郝洁
- 作品数：30 被引量：68H指数：5
- 供职机构：北京大学基础医学院免疫学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部“985工程”更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学生物学政治法律更多>>
- 转染IL-6基因骨髓基质细胞系对骨髓移植后免疫功能重建的促进作用被引量：3
- 2002年
- 目的 探讨转染IL 6基因的骨髓基质细胞系对同基因骨髓移植 (BMT)后小鼠免疫功能重建的促进作用。方法 将IL 6cDNA片段连接到pcDNA3真核表达载体上。用脂质体将pcD NA3IL 6转入骨髓基质细胞系QXMSC1,ELISA法测定转染IL 6基因骨髓基质细胞QXMSC1IL 6培养上清中IL 6的含量 ,有限稀释挑选多个细胞克隆 ,选择表达量最高的转基因细胞系QXMSC1IL 6用于动物实验。BABL c小鼠经γ射线致死量照射后 ,输入同基因骨髓细胞 (10 7 只 )同时输入骨髓基质细胞QXMSC1IL 6 (5× 10 5 只 )。在骨髓移植后 30d、6 0d检测BMT小鼠淋巴细胞对LPS ,ConA增殖反应 ,T辅助细胞前体 (helpTlymphocyteprecursor,HTLp) ,杀伤性T细胞前体 (cytotoxicTlymphocyteprecursor,CTLp) ,迟发型超敏反应 (delayed typehypersensitivity ,DTH)及空斑形成细胞数 (plaqueformingcell,PFC) ,反映骨髓移植后小鼠免疫功能。结果 成功构建pcDNA3IL 6重组体。该细胞体外培养 2 4h分泌IL 6的含量为 11.15 (± 2 .4 1) μg 10 6 。QXMSC1IL 6细胞系能明显增强BMT后淋巴细胞对LPS、ConA反应性 ,小鼠对异基因小鼠脾细胞DTH反应增强 ,脾脏中HTLp ,CTLp及PFC数明显增加。转入外源IL 6cDNA基因的骨髓基质细胞系QXMSC1IL 6在体内能明显促进BMT后小鼠T、B淋巴?
- 秦凤华蒋激扬金永柱郝洁谢蜀生
- 关键词：骨髓移植骨髓基质细胞免疫重建
- CTLA4Ig-IRES-OX40Ig重组腺病毒的构建及其生物学特性
- 2005年
- 利用基因重组技术,拼接目的基因CTLA4Ig-IRES-OX40Ig,并亚克隆入腺病毒载体pTrack-CMV中,构建pT/CTLA4Ig-IRES-OX40Ig载体,与pAdeasy-1共同转染BJ5183以进行同源重组,所获得的重组子用LipofectAMINE2000转染293A细胞包装病毒,获得了可同时分别表达CTLA4Ig和OX40Ig的重组腺病毒AdCTLA4Ig-IRES-OX40Ig,并进行扩增和滴度测定,用Western印迹鉴定293A细胞培养上清中目的基因的表达,用混合淋巴细胞反应研究其免疫抑制活性.利用上述方法成功构建了穿梭质粒pT/CTLA4Ig-IRES-OX40Ig;并且获得了重组腺病毒AdCTLA4Ig-IRES-OX40Ig,在感染的293A细胞的培养上清中可以同时检测到CTLA4Ig和OX40Ig分子;AdCTLA4Ig-IRES-OX40Ig、AdCTLA4Ig和AdOX40Ig感染的Lewis大鼠脾细胞(刺激细胞)对Balb/c小鼠的脾细胞(反应细胞)的增殖均具有抑制作用,但AdCTLA4Ig-IRES-OX40Ig感染组的抑制效率明显强于AdCTLA4Ig和AdOX40Ig感染组,体外实验证实该两种分子可协同作用,强烈抑制混合淋巴细胞反应.
- 王光明杨阳李爱玲郝洁高翔谢蜀生
- 关键词：CTLA4IG重组腺病毒
- 当归补血汤对骨髓移植小鼠免疫功能重建的影响
- 2008年
- 目的研究当归补血汤（DBT）对骨髓移植小鼠免疫功能重建作用的影响。方法BALB／c小鼠一次性接受全身^137Csγ线致死量照射8．5Gy，照射后0～4h内经尾静脉输注同基因骨髓细胞10^7／只，同时给于不同剂量DBT，每日灌胃1次，连续15d。于骨髓移植后30、60d，检测以下指标：外周血红细胞（RBC）、白细胞（WBC）计数，骨髓有核细胞计数，胸腺、脾细胞总数和相应淋巴细胞亚类，以及反映免疫细胞功能的迟发型超敏反应（DTH）、空斑形成细胞数（PFC）等。结果经一定剂量DBT治疗的骨髓移植小鼠，其外周血中RBC、WBC计数，骨髓有核细胞计数，脾细胞和胸腺细胞总数，胸腺内各类细胞[双阴性细胞（DN）、双阳性细胞（DP）、单阳性细胞（SP）]的百分比值，与单纯骨髓移植小鼠比较差异有统计学意义（P〈0．05），并且淋巴细胞的功能也得到进一步增强。到移植后60d，其各项指标进一步恢复。结论当归补血汤可以促进骨髓移植小鼠免疫功能的恢复。
- 袁国红崔龙郝洁高翔谢蜀生
- 关键词：当归补血汤骨髓移植免疫重建
- 定式合同——不公平条款立法规制之研究
- 本文对定式合同的相关理论，尤其是定式合同中不公平条款的立法规制问题作了较为全面、系统的阐述，结合世界各国定式合同立法和实践的发展与现状着重论述了我国应采取的对不公平条款进行立法规制的模式和相应规则。全文共分三部分: 第...
- 郝洁
- 关键词：定式合同不公平条款法律规制
- 抗TCRαβ单抗联合供体骨髓细胞输注诱导小鼠皮肤移植耐受的研究被引量：2
- 2004年
- 探讨抗TCRαβ单克隆抗体联合大剂量供体骨髓细胞输注方法对同种异基因小鼠皮肤移植耐受诱导的促进作用。第 0天 ,C5 7BL/ 6 (H 2 b,B6 )小鼠尾静脉注入 2× 10 8BALB/c (H 2 d,B/c )来源的骨髓细胞 ,同时腹腔注射抗TCRαβ单克隆抗体5 0 0 μg ;第 6天进行皮肤移植 ;在不同的时间对B6小鼠进行迟发型超敏反应 (DTH )、混合淋巴细胞反应 (MLR )等耐受状态进行检测 ,并进行MLR的IL 2逆转实验、过继转移实验和嵌合状态分析以初步探讨耐受形成机制。结果显示 ,经抗TCRαβ单克隆抗体联合大剂量供体骨髓细胞输注处理的B6小鼠的供体皮肤移植物平均存活 5 0 4d ,显著长于其他各组 (P <0 0 0 1)。相对于正常对照组小鼠 ,耐受B6小鼠在DTH和MLR中均表现出显著的低反应性 (P <0 0 0 1)。IL 2逆转实验结果表明克隆无能参与了移植耐受的形成。体内、外过继转移实验均显示耐受B6小鼠脾细胞中存在抑制细胞活性。嵌合体检查结果表明在耐受B6小鼠的胸腺和脾脏中均形成了混合嵌合体 ,在皮肤移植后第 15、 30和 70天时脾脏内供体来源嵌合体水平依次为 15 86 % ,10 5 7%和 1 77% ,胸腺中依次为 8 19% ,5 72 %和 1 87% ,嵌合体水平随时间而下降。这些表明 ,抗TCRαβ单抗联合大剂量供体骨髓细胞输注可以在异基因成年小?
- 马建波刘家望李爱玲王光明郝洁谢蜀生
- 关键词：骨髓细胞输注皮肤移植移植耐受
- 转IL-3基因骨髓基质细胞对异基因骨髓移植后小鼠造血重建的促进作用被引量：4
- 2002年
- 目的 探讨转IL 3基因的小鼠骨髓基质细胞系QXMSC1对异基因骨髓移植 (allo BMT)小鼠造血功能的促进作用。方法 用重组逆转录病毒载体 (含小鼠IL 3cDNA)感染骨髓基质细胞系QXMSC1(H 2 d) ,构建骨髓基质细胞系QXMSC1IL 3,挑选表达量最高的骨髓基质细胞系QXMSC1IL 3用于以后实验。供体小鼠BALB c(H 2 d)骨髓用抗T细胞单抗anti Thy1.2加补体去除骨髓中T细胞。受体小鼠C5 7BL 6 (H 2 b)经γ射线致死量照射后 ,输入供体骨髓细胞 (1× 10 7 只 )的同时输入QXMSC1IL 3(5× 10 6 只 )细胞。在骨髓移植后第 2 0 ,4 0天 ,分别检测受体小鼠外周血红细胞、白细胞、骨髓有核细胞数 ,CFU S、CFU GM、CFU E和CFU GEMM数以反映骨髓移植后受体小鼠的造血功能。结果 QXMSC1IL 3细胞系可稳定分泌IL 3。allo BMT同时输入QXMSC1IL 3细胞可使allo BMT小鼠外周血红细胞、白细胞明显恢复 ,骨髓中有核细胞数、CFU S、CFU GM、CFU E、CFU GEMM明显增加。结论 基质细胞QXMSC1可作为有效的基因载体进一步促进allo BMT小鼠造血功能重建。
- 蒋激扬张敬妹郝洁谢蜀生
- 关键词：骨髓基质细胞异基因骨髓移植小鼠造血重建白细胞介素-3
- 重组腺病毒AdCTLA4-FasL联合供者骨髓细胞输注促进混合嵌合体形成和小鼠皮肤移植耐受被引量：2
- 2005年
- 在不对受体去髓处理的情况下,用重组腺病毒AdCTLA4-FasL结合供者骨髓移植诱导混合嵌合体和同种皮肤移植耐受,结果显示,获得了持久宏嵌合体(macrochimerism)(140d时,供体细胞>20%).同时,这种嵌合体促进了稳定的供体特异性耐受,BALB/c小鼠的皮肤移植物在B6受体小鼠中长期存活(平均存活时间(themeansurvivaltime,MST)大于200d),而来源于ICR小鼠的第三者皮肤移植物被该嵌合体小鼠正常排斥.用该方法处理的B6小鼠在接受皮肤移植14d后,辅助性T淋巴细胞前体(HTLp)和细胞毒T淋巴细胞前体(CTLp)的频数降低到很低的水平,表明AdCTLA4-FasL能够迅速促进全面的外周耐受,从而有利于供体骨髓细胞植入.接受皮肤移植140d后,供体皮肤仅在形成长期嵌合体的受体小鼠中继续存活,这些小鼠体内供体特异性的HTLp和CTLp的频数减少,提示长期的皮肤移植物耐受与稳定的混合嵌合体有关,中枢性T细胞删除可能是耐受维持的主要机制.
- 奉友刚王光明郝洁李爱玲袁国红李翀曾甫清谢蜀生
- 关键词：移植耐受混合嵌合体CTLA4-FASL重组腺病毒嵌合体耐受
- 腺病毒载体介导的CTLA4-Ig基因转移促进异基因小鼠皮肤移植耐受被引量：5
- 2004年
- 目的 探讨CTLA4 Ig重组腺病毒 (AdCTLA4 Ig)促进“脾细胞 (spleencells ,SP) +环磷酰胺 (cyclophosphamide ,CP)”系统诱导移植耐受的作用及其机制。方法 BALB c(H 2 d)小鼠经尾静脉注射C57BL 6(H 2 b,B6)小鼠脾细胞和AdCTLA4 Ig颗粒 ,48h后腹腔注射环磷酰胺 ,并同天进行皮肤移植 ,于耐受 2 5d时对受体小鼠进行混合淋巴细胞反应 (mixedlymphocytereaction ,MLR)、迟发型超敏反应 (delayedtypehypersensitivity ,DTH)等耐受状态的检查。结果 B6小鼠的皮肤移植物在耐受的BALB c小鼠中存活期特异延长。MLR和DTH检验证明BALB c小鼠对B6小鼠的脾细胞产生特异性耐受 ,对无关第三者ICR小鼠的脾细胞仍表现出强烈免疫应答。结论 AdCTLA4 Ig颗粒可以明显促进“细胞 +环磷酰胺”诱导的异基因皮肤移植耐受 ;
- 马建波郝洁王光明李爱玲张庆殷金永柱谢蜀生
- 关键词：皮肤移植基因转移
- CTLA4Ig和OX40Ig的表达及其生物学活性研究被引量：3
- 2005年
- 目的 构建p3.1 /CTLA4Ig- IRES- OX4 0Ig真核表达载体,共同表达CTLA4Ig和OX4 0Ig,通过体外实验初步研究其生物学特性。方法 通过特异引物扩增OX4 0胞外区的cDNA ,经酶切、亚克隆、拼接构建了真核表达载体p3.1/ CTLA4Ig IRES- OX4- 0Ig,并使之在体外进行表达,用RT- PCR、SDS- PAGE和Westernblot鉴定目的基因的表达,ELISA法测定目的基因的表达水平和混合淋巴细胞反应研究其抑制免疫应答的效应。结果 测序证实所扩增的PCR产物是OX4 0胞外区的cDNA ,其序列与GenBank中的相一致;成功构建了p3.1 -CTLA4Ig IRES- OX4 0Ig真核表达载体;RT -PCR、SDS -PAGE和Westernblot结果显示,表达的蛋白为CTLA4Ig和OX4 0Ig ,ELISA结果提示,该两种蛋白均得到了高效表达,混合淋巴细胞反应结果证实转染了p3.1/ CTLA4Ig- IRES- OX4 0Ig的CHO细胞培养上清可以有效地抑制异基因淋巴细胞的刺激作用,其抑制效果强于转染p3.1 /CTLA4Ig和p3.1 /OX4 0Ig的CHO细胞培养上清。结论 成功构建了含CTLA4Ig和OX4 0Ig的真核表达载体,并在体外能够同时得到表达;体外实验证实该两种分子协同作用可以有效抑制免疫应答,并且优于该两种分子单独作用时的抑制效果。
- 王光明杨阳李爱玲郝洁高翔谢蜀生
- 关键词：CTLA4IG生物学活性ELISA法T细胞器官移植排斥
- 腺病毒介导的CTLA4Ig和OX40Ig基因转移诱导大鼠心脏移植物长期存活的作用被引量：5
- 2005年
- 目的探讨腺病毒介导CTLA4Ig和OX40Ig基因转移延长异基因大鼠心脏移植物存活时间的作用及其相关机制.方法将Lewis大鼠随机分为5组:对照组、空载病毒AdEGFP处理组、AdCTLA4Ig处理组、AdOX40Ig处理组和AdCTLA4Ig-IRES-OX40Ig处理组.在心脏移植的同时,对照组不予其他处理,其他各组分别经尾静脉注射(1～5)×109 pfu/ml AdEGFP、AdCTLA4Ig、AdOX40Ig、AdCTLA4Ig-IRES-OX40Ig进行耐受诱导,每天观察心脏移植物的存活情况,完全停跳的心脏经组织学证实后定为排斥.ELISA法测定目的基因的表达水平.混合淋巴细胞反应、过继转移实验、IL-2逆转实验和RT-PCR检测研究其诱导耐受的机制.结果心脏移植物的平均存活时间AdCTLA4Ig-IRES-OX40Ig处理组(151.5 d±42.8 d),AdCTLA4Ig处理组(43.2 d±11.1 d),AdOX40Ig 处理组(60.2 d±11.4 d)与对照组(5.7 d±0.5 d)和空载病毒AdEGFP处理组(5.2 d±0.4 d)比较明显延长(P均<0.01),并且AdCTLA4Ig-IRES-OX40Ig处理组在延长移植物存活时间上明显优于AdCTLA4Ig和AdOX40Ig处理组(P均<0.01).耐受Lewis大鼠脾细胞对供体DA大鼠脾细胞表现为低应答,并且该低应答状态能够被外源性白细胞介素-2(IL-2)部分逆转.过继转移结果说明该低应答状态能够转移给同系正常Lewis大鼠.在耐受大鼠体内发生了Th1/Th2型细胞因子偏移.结论 AdCTLA4Ig-IRES-OX40Ig介导的基因转移能够在大鼠体内长期高效表达,并诱导异基因心脏移植物长期存活,其机制可能与T细胞无能、Th1/Th2型细胞因子偏移及其调节性T细胞等有关.
- 王光明孙涛张元元袁国红奉友刚郝洁高翔谢蜀生
- 关键词：心脏移植CTLA4IG
