丁国富
- 作品数：38 被引量：54H指数：5
- 供职机构：第三军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划重庆市科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 青霉素结合蛋白2a C-末端在大肠杆菌M15中的表达、纯化及鉴定被引量：2
- 2007年
- 目的构建含目的基因mecA C末端的重组子并在大肠杆菌M15中进行蛋白表达。方法采用PCR方法扩增mecA C末端DNA,将其与表达载体pQE30连接;再通过PCR及双酶切鉴定连接产物。将含目的基因片段的阳性重组质粒转化大肠杆菌M15后,用1mmol／L的IPTG进行诱导表达。应用Ni-NTA琼脂糖进行亲和层析纯化目的蛋白,并用SDS-PAGE和Western blotting对表达产物进行鉴定。结果成功构建pQE30-mecA重组表达质粒,转化大肠杆菌M15,经IPTG诱导表达,亲和层析纯化获得分子量为39．7kDa的蛋白;Western blotting和肽指纹图谱证实该蛋白为带有多聚组氨酸标签的融合蛋白。结论在大肠杆菌内成功表达具有活性的PBP2a,为后期研究和开发抗MRSA药物奠定了基础。
- 和生琦丁国富李斌李军罗平董燕张蓉颜伟周红
- 关键词：金黄色葡萄球菌青霉素结合蛋白2A大肠杆菌MECA基因
- 老药新用——氯喹治疗SIRS的作用研究进展被引量：1
- 2003年
- 周红丁国富
- 关键词：氯喹SIRS全身性炎症反应综合征炎性介质
- 人TLR9受体LRR8片段在大肠杆菌中的重组表达
- 目的:通过原核表达获得携带6xHis标签的LRR8重组蛋白,以研究其在TLR9受体与CpG DNA识别与结合过程中所起的作用。方法将LRR8 cDNA片段亚克隆到pQE30载体上,获得pQE0-LRR8载体:将pQE0-...
- 潘夕春丁国富周红
- 拮抗细菌DNA的CpG-N ODN筛选被引量：2
- 2007年
- 目的在抑制性CpG寡核苷酸(CpG-NODN)分子设计的基础上,选择部分序列加以合成并对其生物学活性进行鉴定,筛选出能够拮抗细菌DNA的CpG-NODN。方法对合成的10条CpGODN进行生物学活性的初筛和复筛,观察其自身的刺激性及其对CpG-SODN诱导的TNF-α释放的抑制作用。使用RNAstructureversion3.71预测CpGODN的二级结构及自由能,根据10条CpGODN构效关系分析结果,对CpG-NODN分子进行再设计,并从中选择11个序列进行生物活性的筛选。结果首次合成的10条CpGODN仅1条是对细菌DNA拮抗作用较弱的CpG-NODN。通过对其构效关系进行分析,推测CpGODN的生物活性可能与自由能相关。在此基础上对CpG-NODN分子进行了再设计,合成的11条CpGODN中有5条是拮抗作用较强的CpG-NODN。结论获得了6条CpG-NODN。CpGODN的生物活性可能与自由能密切相关。
- 王良喜鲁永玲丁国富罗平周红
- 关键词：DNACPG基序分子设计
- 基于人TLR9受体功能区片段LRR11的新型多肽及其应用
- 本发明涉及一种基于人TLR9受体功能区片段LRR11的新型多肽，该多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。本发明所述的基于人TLR9受体功能区片段的新型多肽(LRMs)具有抑制CpG DNA刺激小鼠腹腔巨噬细胞释放...
- 周红丁国富李斌潘夕春郑江
- 文献传递
- 甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌临床分离株青霉素结合蛋白2a的克隆表达及鉴定被引量：3
- 2007年
- 目的 应用基因重组技术对编码甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌（MRSA）临床分离株青霉素结合蛋白2a（PBP2a）的mecA基因片段进行克隆、表达。方法 从临床样本巾分离鉴定出MRSA，根据基因文库收录的mecA基因编码序列，针对编码PBP2a第25～668位氨基酸的mecA基因片段设计引物，扩增目的基因片段，克隆至pQE30载体，经酶切鉴定、测序后，再转化E．coliM15（pREP4）。采用1mmol／L的异丙硫半乳糖苷（IPTG）进行诱导表达及鉴定。结果重组表达质粒pQE30-mecA构建成功，基因测序结果显示，扩增的mecA基因DNA片段全长为1932bp，其巾有9个碱基突变。IPTG诱导后6h，聚丙烯酰胺凝胶电泳显示，M15（pQE30-mecA）出现一条相对分子质量约74×10^3的蛋白条带，且一部分以可溶性形式存在；M15（pQE30）未出现特异性蛋白条带。经诱导表达和鉴定证实，表达出的可溶性目的蛋白为PBP2a。结论 利用本技术可成功表达MRSA临床分离株中的可溶性PBP2a。
- 董燕丁国富李斌和生琦颜伟周红王仙园
- 关键词：基因表达甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌
- 青蒿琥酯对热灭活大肠杆菌攻击小鼠的保护作用被引量：5
- 2007年
- 目的:观察青蒿琥酯(Artesunate,AS)对热灭活大肠杆菌攻击小鼠的保护作用以及对热灭活大肠杆菌诱导小鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α和IL-6的影响。方法:采用尾静脉注射LD90剂量的热灭活大肠杆菌攻击小鼠,于注射热灭活大肠杆菌后0、4、24、48h重复肌肉注射AS,观察给药后7d内小鼠的死亡率;体外培养小鼠腹腔巨噬细胞,培养体系中预先加入不同浓度AS2h后,观察AS对热灭活大肠杆菌诱导小鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α和IL-6情况。结果:AS可明显推迟热灭活大肠杆菌攻击小鼠的死亡时间,并降低小鼠死亡率,死亡率由100%降低至50%(P<0.05)。预先加入的AS能明显抑制热灭活大肠杆菌诱导的小鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α和IL-6,并呈明显量效关系。MTT实验结果显示24h内AS对细胞活力无影响。结论:AS对热灭活大肠杆菌攻击小鼠具有显著保护作用,该保护作用可能与其明显抑制促炎细胞因子释放有关。
- 张蓉李斌张乐之李军丁国富和生琦罗平周红
- 关键词：青蒿琥酯小鼠腹腔巨噬细胞肿瘤坏死因子-Α白细胞介素-6
- CpG ODN107增强人脑胶质瘤细胞放射敏感性的研究被引量：9
- 2007年
- 目的:探讨CpG ODN107增加人脑胶质瘤细胞CHG-5放射敏感性的作用及可能机制。方法:用不同浓度CpG ODN107处理CHG-5细胞,然后经β射线照射,MTT法检测细胞的增殖情况,体外培养集落形成率与细胞划痕法观察细胞的集落形成和迁移能力,ELISA法检测细胞TNF-α的分泌水平。结果:CpG ODN107抑制CHG-5细胞的增殖,并呈量效关系。CpG ODN107(10μg/ml)联合β射线照射,抑制CHG-5细胞的增殖作用最强。CpG ODN107(10μg/ml)同样能抑制CHG-5细胞增殖和迁移,并且增加了TNF-α的分泌,在联合β射线照射后作用更加显著。结论:CpG ODN107对CHG-5有明显的放射增敏作用,其机制可能与CpG ODN107增强肿瘤细胞TNF-α的分泌有关。
- 颜伟丁国富李斌董燕李军和生琦罗平周红庞学利
- 关键词：CPCCHG-5
- 氯喹对内毒素、细菌DNA诱导的TLR4、TLR9表达的作用研究
- 2003年
- 王良喜周红丁国富鲁永玲罗平李军
- 关键词：氯喹内毒素细菌DNA抗疟药
- 人TLR9受体胞外段识别CpG DNA的LRR序列和胞内段新功能的实验研究
- 目的: 本课题深入分析TLR9胞外段与胞内段空间结构和生物学活性;应用细菌生长抑制实验推测LRRs在识别CpG DNA中的作用;合成LRR多肽，观察其与CpG DNA的亲合力以及生物学活性;为明确TLR9与CpG DNA...
- 丁国富
- 关键词：蛋白结构致病因子
- 文献传递
