping和VNTR-MIRU对这些分离株进行基因分型,比较两种方法的分型效果,评价其在牛分枝杆菌基因分型中的应用。结果表明,使用Spoligotyping方法,10株牛分枝杆菌呈现出4种基因型,使用VNTR-MIRU方法,10株分离株也呈现4种基因型;当两种方法联合使用时,可以分为5种基因型,其中的2个菌株具有独特的基因型,显示来自不同地区的牛分枝杆菌存在主要的流行型为BCG家族。将Spoligotyping和VNTR-MIRU联合使用,可有效提高牛结核病的分子流行病学调查和病原学的监测效果。
- 杜艳芬林靖凯刘思国王春来刘慧芳司微王聃赵海玲
- 关键词：牛分枝杆菌SPOLIGOTYPINGVNTR基因分型
