黄健
- 作品数:1 被引量:0H指数:0
- 供职机构:昆明医学院第二附属医院更多>>
- 发文基金:“重大新药创制”科技重大专项更多>>
- 相关领域:生物学更多>>
- 恒河猴白细胞介素-4基因的合成、原核表达及纯化
- 2011年
- 目的人工合成恒河猴白细胞介素-4(Macaca mulatta Interleukin-4,Mamu IL-4)基因,并在大肠杆菌中高效表达及纯化。方法根据大肠杆菌遗传密码偏爱性优化设计并人工合成Mamu IL-4(mIL-4)基因,克隆入pET43.1a(+)表达载体,构建重组表达质粒pET43.1a-mIL-4,转化大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL,经IPTG诱导表达。通过阳离子交换层析及稀释复性等步骤对表达的重组mIL-4蛋白进行纯化,纯化产物经Western blot进行鉴定。结果双酶切及测序证实重组表达质粒pET43.1a-mIL-4构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为15 000,表达量约占菌体总蛋白的40%,主要以包涵体形式存在,经纯化复性后纯度可达95%以上;Western blot检测其能与鼠抗mIL-4单克隆抗体特异性结合。结论 在大肠杆菌中高效表达了重组mIL-4蛋白,纯化的蛋白纯度较高,为其生物学活性及佐剂的相关研究奠定了基础。
- 陈丹刘娟黄健刘新颖王冉史洪娜王维龙沈林李鼎锋
- 关键词:恒河猴白细胞介素-4基因合成原核细胞纯化