邓婧
- 作品数：13 被引量：15H指数：2
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- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 抗博尔纳病病毒磷蛋白多克隆抗体的制备及鉴定被引量：2
- 2013年
- 目的制备抗博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)重组磷蛋白(p24)多克隆抗体,并对其进行鉴定,为BDV血清免疫学检测方法的建立奠定基础。方法用本课题组前期制备的重组BDVp24蛋白经背腿部多点皮下注射免疫新西兰大白兔,共免疫4次,末次免疫后第7天采血,分离血清,采用抗原亲和纯化法纯化抗血清,ELISA法测定抗血清效价;Western blot和免疫荧光鉴定其特异性。结果制备的抗BDV p24多克隆抗体的纯度为98%,ELISA效价达1∶128 000,该抗体与重组p24蛋白和BDV感染OL细胞表达的p24蛋白均能发生特异性反应。结论成功制备了灵敏性和特异性良好的抗BDV p24多克隆抗体,为研发相关的诊断试剂和研究该病毒的感染发病机制奠定了基础。
- 马丽华黄荣忠张亮徐晓艳曾粒刘钊邓婧李文娟谢鹏
- 关键词：博尔纳病病毒磷蛋白类多克隆抗体
- 博尔纳病病毒磷蛋白的原核表达及纯化
- 2011年
- 目的构建博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)磷蛋白(p24蛋白)基因重组表达质粒,原核表达p24蛋白,并进行纯化。方法通过RT-PCR法从BDV感染的少突胶质细胞株(Oligodendrocyte,OL)中扩增p24基因片段,构建重组表达质粒pET-41a-p24,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,并对表达的重组蛋白进行亲和层析纯化。结果经双酶切鉴定和测序证实,重组表达质粒pET-41a-p24构建正确;表达的重组p24蛋白相对分子质量约24 000,表达量占菌体总蛋白的30%以上,主要以可溶形式表达;纯化的重组蛋白纯度达85%左右,可与鼠抗BDV p24单克隆抗体特异性结合。结论已成功原核表达并纯化了重组BDV p24蛋白,为进一步建立BDV相关免疫学检测方法奠定了基础。
- 金戈张亮徐晓艳黄荣忠马丽华邓婧李文娟房亮谢鹏
- 关键词：博尔纳病病毒磷蛋白类原核细胞纯化
- 博尔纳病病毒对人少突胶质细胞增殖与凋亡的影响被引量：5
- 2012年
- 目的探讨博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)感染对人少突胶质细胞(oligodendrocytes,OL)增殖与凋亡的影响。方法用BDV感染OL细胞,免疫荧光检测OL细胞中博尔纳病病毒P40蛋白的表达,CCK8测定法观察细胞的生长增殖情况,用流式细胞技术检测细胞的凋亡情况和周期变化,Western blot检测凋亡指标Bax、Bcl-2的相对表达量。结果与阴性对照组细胞比较,感染组在博尔纳病病毒感染少突胶质细胞第3天时,免疫荧光能够检测到P40蛋白的表达。随着感染时间的增加,BDV感染的OL细胞增殖能力下降(P<0.05),且通过流式细胞仪检测到病毒感染3 d后,细胞出现凋亡增多。流式细胞仪检测结果显示,与对照组比较,感染细胞周期G2期延迟(P<0.05),细胞增殖指数降低(P<0.05)。Western blot检测结果显示,与对照组比较,感染细胞促凋亡蛋白Bax表达量增加(P<0.05),抑凋亡蛋白Bcl-2表达量下降(P<0.05)。结论 BDV感染可以抑制OL细胞增殖,并能通过上调Bax蛋白及下调Bcl-2蛋白表达量,诱导细胞凋亡的发生。
- 邓婧李丹张亮黄荣忠李文娟马丽华房亮谢鹏
- 关键词：博尔纳病病毒少突胶质细胞细胞增殖细胞凋亡
- 博尔纳病病毒荧光定量PCR试剂盒扩增缓冲液的优化
- 2011年
- 目的选择并优化博尔纳病病毒荧光定量PCR TaqMan探针法反应体系中的扩增缓冲液,使PCR反应体系对该病毒p24模板基因的扩增效率得到明显提高。方法通过常规PCR比较选择3种常用酸(盐酸、磷酸和硫酸)所滴定的缓冲液体系,在其基础上选择适合浓度的硫酸铵配制TSS buffer,在TSS buffer中分别加入四甲基氯化铵、TritonX-100、二甲亚砜和甜菜碱这4种常用的PCR添加剂,并确定各自的最佳工作浓度,选择扩增效果较好的添加剂与其他添加剂进行依次组合,寻找最佳的添加剂组合,最后用荧光定量PCR进行对比验证。结果在滴定酸上选择了效果最好的硫酸,配制TSS buffer硫酸铵的最佳终浓度为6 mmol/L。在添加剂的优化组合上,1.5 mol/L甜菜碱、0.15%Triton X-100、8 mmol/L四甲基氯化铵和TSS buffer组合成的TBTT buffer效果最佳,在其与TaKaRa PCR buffer的对比中,TBTT buffer效果明显好于后者。结论 成功研制优化出适合扩增博尔纳病病毒p24模板基因的扩增缓冲液。
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- 关键词：博尔纳病病毒
- Sema7A在癫痫中的作用及机制研究
- 第一部分：Sema7A在颞叶癫痫患者及戊四氮癫痫模型大鼠脑组织中的表达研究 目的：主要检测 Sema7A 在颞叶癫痫患者脑组织标本以及戊四氮点燃癫痫模型大鼠脑组织标本中的表达情况。 方法： 1. 从临床收取的诊断为...
- 邓婧
- 关键词：癫痫神经炎症苔藓纤维
- 博尔纳病病毒p24和p40基因星形胶质细胞特异表达重组质粒的构建
- 2012年
- 目的构建星形胶质细胞特异性表达的博尔纳病病毒磷蛋白和核蛋白基因重组质粒,以供后续实验研究使用。方法用PCR方法扩增BDV p24和p40基因完整序列同时加入Nhe I和EcoR I酶切位点,将所得目的片段克隆至pMD18-T载体,再通过酶切连接将其连接至pCMvie-GFAP质粒中的GFAP启动子的下游,分别得到p24和p40重组质粒。用酶切、PCR以及测序3种方法鉴定重组质粒,并将质粒转染人胶质瘤细胞株(U251),采用免疫细胞化学方法检测目的蛋白表达。结果 pCMvie-GFAP-BDVp24和pCMvie-GFAP-BDVp40重组质粒经酶切、PCR鉴定可见目的条带位置与预期相符,经测序可见插入序列正确,质粒转染U251细胞后,经免疫细胞化学检测到目的蛋白表达。结论成功构建了pCMvie-GFAP-BDVp24和pCMvie-GFAP-BDVp40星形胶质细胞特异性表达质粒,为研究这两种病毒蛋白的致病机制及其对星形胶质细胞的影响提供了工具。
- 李文娟张亮邓婧金戈黄荣忠房亮谢鹏
- 关键词：博尔纳病病毒核蛋白磷蛋白星形胶质细胞
- 博尔纳病病毒磷蛋白细胞模型的构建与鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的建立博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)磷蛋白的细胞模型,并对所建模型进行鉴定。方法重新扩增和鉴定已有的BDV磷蛋白(GFP-P24)质粒,使用转染试剂将该质粒转入PC12细胞,并用荧光定量PCR和ELISA的方法对所构建的细胞模型进行鉴定。结果重新扩增的质粒PCR鉴定阳性,其浓度符合转染的需要,测序后未发现核苷酸的突变;转染PC12细胞的效率高,荧光定量PCR和ELISA检测均为阳性。结论成功构建了BDV磷蛋白的细胞模型,为研究BDV感染过程中磷蛋白所起的作用奠定了基础。
- 李雷雷徐鸣明张亮宋哲徐帆邓婧汪洋谢鹏
- 关键词：博尔纳病病毒磷蛋白细胞模型
- 普芦卡必利治疗功能性便秘的疗效观察
- 目的：观察普芦卡必利治疗功能性便秘(FC)的临床疗效及安全性。方法：选取符合罗马-Ⅲ诊断标准的FC女性患者87例,给予普芦卡必利2mg, qd,采用前瞻性自身对照研究,总疗程为4周,观察患者服用普芦卡必利治疗前后其排便次...
- 邓婧
- 关键词：功能性便秘临床疗效
- 文献传递
- 不同血清浓度培养条件对博尔纳病病毒感染滴度的影响比较被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨不同血清浓度对博尔纳病病毒(BDV)感染少突胶质细胞(OL细胞)感染力的影响,寻找BDV病毒感染细胞最适宜的血清浓度。方法:接种BDV的OL细胞(OL/BDV)于培养皿中,培养24小时后,通过反复冻融、超声破碎的方法获取BDV病毒液,用于感染正常的OL细胞。在保证除血清浓度因素不同而其余因素均相同的条件下,用DMEM、2%FCS、5%FCS、10%FCS四种不同浓度的血清培养基在96孔板中培养BDV新感染的OL细胞,测定病毒感染滴度,比较各组之间是否有统计学差异。结果:DMEM、5%FCS和10%FCS组所测得的BDV病毒滴度两组之间无统计学差异,2%FCS组所测得的病毒滴度和DMEM、5%FCS、0%FCS组之间有明显统计学差异,2%FCS组病毒滴度明显高于其它两组。结论:不同浓度的血清浓度对Boma病毒对细胞的感染力有影响,2%FCS的培养条件可能更适合于BDV感染OL细胞实验。
- 邓婧黄荣忠李文娟张亮刘霞马丽华金戈徐晓艳房亮谢鹏
- 关键词：博尔纳病病毒少突胶质细胞血清浓度病毒滴度
- 抗博尔纳病病毒核蛋白单克隆抗体的制备和鉴定被引量：5
- 2012年
- 目的制备并鉴定鼠抗博尔纳病病毒核蛋白单克隆抗体。方法重组核蛋白免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行常规融合,用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤并进行有限稀释法克隆和亚克隆,建立分泌抗核蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,纯化单克隆抗体并进行效价测定和特异性鉴定。结果建立了1株能稳定分泌抗核蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为2F6E8,重链为IgG2a,轻链为κ。ELISA法测得腹水的效价高达1∶32 000以上。Western-blot和间接免疫荧光实验证实该单克隆抗体能特异性结合重组核蛋白及天然核蛋白。结论成功制备了效价高、特异性好的抗核蛋白单克隆抗体,为建立博尔纳病病毒血清免疫学检测方法奠定了基础。
- 徐晓艳金戈张亮李文娟邓婧马丽华黄荣忠房亮谢鹏
- 关键词：博尔纳病病毒核蛋白单克隆抗体
